本文關(guān)鍵詞：尿酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機(jī)制研究

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【摘要】：第一部分黃嘌呤氧化酶通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積實(shí)驗(yàn)?zāi)康模貉迥蛩崴皆诜蔷凭灾拘愿尾』颊咧酗@著升高,然而其背后的分子機(jī)制尚未清楚。在本研究中,我們將以尿酸代謝關(guān)鍵酶黃嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO)為切入點(diǎn),探索尿酸在非酒精性脂肪性肝病發(fā)生發(fā)展的作用及其機(jī)制。材料和方法：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取8-10周齡的雄性C57BL/6小鼠,分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對(duì)小鼠肝臟脂肪變性的影響。體外實(shí)驗(yàn)選取人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞,采用游離脂肪酸刺激48h誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝病體外細(xì)胞模型,采用不同濃度尿酸刺激HepG2細(xì)胞48h構(gòu)建尿酸刺激模型來(lái)觀察尿酸體外刺激對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響。利用熒光定量PCR(qRT-PCR)及WB等手段檢測(cè)XO的mRNA、蛋白及活性表達(dá)。體外采用小干擾RNA干擾技術(shù)抑制XO及NLRP3表達(dá),體外采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)增強(qiáng)XO表達(dá),體內(nèi)外采用別嘌呤醇抑制XO活性。利用肝細(xì)胞甘油三酯含量測(cè)定和油紅O染色觀察XO表達(dá)及活性變化、尿酸刺激對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的影響,進(jìn)一步采用qRT-PCR及WB等分子生物學(xué)手段分析XO及尿酸對(duì)NLRP3炎性小體復(fù)合物的調(diào)控作用。結(jié)果：尿酸在體內(nèi)外直接誘導(dǎo)肝細(xì)胞脂肪變性；XO表達(dá)及活性在非酒精性脂肪性肝病小鼠及細(xì)胞模型中表達(dá)均顯著升高；體外抑制XO表達(dá)減少尿酸生成并顯著減輕肝細(xì)胞甘油三酯含量和脂質(zhì)沉積；體外增強(qiáng)XO表達(dá)顯著加重肝細(xì)胞甘油三酯含量和脂質(zhì)沉積；體內(nèi)抑制XO活性顯著減輕高脂飲食誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積；進(jìn)一步研究表明XO通過(guò)調(diào)控尿酸代謝誘導(dǎo)NLRP3炎性小體的激活。結(jié)論：XO可能通過(guò)調(diào)控尿酸代謝激活NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞脂肪貯積,XO可能成為非酒精性脂肪性肝病的潛在分子治療靶點(diǎn)。第二部分尿酸通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞胰島素抵抗實(shí)驗(yàn)?zāi)康模焊吣蛩嵫Y與葡萄糖代謝異常及胰島素抵抗密切相關(guān),然而其背后的分子機(jī)制尚未清楚。在本研究中,我們將探索尿酸在胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的作用及其分子機(jī)制。材料和方法：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取8-10周齡的雄性C57BL/6小鼠,分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食、高脂飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對(duì)小鼠肝臟胰島素抵抗的影響。體內(nèi)采用別嘌呤醇降低尿酸治療觀察其對(duì)非酒精性脂肪性肝病小鼠模型肝臟胰島素抵抗的影響。體外實(shí)驗(yàn)選取人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞采用不同濃度尿酸刺激HepG2細(xì)胞構(gòu)建尿酸刺激模型,體外采用小干擾RNA技術(shù)抑制NLRP3表達(dá)。進(jìn)一步采用WB等分子生物學(xué)手段分析尿酸及NLRP3對(duì)胰島素信號(hào)通路的影響。結(jié)果：高脂飲食可以誘導(dǎo)小鼠肝臟胰島素抵抗；尿酸在體內(nèi)直接誘導(dǎo)小鼠肝臟胰島素抵抗；別嘌呤醇降尿酸治療可以減輕高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肝臟胰島素抵抗；尿酸在體外可以損害肝細(xì)胞胰島素信號(hào)通路；體外抑制NLRP3可以減輕尿酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞胰島素信號(hào)通路損害。結(jié)論：尿酸可能通過(guò)激活NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞胰島素抵抗。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 胰島素抵抗 黃嘌呤氧化酶 尿酸 NLRP3炎性小體
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 縮略語(yǔ)表13-18
• 前言18-21
• 第一部分 黃嘌呤氧化酶通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積21-63
• 1.1 研究背景21-23
• 1.2 材料與方法23-44
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-28
• 1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-44
• 1.3 結(jié)果44-59
• 1.3.1 NAFLD小鼠模型的構(gòu)建及評(píng)價(jià)44-45
• 1.3.2 NAFLD細(xì)胞模型的構(gòu)建與評(píng)價(jià)45
• 1.3.3 高尿酸飲食對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)貯積的評(píng)價(jià)45-46
• 1.3.4 尿酸刺激對(duì)體外肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積的評(píng)價(jià)46-47
• 1.3.5 XO表達(dá)及活性在NAFLD細(xì)胞和動(dòng)物模型中的變化47-48
• 1.3.6 Uricase表達(dá)及活性在NAFLD動(dòng)物模型中的變化48-49
• 1.3.7 抑制XO活性對(duì)NAFLD小鼠脂肪變性的預(yù)防作用評(píng)價(jià)49-51
• 1.3.8 抑制XO活性對(duì)NAFLD小鼠脂肪變性的治療作用評(píng)價(jià)51-52
• 1.3.9 XO體外對(duì)尿酸生成的調(diào)控作用及脂肪變性的影響52-54
• 1.3.10 XO對(duì)NLRP3炎性小體的調(diào)控作用54-55
• 1.3.11 尿酸對(duì)NLRP3炎性小體的調(diào)控作用55-56
• 1.3.12 尿酸對(duì)AMPK-ROS及NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用56-57
• 1.3.13 NLRP3體外對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性的調(diào)控作用57-59
• 1.4 討論59-62
• 1.5 結(jié)論62-63
• 第二部分 尿酸通過(guò)依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細(xì)胞胰島素抵抗63-83
• 2.1 研究背景63-65
• 2.2 材料與方法65-75
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料65-69
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法69-75
• 2.3 結(jié)果75-80
• 2.3.1 NAFLD小鼠模型胰島素抵抗評(píng)價(jià)75
• 2.3.2 高尿酸模型對(duì)小鼠肝臟胰島素抵抗影響的評(píng)價(jià)75-76
• 2.3.3 降尿酸治療對(duì)NAFLD小鼠模型胰島素抵抗評(píng)價(jià)76-77
• 2.3.4 尿酸刺激對(duì)胰島素信號(hào)通路的評(píng)價(jià)77-78
• 2.3.5 體外抑制NLRP3對(duì)尿酸誘導(dǎo)胰島素信號(hào)通路損害的影響評(píng)價(jià)78-80
• 2.4 討論80-82
• 2.5 結(jié)論82-83
• 參考文獻(xiàn)83-97
• 綜述97-122
• 參考文獻(xiàn)108-122
• 作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果122-123

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1 林聽寶;;測(cè)定血清和尿液中尿酸的新的酶促法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);1982年01期

2 劉廣楨,陳建華,王e，

本文編號(hào)：638665