發(fā)布時間：2017-08-11 06:19

  本文關(guān)鍵詞：克羅恩病患者小腸黏膜內(nèi)菌群的研究

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【摘要】：研究背景和目的克羅恩病是一類病因和發(fā)病機制尚不明確的慢性、終身性、復(fù)發(fā)性疾病,主要累及胃腸道,和潰瘍性結(jié)腸炎共同隸屬于炎癥性腸病。炎癥性腸病一直是影響北美、歐洲等西方發(fā)達(dá)國家公眾健康的一大困擾,而近年來,隨著經(jīng)濟和技術(shù)的進步,東西方國家之間的聯(lián)系逐漸密切,我們的生活方式及飲食習(xí)慣也逐漸向西方國家靠攏,與此同時克羅恩病在亞太地區(qū)的發(fā)病率迅速上升,且疾病行為更加復(fù)雜。目前認(rèn)為,遺傳因素、環(huán)境因素與免疫因素均在克羅恩病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中起到不可忽視的作用。其中腸道菌群與腸道黏膜之間的相互作用在克羅恩病中的價值已經(jīng)被越來越多的研究所證實。然而既往研究中所取得的菌群樣本來源不一,且均集中于糞便、結(jié)腸和回腸末端黏膜,對空腸、回腸等較高位小腸黏膜內(nèi)菌群的研究報道尚少。本研究通過單氣囊小腸鏡直接獲取小腸黏膜,對其黏膜內(nèi)菌群進行測定分析,旨在探討克羅恩病患者小腸病變節(jié)段與正常節(jié)段黏膜內(nèi)菌群的組成差異；克羅恩病患者與非炎癥性腸病患者腸道菌群的組成差異；并探討腸道菌群改變與病情活動度、嚴(yán)重程度的關(guān)系。研究方法本研究選取2014年10月至2015年10月就診于我院消化內(nèi)科并接受單氣囊小腸鏡檢查的患者,收集其臨床資料,分為實驗組和對照組。實驗組為曾經(jīng)確診或本次單氣囊小腸鏡檢查擬診為克羅恩病的患者,對照組為本次SBE檢查腸道未見典型炎癥性腸病樣炎性改變的患者,包括健康對照者。排除以下患者：小腸鏡檢查前1周內(nèi)使用抗生素、益生菌等可能干擾腸道菌群的藥物者；確診為腸結(jié)核、淋巴瘤或白塞氏病等非克羅恩病的患者；無法耐受小腸鏡檢查的患者。在進行小腸檢查時留存小腸黏膜照片,退鏡觀察時,以小腸鏡活檢鉗取得小腸黏膜樣本,用無菌生理鹽水沖洗至少3遍,置于無菌凍存管中,立即進行液氮冷凍,后轉(zhuǎn)移樣本至-80℃冰箱內(nèi)保存。抽提小腸黏膜內(nèi)菌群基因組DNA,并進行PCR擴增、純化,后在Illumina MiSeq平臺上進行文庫構(gòu)建和基因測序。對腸黏膜菌群測序結(jié)果進行生物信息學(xué)分析。研究結(jié)果本研究共納入患者25例,共收集152個黏膜樣本；根據(jù)排除標(biāo)準(zhǔn)排除3例患者后,剩余實驗組11例,對照組11例；由于樣本體積受限,最終有8例患者、19個樣本得以進入測序分析階段。其中實驗組共有CD患者5例,分別以A、B、C、D、E編號。其中A、B為初診,C、D、E為復(fù)診；對照組患者共有3例,分別編號為F、G、H。測序結(jié)果表明,在門水平上,所有樣本中含量最多的均為厚壁菌門(Firmicutes),實驗組中厚壁菌門含量比例范圍為56.38%～69.77%,對照組比例范圍為57.75%～60.31%。菌群豐度的差異也主要由此而產(chǎn)生。實驗組樣本中,含量次之的為變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和放線菌門(Actinobacteria);而對照組樣本中,含量排行前四位的與實驗組一致,但擬桿菌門(Bacteroidetes)所占的比例明顯高于變形菌門(Proteobacteria),這與以往研究相符。在屬的水平上,實驗組含量由多到少分別為芽孢桿菌屬(Bacillus)、腸球菌屬(Enterococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、嗜堿菌屬(Alkaliphilus)、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、拉烏爾菌屬(Raoultella)、海洋桿菌屬(Oceanobacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、擬桿菌屬(Bacteroides):對照組中含量位于前列的分別為毛螺菌科NK4A136組(Lachnospiraceae_NK4A 136_group)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、擬桿菌目S24-7組(Bacteroidales_S24-7_group_norank)、腸球菌屬(Enterococcus)、毛螺菌科某些未分類菌屬(Lachnospiraceae unclassified)、乳球菌屬(Lactococcus)等。與對照組相比,實驗組小腸黏膜中芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)比例明顯升高,而梭菌目(Clostridiales)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)和擬桿菌屬(Bacteroides)減少。之前很多研究中提到的普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)并沒有被檢測到,可能是因為小腸黏膜內(nèi)菌群中該菌群的含量過低所導(dǎo)致的。研究結(jié)論1.CD患者小腸黏膜內(nèi)菌群豐度與多樣性明顯降低；2.菌群豐度方面,在門水平上,CD患者變形菌門(Proteobacteria)比例增加,擬桿菌門(Bacteroidetes)匕例減少。3.菌群多樣性方面,在屬水平上,CD患者黏膜內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)明顯失調(diào),芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus) 在CD患者的小腸黏膜內(nèi)菌群中的比例明顯升高,而梭菌目(Clostridiales)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)和擬桿菌屬(Bacteroides)減少。4.CD患者炎性節(jié)段的黏膜內(nèi)菌群的多樣性較非炎性節(jié)段降低不明顯。研究意義本研究率先將克羅恩病的研究著眼于消化道最長的部分一小腸,利用單氣囊小腸鏡獲得了珍貴的全小腸節(jié)段性黏膜樣本,探究了小腸黏膜內(nèi)菌群與克羅恩病的關(guān)系,有望為克羅恩病的治療提供新的證據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：克羅恩病 小腸 黏膜內(nèi)菌群 單氣囊小腸鏡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 英文縮略詞及符號說明12-13
• 前言13-21
• 研究對象和方法21-28
• 1 研究對象21
• 1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)及分組21
• 1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)21
• 2 儀器和方法21-28
• 2.1 儀器21-22
• 2.2 藥物22-23
• 2.3 SBE檢g把凈竦，
  
  本文編號：654608
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