本文關(guān)鍵詞：尿酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其分子機制研究

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【摘要】：第一部分黃嘌呤氧化酶通過依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞脂質(zhì)貯積實驗目的：血清尿酸水平在非酒精性脂肪性肝病患者中顯著升高,然而其背后的分子機制尚未清楚。在本研究中,我們將以尿酸代謝關(guān)鍵酶黃嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase, XO)為切入點,探索尿酸在非酒精性脂肪性肝病發(fā)生發(fā)展的作用及其機制。材料和方法：體內(nèi)實驗選取8-10周齡的雄性C57BL/6小鼠,分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對小鼠肝臟脂肪變性的影響。體外實驗選取人肝癌細胞株HepG2細胞,采用游離脂肪酸刺激48h誘導非酒精性脂肪性肝病體外細胞模型,采用不同濃度尿酸刺激HepG2細胞48h構(gòu)建尿酸刺激模型來觀察尿酸體外刺激對肝細胞脂肪變性的影響。利用熒光定量PCR(qRT-PCR)及WB等手段檢測XO的mRNA、蛋白及活性表達。體外采用小干擾RNA干擾技術(shù)抑制XO及NLRP3表達,體外采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)增強XO表達,體內(nèi)外采用別嘌呤醇抑制XO活性。利用肝細胞甘油三酯含量測定和油紅O染色觀察XO表達及活性變化、尿酸刺激對肝細胞脂肪變性的影響,進一步采用qRT-PCR及WB等分子生物學手段分析XO及尿酸對NLRP3炎性小體復合物的調(diào)控作用。結(jié)果：尿酸在體內(nèi)外直接誘導肝細胞脂肪變性；XO表達及活性在非酒精性脂肪性肝病小鼠及細胞模型中表達均顯著升高；體外抑制XO表達減少尿酸生成并顯著減輕肝細胞甘油三酯含量和脂質(zhì)沉積；體外增強XO表達顯著加重肝細胞甘油三酯含量和脂質(zhì)沉積；體內(nèi)抑制XO活性顯著減輕高脂飲食誘導的肝細胞脂質(zhì)沉積；進一步研究表明XO通過調(diào)控尿酸代謝誘導NLRP3炎性小體的激活。結(jié)論：XO可能通過調(diào)控尿酸代謝激活NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞脂肪貯積,XO可能成為非酒精性脂肪性肝病的潛在分子治療靶點。第二部分尿酸通過依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞胰島素抵抗實驗目的：高尿酸血癥與葡萄糖代謝異常及胰島素抵抗密切相關(guān),然而其背后的分子機制尚未清楚。在本研究中,我們將探索尿酸在胰島素抵抗發(fā)生發(fā)展的作用及其分子機制。材料和方法：體內(nèi)實驗選取8-10周齡的雄性C57BL/6小鼠,分別采用正常飲食、高尿酸飲食、高脂飲食、高脂高尿酸飲食、高脂飲食喂養(yǎng)8周觀察尿酸對小鼠肝臟胰島素抵抗的影響。體內(nèi)采用別嘌呤醇降低尿酸治療觀察其對非酒精性脂肪性肝病小鼠模型肝臟胰島素抵抗的影響。體外實驗選取人肝癌細胞株HepG2細胞采用不同濃度尿酸刺激HepG2細胞構(gòu)建尿酸刺激模型,體外采用小干擾RNA技術(shù)抑制NLRP3表達。進一步采用WB等分子生物學手段分析尿酸及NLRP3對胰島素信號通路的影響。結(jié)果：高脂飲食可以誘導小鼠肝臟胰島素抵抗；尿酸在體內(nèi)直接誘導小鼠肝臟胰島素抵抗；別嘌呤醇降尿酸治療可以減輕高脂飲食誘導的小鼠肝臟胰島素抵抗；尿酸在體外可以損害肝細胞胰島素信號通路；體外抑制NLRP3可以減輕尿酸誘導肝細胞胰島素信號通路損害。結(jié)論：尿酸可能通過激活NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞胰島素抵抗。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 胰島素抵抗 黃嘌呤氧化酶 尿酸 NLRP3炎性小體
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 致謝5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 縮略語表13-18
• 前言18-21
• 第一部分 黃嘌呤氧化酶通過依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞脂質(zhì)貯積21-63
• 1.1 研究背景21-23
• 1.2 材料與方法23-44
• 1.2.1 實驗材料23-28
• 1.2.2 實驗方法28-44
• 1.3 結(jié)果44-59
• 1.3.1 NAFLD小鼠模型的構(gòu)建及評價44-45
• 1.3.2 NAFLD細胞模型的構(gòu)建與評價45
• 1.3.3 高尿酸飲食對小鼠肝臟脂質(zhì)貯積的評價45-46
• 1.3.4 尿酸刺激對體外肝細胞脂質(zhì)貯積的評價46-47
• 1.3.5 XO表達及活性在NAFLD細胞和動物模型中的變化47-48
• 1.3.6 Uricase表達及活性在NAFLD動物模型中的變化48-49
• 1.3.7 抑制XO活性對NAFLD小鼠脂肪變性的預防作用評價49-51
• 1.3.8 抑制XO活性對NAFLD小鼠脂肪變性的治療作用評價51-52
• 1.3.9 XO體外對尿酸生成的調(diào)控作用及脂肪變性的影響52-54
• 1.3.10 XO對NLRP3炎性小體的調(diào)控作用54-55
• 1.3.11 尿酸對NLRP3炎性小體的調(diào)控作用55-56
• 1.3.12 尿酸對AMPK-ROS及NF-κB信號通路的調(diào)控作用56-57
• 1.3.13 NLRP3體外對肝細胞脂肪變性的調(diào)控作用57-59
• 1.4 討論59-62
• 1.5 結(jié)論62-63
• 第二部分 尿酸通過依賴NLRP3炎性小體途徑調(diào)控肝細胞胰島素抵抗63-83
• 2.1 研究背景63-65
• 2.2 材料與方法65-75
• 2.2.1 實驗材料65-69
• 2.2.2 實驗方法69-75
• 2.3 結(jié)果75-80
• 2.3.1 NAFLD小鼠模型胰島素抵抗評價75
• 2.3.2 高尿酸模型對小鼠肝臟胰島素抵抗影響的評價75-76
• 2.3.3 降尿酸治療對NAFLD小鼠模型胰島素抵抗評價76-77
• 2.3.4 尿酸刺激對胰島素信號通路的評價77-78
• 2.3.5 體外抑制NLRP3對尿酸誘導胰島素信號通路損害的影響評價78-80
• 2.4 討論80-82
• 2.5 結(jié)論82-83
• 參考文獻83-97
• 綜述97-122
• 參考文獻108-122
• 作者簡歷及在學期間所取得的科研成果122-123

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1 林聽寶;;測定血清和尿液中尿酸的新的酶促法[J];國外醫(yī)學.臨床生物化學與檢驗學分冊;1982年01期

2 劉廣楨,陳建華,王e，

本文編號：638665