本文關(guān)鍵詞：雞尾酒療法作用肝纖維化大鼠的肝組織定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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【摘要】：目的：研究EGCG、Taurine 和 Genistein組成的雞尾酒作用肝纖維化大鼠后,分析和鑒定肝組織中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),探討雞尾酒療法抗肝纖維化作用的蛋白質(zhì)基礎(chǔ)及分子機(jī)制,以期為肝纖維化的診斷、治療和預(yù)后尋找可靠的生物標(biāo)志物并為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。方法：(1)以CCL4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型,在造模成功后給予雞尾酒藥物治療,分為中劑量組(�；撬�100mg/kg+EGCG15mg/kg+三羥基異黃酮10mg/kg)和高劑量組(牛磺酸200mg/kg+EGCG30mg/kg+三羥基異黃酮20mg/kg),用藥六周末,處死大鼠,取大鼠肝組織。(2)選取肝右葉相同部位組織經(jīng)10%甲醛固定,蠟塊包埋,HE染色,光學(xué)顯微鏡下應(yīng)用DMR+Q550圖像分析儀進(jìn)行病理學(xué)觀察；(3)提取肝組織蛋白,采用同位素iTRAQ試劑標(biāo)記CCL4模型組及雞尾酒的中、高劑量組的肝組織全蛋白,經(jīng)SCX分離和LC-ESI-MS/MS分析后,將得到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索鑒定差異表達(dá)的蛋白,利用生物信息學(xué)方法對(duì)差異蛋白進(jìn)行分析。結(jié)果：(1)病理結(jié)果顯示雞尾酒療法各劑量組大鼠肝纖維程度均有不同程度的減輕,肝小葉結(jié)構(gòu)基本完整；(2)以變化倍數(shù)大于1.5倍或者小于0.67倍的蛋白為差異表達(dá)蛋白的標(biāo)準(zhǔn),與CCl4模型組相比,雞尾酒組共鑒定到192種差異蛋白質(zhì),其中雞尾酒中劑量組共發(fā)現(xiàn)135個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì),55個(gè)下調(diào),80個(gè)上調(diào)；雞尾酒高劑量組共發(fā)現(xiàn)125個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì),36個(gè)下調(diào),89個(gè)上調(diào)。在兩個(gè)給藥劑量組與CC14模型組的比值中上、下調(diào)一致的差異蛋白共68個(gè),同時(shí)上調(diào)的蛋白46個(gè),同時(shí)下調(diào)的蛋白22個(gè)。通過(guò)對(duì)這些差異蛋白分別進(jìn)行GO、pathway和蛋白互作分析發(fā)現(xiàn)其參與翻譯后修飾、轉(zhuǎn)錄、重組和信號(hào)傳導(dǎo)通路等過(guò)程。結(jié)論：牛磺酸、EGCG和三羥基異黃酮組成的雞尾酒藥物作用肝纖維化的SD大鼠后,大鼠肝組織中參與重要生物信號(hào)途徑的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、Ras相關(guān)蛋白、Vit A結(jié)合蛋白、細(xì)胞色素P450、組織蛋白酶D、L蛋白等蛋白的表達(dá)發(fā)生改變。這些蛋白以及其參與的生物進(jìn)程途徑與肝纖維化密切相關(guān)、相互作用,共同抗肝纖維化。
【關(guān)鍵詞】：iTRAQ 雞尾酒療法 肝纖維化 差異表達(dá)蛋白
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-7
• 縮略詞表7-9
• 中文摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 第一部分13-68
• 前言13-16
• 第一章 材料與方法16-25
• 1 材料16-19
• (1) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• (2) 藥物的配置16
• (3) 試劑16-18
• (4) 儀器18-19
• 2 方法19-23
• (1) 大鼠分組及用藥19-20
• (2) 肝蛋白提取、定量及SDS-PAGE電泳20-21
• (3) 蛋白質(zhì)酶解和iXRAQ標(biāo)記21
• (4) 肽段液的相分離21
• (5) 蛋白質(zhì)的LC-ESI-MS/MS分析21-22
• (6) 蛋白質(zhì)鑒定和定量22
• (7) 生物信息學(xué)分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 技術(shù)路線23-24
• 實(shí)驗(yàn)流程圖24-25
• 第二章 結(jié)果25-52
• 1 肝組織病理學(xué)觀察分析25-26
• 2 肝組織樣品的定量及SDS-PAGE電泳結(jié)果26-28
• 3 雞尾酒療法作用于肝纖維化大鼠肝組織差異蛋白鑒定結(jié)果28-39
• 4 差異蛋白質(zhì)的G0分析39-44
• 5 差異蛋白質(zhì)的Pathway分析44-48
• 6 差異蛋白質(zhì)相互作用分析48-52
• 第三章 討論52-61
• 第四章 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-68
• 第二部分 文獻(xiàn)綜述68-93
• 1 肝纖維化69-70
• (1) 細(xì)胞外基質(zhì)與肝纖維化69-70
• (2) 肝星狀細(xì)胞與肝纖維化70
• 2 肝纖維化逆轉(zhuǎn)70-73
• (1) 肝纖維化的逆轉(zhuǎn)機(jī)制71
• (2) 肝纖維化的逆轉(zhuǎn)途徑71-73
• 3 蛋白質(zhì)組學(xué)73-83
• (1) 蛋白質(zhì)組學(xué)簡(jiǎn)介73-75
• (2) 定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究的發(fā)展75-81
• (3) 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用81-83
• 4 研究的意義與技術(shù)路線83-84
• 參考文獻(xiàn)84-93
• 致謝93-94
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文94

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：672165