本文關(guān)鍵詞：克羅恩病患者小腸黏膜內(nèi)菌群的研究

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【摘要】：研究背景和目的克羅恩病是一類病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性、終身性、復(fù)發(fā)性疾病,主要累及胃腸道,和潰瘍性結(jié)腸炎共同隸屬于炎癥性腸病。炎癥性腸病一直是影響北美、歐洲等西方發(fā)達(dá)國(guó)家公眾健康的一大困擾,而近年來(lái),隨著經(jīng)濟(jì)和技術(shù)的進(jìn)步,東西方國(guó)家之間的聯(lián)系逐漸密切,我們的生活方式及飲食習(xí)慣也逐漸向西方國(guó)家靠攏,與此同時(shí)克羅恩病在亞太地區(qū)的發(fā)病率迅速上升,且疾病行為更加復(fù)雜。目前認(rèn)為,遺傳因素、環(huán)境因素與免疫因素均在克羅恩病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中起到不可忽視的作用。其中腸道菌群與腸道黏膜之間的相互作用在克羅恩病中的價(jià)值已經(jīng)被越來(lái)越多的研究所證實(shí)。然而既往研究中所取得的菌群樣本來(lái)源不一,且均集中于糞便、結(jié)腸和回腸末端黏膜,對(duì)空腸、回腸等較高位小腸黏膜內(nèi)菌群的研究報(bào)道尚少。本研究通過(guò)單氣囊小腸鏡直接獲取小腸黏膜,對(duì)其黏膜內(nèi)菌群進(jìn)行測(cè)定分析,旨在探討克羅恩病患者小腸病變節(jié)段與正常節(jié)段黏膜內(nèi)菌群的組成差異；克羅恩病患者與非炎癥性腸病患者腸道菌群的組成差異；并探討腸道菌群改變與病情活動(dòng)度、嚴(yán)重程度的關(guān)系。研究方法本研究選取2014年10月至2015年10月就診于我院消化內(nèi)科并接受單氣囊小腸鏡檢查的患者,收集其臨床資料,分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組為曾經(jīng)確診或本次單氣囊小腸鏡檢查擬診為克羅恩病的患者,對(duì)照組為本次SBE檢查腸道未見典型炎癥性腸病樣炎性改變的患者,包括健康對(duì)照者。排除以下患者：小腸鏡檢查前1周內(nèi)使用抗生素、益生菌等可能干擾腸道菌群的藥物者；確診為腸結(jié)核、淋巴瘤或白塞氏病等非克羅恩病的患者；無(wú)法耐受小腸鏡檢查的患者。在進(jìn)行小腸檢查時(shí)留存小腸黏膜照片,退鏡觀察時(shí),以小腸鏡活檢鉗取得小腸黏膜樣本,用無(wú)菌生理鹽水沖洗至少3遍,置于無(wú)菌凍存管中,立即進(jìn)行液氮冷凍,后轉(zhuǎn)移樣本至-80℃冰箱內(nèi)保存。抽提小腸黏膜內(nèi)菌群基因組DNA,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增、純化,后在Illumina MiSeq平臺(tái)上進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建和基因測(cè)序。對(duì)腸黏膜菌群測(cè)序結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。研究結(jié)果本研究共納入患者25例,共收集152個(gè)黏膜樣本；根據(jù)排除標(biāo)準(zhǔn)排除3例患者后,剩余實(shí)驗(yàn)組11例,對(duì)照組11例；由于樣本體積受限,最終有8例患者、19個(gè)樣本得以進(jìn)入測(cè)序分析階段。其中實(shí)驗(yàn)組共有CD患者5例,分別以A、B、C、D、E編號(hào)。其中A、B為初診,C、D、E為復(fù)診；對(duì)照組患者共有3例,分別編號(hào)為F、G、H。測(cè)序結(jié)果表明,在門水平上,所有樣本中含量最多的均為厚壁菌門(Firmicutes),實(shí)驗(yàn)組中厚壁菌門含量比例范圍為56.38%～69.77%,對(duì)照組比例范圍為57.75%～60.31%。菌群豐度的差異也主要由此而產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)組樣本中,含量次之的為變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和放線菌門(Actinobacteria);而對(duì)照組樣本中,含量排行前四位的與實(shí)驗(yàn)組一致,但擬桿菌門(Bacteroidetes)所占的比例明顯高于變形菌門(Proteobacteria),這與以往研究相符。在屬的水平上,實(shí)驗(yàn)組含量由多到少分別為芽孢桿菌屬(Bacillus)、腸球菌屬(Enterococcus)、乳球菌屬(Lactococcus)、嗜堿菌屬(Alkaliphilus)、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、拉烏爾菌屬(Raoultella)、海洋桿菌屬(Oceanobacillus)、類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)、擬桿菌屬(Bacteroides):對(duì)照組中含量位于前列的分別為毛螺菌科NK4A136組(Lachnospiraceae_NK4A 136_group)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、擬桿菌目S24-7組(Bacteroidales_S24-7_group_norank)、腸球菌屬(Enterococcus)、毛螺菌科某些未分類菌屬(Lachnospiraceae unclassified)、乳球菌屬(Lactococcus)等。與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組小腸黏膜中芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)比例明顯升高,而梭菌目(Clostridiales)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)和擬桿菌屬(Bacteroides)減少。之前很多研究中提到的普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)并沒有被檢測(cè)到,可能是因?yàn)樾∧c黏膜內(nèi)菌群中該菌群的含量過(guò)低所導(dǎo)致的。研究結(jié)論1.CD患者小腸黏膜內(nèi)菌群豐度與多樣性明顯降低；2.菌群豐度方面,在門水平上,CD患者變形菌門(Proteobacteria)比例增加,擬桿菌門(Bacteroidetes)匕例減少。3.菌群多樣性方面,在屬水平上,CD患者黏膜內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)明顯失調(diào),芽孢桿菌屬(Bacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus) 在CD患者的小腸黏膜內(nèi)菌群中的比例明顯升高,而梭菌目(Clostridiales)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)和擬桿菌屬(Bacteroides)減少。4.CD患者炎性節(jié)段的黏膜內(nèi)菌群的多樣性較非炎性節(jié)段降低不明顯。研究意義本研究率先將克羅恩病的研究著眼于消化道最長(zhǎng)的部分一小腸,利用單氣囊小腸鏡獲得了珍貴的全小腸節(jié)段性黏膜樣本,探究了小腸黏膜內(nèi)菌群與克羅恩病的關(guān)系,有望為克羅恩病的治療提供新的證據(jù)支持。
【關(guān)鍵詞】：克羅恩病 小腸 黏膜內(nèi)菌群 單氣囊小腸鏡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R574.62
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 英文縮略詞及符號(hào)說(shuō)明12-13
• 前言13-21
• 研究對(duì)象和方法21-28
• 1 研究對(duì)象21
• 1.1 納入標(biāo)準(zhǔn)及分組21
• 1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)21
• 2 儀器和方法21-28
• 2.1 儀器21-22
• 2.2 藥物22-23
• 2.3 SBE檢g把凈竦，
  
  本文編號(hào)：654608
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