本文關(guān)鍵詞：干擾熱休克轉(zhuǎn)錄因子2對THP-1細(xì)胞NLRP3炎癥復(fù)合體的影響

  更多相關(guān)文章： HSF2 慢病毒RNA干擾 THP-1細(xì)胞 NLRP3炎癥復(fù)合體 炎癥因子

【摘要】：目的：通過慢病毒(LV-HSF2-RNAi)干擾人巨噬細(xì)胞系(THP-1)內(nèi)HSF2的表達(dá),分析探討HSF2對THP-1細(xì)胞NLRP3炎癥復(fù)合體及其下游IL-1β的影響。方法：1.選用THP-1作為研究對象,使用慢病毒(LV-HSF2-RNAi)轉(zhuǎn)染THP-1,干擾其HSF2表達(dá),使用PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞；將細(xì)胞分為對照組與轉(zhuǎn)染組,使用LPS刺激細(xì)胞；2.凝膠電泳PCR檢測細(xì)胞NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β mRNA表達(dá)；3.Western Blot檢測細(xì)胞NLRP3、ASC、Caspase-1、pro IL-1β蛋白表達(dá)；4.Elisa檢測細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)IL-1β水平。結(jié)果：1、慢病毒(LV-HSF2-RNAi)轉(zhuǎn)染THP-1效果理想,轉(zhuǎn)染效率80%, Western blot檢測HSF2干擾效果佳,HSF2干擾組中HSF2蛋白表達(dá)明顯低于未轉(zhuǎn)染組和陰性對照組(P0.05)；2、PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化,LPS刺激后,在對照組、干擾組、干擾對照組凝膠電泳PCR檢測細(xì)胞NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、mRNA表達(dá)中,干擾組mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組及干擾對照組(P0.05)。3、PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化,LPS刺激后,在對照組、干擾組、干擾對照組Western Blot檢測細(xì)胞NLRP3、ASC、Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表達(dá)中,干擾組蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組及干擾對照組(P0.05)。4、PMA誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分化,LPS刺激后,在對照組、干擾組、干擾對照組Elisa檢測細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)IL-1β水平中,干擾組細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯高于對照組及干擾對照組(未轉(zhuǎn)染組：257.010±26.148；HSF2干擾組：538.800±52.250；陰性對照組：238.231±29.245 pg/ml), HSF2干擾組細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)IL-1β水平較陰性對照組及未轉(zhuǎn)染組明顯升高(P0.05)。結(jié)論：1.干擾HSF2后,在經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化,LPS刺激的THP-1細(xì)胞中,NLRP3炎癥復(fù)合體各組分(NLRP3、ASC、Caspase-1)及其下游pro-IL-1β mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯較未干擾HSF2的細(xì)胞增高。2.干擾HSF2后,NLRP3炎癥復(fù)合體下游IL-1β細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)水平明顯較未陰性對照組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增高,說明低水平HSF2可以提高巨噬細(xì)胞NLRP3炎癥復(fù)合體的活化程度,并增加其下游IL-1β的釋放。
【關(guān)鍵詞】：HSF2 慢病毒RNA干擾 THP-1細(xì)胞 NLRP3炎癥復(fù)合體 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-26
• 實驗結(jié)果26-39
• 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 研究經(jīng)費46
• 發(fā)表論文情況說明46-47
• 綜述47-66
• 參考文獻59-66
• 致謝66

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本文編號：678128