本文關(guān)鍵詞：腸道缺血再灌注致遠(yuǎn)隔組織損傷時(shí)TLR4與HMGB1及下游信號(hào)途徑的研究

  更多相關(guān)文章： C57BL/6小鼠 腸道缺血/再灌注 HMGB1 MyD88 TRIF

【摘要】：目的：應(yīng)用不同的抗體蛋白研究小鼠腸道缺血/再灌注致遠(yuǎn)隔組織損傷時(shí),TLR4-HMGB1及其下游信號(hào)途徑的作用。方法：SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠40只,隨機(jī)分為5組：sham、control、anti-HMGB1、 anti-MyD88和anti-TRIF,每組8只。Control、anti-HMGB1、anti-MyD88和anti-TRIF組在行腸道缺血/再灌注手術(shù)前30min分別經(jīng)尾靜脈注射對(duì)照IgG、HMGB1、MyD88和TRIF抗體(劑量為1mg/kg,濃度為0.025%)。所有小鼠麻醉,開(kāi)腹后,鈍性分離暴露腸系膜上動(dòng)脈(s uperior mesenteric artery, SMA)。除sham組外的四組用無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉腸系膜上動(dòng)脈60min后松夾再灌注60min, sham組只開(kāi)腹120min,不進(jìn)行缺血再灌注。術(shù)后取材,檢測(cè)血漿NF-κB p65、IL-6及TNF-α濃度；肺臟和肝臟MPO的活性；肺和腸道組織形態(tài)學(xué)變化和HMGB1與NF-κB的mRNA和蛋白表達(dá)。應(yīng)用單因素方差分析檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果：在小鼠腸道缺血再灌注損傷中,與對(duì)照組比較,在缺血前通過(guò)注射抗體阻斷HMGB1、MyD88和TRIF的表達(dá)能明顯的降低血漿炎癥因子NF-κB、IL-6 及 TNF-α的水平,同時(shí)減輕了肺臟和小腸組織的損傷。anti-HMGB1抗體、anti-MyD88抗體和anti-TRIF抗體的應(yīng)用能明顯的減輕缺血再灌注引起的組織損傷,提示了其治療性的作用,其中anti-HMGB1抗體的作用最為顯著。結(jié)論：HMGB1及其下游信號(hào)途徑在小鼠腸道缺血再灌注損傷中具有重要作用,在二條下游信號(hào)途徑中,TRIF依賴途徑所起的作用比MyD88依賴途徑稍大些。
【關(guān)鍵詞】：C57BL/6小鼠 腸道缺血/再灌注 HMGB1 MyD88 TRIF
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R574
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-7
• 縮略詞表7-8
• 前言8-11
• 實(shí)驗(yàn)材料11-20
• 一. 主要實(shí)驗(yàn)試劑11-16
• (一) MPO檢測(cè)試劑盒11
• (二) 細(xì)胞因子測(cè)定試劑盒11
• (三) H-E染色試劑盒11-12
• (四) PCR檢測(cè)基因表達(dá)12
• (五) Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)12-16
• 二. 一般耗材16-17
• 三. 動(dòng)物手術(shù)器械和實(shí)驗(yàn)耗材17
• (一) 手術(shù)器械17
• (二) 實(shí)驗(yàn)耗材17
• 四. 主要儀器設(shè)備17-20
• (一) 一般儀器17-18
• (二) H-E染色中所用的儀器18
• (三) Western blot中用的儀器18
• (四) ELISA檢測(cè)相關(guān)儀器18
• (五) MPO檢測(cè)相關(guān)儀器18-19
• (六) PT-PCR檢測(cè)相關(guān)儀器19-20
• 研究?jī)?nèi)容和研究方法20-40
• (一) 研究設(shè)計(jì)20-21
• (二) 動(dòng)物腸道缺血再灌注手術(shù)21-24
• 1. 動(dòng)物21
• 2. 術(shù)前器械21-22
• 3. 尾靜脈注射22
• 4. 腸道缺血再灌注術(shù)22-23
• 5. 取材23-24
• (三) 觀察項(xiàng)目及檢測(cè)方法24-39
• 1. 血漿中炎癥因子的測(cè)定(ELISA法)24-26
• 2. 肺臟和肝臟組織MPO測(cè)定26-27
• 3. H-E染色27-29
• 4. HMGBl蛋白表達(dá)(Western Blot)29-32
• 5. HMGB1、NF-κB、MyD88和TRIF的基因表達(dá)(PT-qPCR)32-39
• (四) 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理39-40
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-47
• 一、血漿中炎癥因子的變化40
• 二、肝臟和肺臟組織中的MPO活性40-41
• 三、腸道和肺臟的形態(tài)學(xué)改變(光鏡檢查,H-E染色)41-44
• 四、肺和回腸的基因表達(dá)44-45
• 五、肺臟及空、回腸組織HMGB1和NF-κB的蛋白表達(dá)45-47
• 討論47-59
• 一、小鼠腸道缺血再灌注操作47-48
• 二、小鼠尾靜脈注射技術(shù)48-49
• 三、炎癥因子與缺血再灌注損傷49-51
• 四、HMGB1與腸道缺血再灌注損傷51-55
• 五、TLR4與腸道缺血再灌注損傷55
• 六、HMGB1-TLR4與腸道缺血再灌注損傷55-57
• 七、MYD88依賴性和TRIF依賴性途徑在腸道缺血再灌注損傷中的作用57
• 八、NF-κB在腸道缺血再灌注損傷中的作用57-59
• 結(jié)論59-60
• 參考文獻(xiàn)60-71
• 綜述71-84
• 綜述參考文獻(xiàn)79-84
• 碩士期間發(fā)表論文及著作84-85
• 致謝85-87

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 蘇麗娜;郭劍偉;饒光玲;;小鼠尾靜脈注射與斷頭取血實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)[J];大理學(xué)院學(xué)報(bào);2010年06期

2 孫美芳,黃德武;水浴浸泡法在大小鼠尾靜脈注射中的應(yīng)用[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;1999年03期

3 廖曉輝;張玲;;炎癥與急性缺血性腎損傷[J];生命的化學(xué);2008年06期

，

本文編號(hào)：618754