本文關(guān)鍵詞：基于轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽的異煙肼和對乙酰氨基酚肝損傷機制初探

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【摘要】：目的基于肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽(bile acids,BAs)變化分別初步探討異煙肼(isoniazid,INH)及對乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)致大鼠肝臟損傷的機制。方法1、運用LC-MS/MS建立同時測定大鼠血液、肝臟、膽汁和尿液中15種BAs的方法。2、Wistar雄性大鼠14只隨機分為2組,即INH肝損傷組(INH組)與對照組(Control組),每組7只,Control組:灌胃給予等容量的生理鹽水;INH組:灌胃給予INH 100 mg/kg/d。給藥第60天時,將大鼠禁食12 h,稱重,膽管插管接取膽汁10 min,所得膽汁用于15種BAs的分析測定;腹主動脈采血約5mL,離心,吸取上清,測定血漿中各項生化指標(biāo)與各種BAs;將部分肝臟組織浸泡于10%的甲醛中,石蠟包埋后觀察肝臟病理學(xué)變化,部分肝臟組織樣品用于相關(guān)轉(zhuǎn)運體及BAs的測定。3、Wistar雄性大鼠14只,隨機分為2組,即APAP組與對照組(Control組),每組7只,Control組:灌胃給予等容量的生理鹽水;APAP組:灌胃給予APAP 500 mg/kg。單次給藥后大鼠禁食12 h,稱重,接取膽汁,用于15種BAs的分析測定;腹主動脈采血,測定血漿中各項生化指標(biāo)與各種BAs;將部分肝組織浸泡于10%的甲醛中,石蠟包埋后觀察肝臟病理學(xué)變化,部分肝臟組織樣品用于相關(guān)轉(zhuǎn)運體和代謝酶及BAs的測定。結(jié)果1、使用Agilent HC-C18色譜柱,21分鐘完成BAs的測定;檢測范圍為4.30ng/mL~200μg/mL;BAs在血漿、肝臟組織、膽汁和尿液基質(zhì)中的日內(nèi)/間準(zhǔn)確度LQC、MQC和HQC變化范圍均在80%~104%之內(nèi),精密度RSD值均小于15%;回收率均高于80%;穩(wěn)定性可靠。2、INH組給藥60天與Control組相比,其部分血漿生化指標(biāo)呈顯著上升的趨勢;大鼠血漿中的鵝脫氧膽酸(CDCA)、牛磺鵝脫氧膽酸(TCDCA)、�；切苋パ跄懰�(TUDCA)、熊去氧膽酸(UDCA)、�；敲撗跄懰�(TDCA)、牛黃膽酸(TCA)和石膽酸(LCA)的含量明顯升高(P0.05);膽汁中的TUDCA、UDCA,TDCA和脫氧膽酸(DCA)的含量明顯降低(P0.05);肝臟組織中的膽酸(CA)、TCDCA、甘氨鵝脫氧膽酸(GCDCA)、甘氨脫氧膽酸(GDCA)和甘氨石膽酸(GLCA)的含量明顯升高(P0.05);INH組較Control組多藥耐藥蛋白2(Mrp2)、多藥耐藥相關(guān)蛋白4(Mrp4)和有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽(Oatps)的蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P0.05),膽鹽外排泵(Bsep)和Na+-�；撬峁厕D(zhuǎn)運多肽(Ntcp)表達(dá)水平均無顯著差異(P0.05)。3、APAP組給藥24h,與Control組相比,其部分血漿生化指標(biāo)呈顯著上升的趨勢;血漿中的DCA、LCA、TDCA、GDCA和GLCA的含量明顯升高(P0.05);大鼠膽汁中的CDCA、GDCA、DCA和GLCA的含量明顯升高(P0.05),TUDCA含量明顯降低(P0.05);肝組織中DCA、GDCA、LCA和GLCA的含量明顯升高(P0.05);肝組織中Mrp4和Oatp2蛋白表達(dá)水平顯著降低(P0.05);Mrp2、Bsep和Ntcp的蛋白表達(dá)水平無明顯變化(P0.05);Cyp7a1蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.05)。結(jié)論1、所建立的同時測定大鼠血液、肝臟、膽汁和尿液中15種BAs的方法靈敏度和特異性較高、分析時間較短且精密度和準(zhǔn)確度較高。2、INH導(dǎo)致大鼠肝損傷的機制可能與其降低肝臟Mrp2、Mrp4和Oatp2的表達(dá)水平,引起部分BAs在大鼠體內(nèi)的蓄積有關(guān);3、APAP導(dǎo)致大鼠肝損傷的機制可能與其降低肝臟Mrp4和Oatp2的水平,增加Cyp7a1的表達(dá)水平,引起部分BAs在大鼠體內(nèi)的蓄積有關(guān);
