本文關鍵詞：肝纖維化大鼠血液微環(huán)境對人臍帶MSCs向肝細胞分化的影響及機制研究

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【摘要】：目的探討肝纖維化大鼠血液微環(huán)境對人臍帶MSCs(human umbilical cord MSCs,HUCMSCs)向肝細胞分化的影響及作用機制。方法取成年清潔級雄性SD大鼠18只,體質量(200±20)g;其中12只采用腹腔注射硫代乙酰胺方法制備肝纖維化模型,組織學觀察確定模型制備成功后取大鼠全血分離血清;剩余6只正常大鼠同法分離血清。ELISA法檢測血清中EGF、b FGF、肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、抑瘤素(oncostatin M,OSM)含量。取第3代HUCMSCs分組培養(yǎng)7 d,其中肝纖維化血清組(A組)、正常血清組(B組)分別以含5 m L/L肝纖維化大鼠血清、正常大鼠血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(含10%FBS)培養(yǎng);對照組(C組)以DMEM/F12培養(yǎng)基(含10%FBS)培養(yǎng)。培養(yǎng)期間采用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;7 d后取各組細胞行免疫熒光檢測肝細胞表面標志物甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)、細胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)表達,Western blot檢測肝細胞功能蛋白白蛋白(albumin,ALB)、色氨酸2,3-雙加氧酶(tryptophan 2,3-dioxygenase,TPH2)、CYP3A4及MAPK/ERK信號通路蛋白(P-ERK)表達,二乙酰肟法測定細胞上清液中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。結果組織學觀察示大鼠肝組織符合纖維化改變,模型制備成功。正常大鼠血清中EGF、OSM含量均高于纖維化大鼠,差異有統(tǒng)計學意義(t=14.989,P=0.000;t=37.172,P=0.000);肝纖維化大鼠血清中HGF含量為(1.03±0.12)ng/m L,正常大鼠血清中未檢出;兩種血清中均未檢出b FGF。誘導培養(yǎng)后,倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)均未見明顯變化且組間無明顯差異。培養(yǎng)7 d時,A組細胞可見AFP、CK18綠色熒光,B、C組染色均為陰性。Western blot檢測示A組細胞可表達肝細胞功能蛋白ALB、TPH2及CYP3A4,B、C組均未見上述蛋白表達。各組細胞均可表達P-ERK,其中A組P-ERK蛋白相對表達量顯著高于B、C組(P0.05);B、C組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。A組細胞上清液中BUN含量亦顯著高于B、C組(P0.05),B、C組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論在肝纖維化條件下,大鼠血液中的HGF水平升高、EGF、OSM水平降低,形成的血液微環(huán)境會激活HUCMSCs的MAPK/ERK信號通路,使其向肝細胞分化。
【作者單位】： 解放軍醫(yī)學院;解放軍白求恩國際和平醫(yī)院藥劑科;
【關鍵詞】： 肝纖維化 人臍帶MSCs 細胞分化 血清 大鼠
【基金】：軍隊“十二五”重點課題資助項目(BWS11J002)~~
【分類號】：R575.2
【正文快照】： 目前,肝纖維化發(fā)病率和死亡率較高,已成為重要公共衛(wèi)生問題,藥物治療效果不佳[1-2]。近年來以干細胞技術為代表的再生醫(yī)學,為肝纖維化的治療提供了新選擇[3-4]。人臍帶MSCs(human umbilicalcord MSCs,HUCMSCs)無倫理道德爭議,是具有應用前景的組織工程種子細胞。研究顯示,HUCM

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本文編號：591961