【關(guān)鍵詞】：異煙肼 對乙酰氨基酚 肝毒性 轉(zhuǎn)運體 膽酸鹽 多藥耐藥蛋白2 多藥耐藥蛋白4 膽鹽輸出泵 有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白2 Na~+-�；撬峁厕D(zhuǎn)運多肽
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R575
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-11
• 第一章 前言11-18
• 1.1 藥物性肝損傷11
• 1.2 異煙肼肝損傷機制11-13
• 1.3 對乙酰氨基酚肝損傷機制13-14
• 1.4 膽酸鹽在肝損傷中的作用14-16
• 1.5 肝臟轉(zhuǎn)運體系統(tǒng)16-17
• 1.6 小結(jié)17-18
• 第二章 實驗材料與方法18-24
• 2.1 實驗材料18-20
• 2.1.1 動物18
• 2.1.2 儀器18-19
• 2.1.3 藥品與試劑19-20
• 2.1.4 抗體20
• 2.2 實驗方法20-24
• 2.2.1 藥物的配制20
• 2.2.2 樣本采集和處理20
• 2.2.3 切片制備20-21
• 2.2.4 免疫印跡21-23
• 2.2.5 實驗結(jié)果統(tǒng)計23-24
• 第三章 大鼠肝臟、膽汁、血液和尿液中膽酸鹽測定的LC/MS-MS方法建立24-41
• 3.1 引言24-25
• 3.2 實驗設(shè)計25-28
• 3.2.1 實驗儀器25
• 3.2.2 色譜、質(zhì)譜條件25-26
• 3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作液的配制26
• 3.2.4 樣品制備26-27
• 3.2.5 方法驗證27-28
• 3.2.6 動物實驗研究28
• 3.3 結(jié)果與討論28-40
• 3.3.1 方法優(yōu)化28-34
• 3.3.2 方法學(xué)驗證34-35
• 3.3.3 膽酸鹽測定結(jié)果35-40
• 3.4 小結(jié)40-41
• 第四章 基于轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽的異煙肼肝損傷機制初探41-50
• 4.1 引言41
• 4.2 實驗設(shè)計41-42
• 4.2.1 給藥及分組41-42
• 4.2.2 色譜、質(zhì)譜條件42
• 4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作液的配制42
• 4.2.4 樣品制備42
• 4.2.5 免疫印跡42
• 4.2.6 切片制備42
• 4.2.7 生化指標(biāo)測定42
• 4.3 結(jié)果42-48
• 4.3.1 血漿生化指標(biāo)變化42
• 4.3.2 肝組織病理學(xué)變化42-43
• 4.3.3 血漿、肝臟組織和膽汁中膽鹽的變化43-47
• 4.3.4 肝臟組織中轉(zhuǎn)運體的表達(dá)變化47-48
• 4.4 討論48-49
• 4.5 小結(jié)49-50
• 第五章 基于轉(zhuǎn)運體和膽酸鹽的對乙酰氨基酚肝損傷機制初探50-59
• 5.1 引言50
• 5.2 實驗設(shè)計50-51
• 5.2.1 給藥及分組50
• 5.2.2 色譜、質(zhì)譜條件50
• 5.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作液的配制50
• 5.2.4 樣品制備50-51
• 5.2.5 免疫印跡51
• 5.2.6 切片制備51
• 5.2.7 生化指標(biāo)測定51
• 5.3 結(jié)果51-56
• 5.3.1 血漿生化生化指標(biāo)的變化51
• 5.3.2 肝臟病理學(xué)變化51
• 5.3.3 長期給藥后肝臟組織、膽汁和血漿中膽酸鹽的變化51
• 5.3.4.肝臟轉(zhuǎn)運體的表達(dá)變化51-56
• 5.4 討論56-57
• 5.5 小結(jié)57-59
• 第六章 研究結(jié)論59-60
• 6.1 主要結(jié)論59
• 6.2 研究中有待解決的問題59-60
• 參考文獻(xiàn)60-67
• 在學(xué)期間的研究成果67-68
• 致謝68

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