本文關(guān)鍵詞：IRF3通過AKT通路對(duì)調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞活化增殖作用研究

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【摘要】：肝纖維化是應(yīng)對(duì)慢性肝臟損傷的愈合過程,其發(fā)病的主要特征是肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell, HSC)分泌的以膠原Ⅰ和膠原Ⅲ為主要成分的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellur matrix, ECM)在肝臟內(nèi)的過量沉積。因此,肝星狀細(xì)胞的活化被公認(rèn)為是肝纖維化發(fā)生的中心事件,而抑制HSC增殖有助于肝纖維化的逆轉(zhuǎn)。干擾素轉(zhuǎn)錄因子3(IRF3)是干擾素轉(zhuǎn)錄因子家族中的成員之一,在人體天然免疫中扮演著重要角色。近年來研究表明IRF3在調(diào)控肝臟疾病中,如肝脂肪變性,肝臟炎癥和酒精肝損傷等中起著重要作用,然而IRF3在肝纖維化中的調(diào)控作用,尤其是對(duì)HSC的活化及增殖相關(guān)作用還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究了IRF3在HSC活化過程中及人纖維化肝組織中的表達(dá)情況,并深入探討IRF3對(duì)HSC增殖的影響及其調(diào)控機(jī)制研究內(nèi)容主要包括以下幾個(gè)部分：1.IRF3在人肝纖維化組織中的表達(dá)人肝纖維化組織由從安徽省立醫(yī)院和安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝膽外科進(jìn)行外科手術(shù)的患者中獲得,根據(jù)日本權(quán)威癌癥組織的說明,一般癌旁組織2cm處判定為肝纖維化組織。實(shí)驗(yàn)用免疫組化,蛋白免疫印跡術(shù)和實(shí)時(shí)定量PCR檢測IRF3在肝纖維化組織中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,相較于正常肝組織,IRF3蛋白和mRNA的表達(dá)水平在纖維化組織中的表達(dá)量明顯上升。同時(shí)我們也運(yùn)用免疫熒光雙染的方法定位IRF3在肝組織中的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),IRF3可以與α-SMA在肝纖維化組織中共表達(dá),提示肝星狀細(xì)胞是肝臟內(nèi)表達(dá)α-SMA的主要細(xì)胞類型之一。2.IRF3對(duì)活化的LX-2細(xì)胞的影響為了觀察IRF3對(duì)星狀細(xì)胞活化增殖的影響,實(shí)驗(yàn)以LX-2為研究對(duì)象,檢測了人的肝形狀細(xì)胞系LX-2中IRF3的蛋白和mRNA表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),用不同濃度的TGF-β1(從0 ng/ml到10 ng/ml)刺激LX-2細(xì)胞24 h后,IRF3的表達(dá)量顯著上調(diào)且呈現(xiàn)劑量依懶性。用10 ng/ml TGF-β1刺激LX-2細(xì)胞6h、12h、24h、48 h IRF3的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)TGF-β1刺激LX-2細(xì)胞時(shí)間越長,IRF3的表達(dá)量越高,呈現(xiàn)出時(shí)間依懶性。為了探究了IRF3對(duì)LX-2分泌細(xì)胞外基質(zhì)及纖維化指標(biāo)α-SMA蛋白的影響,實(shí)驗(yàn)用siRNA-IRF3轉(zhuǎn)入LX-2細(xì)胞中用以降低IRF3的表達(dá),Western Blot和Real time qPCR發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,沉默IRF3后α-SMA和Collal表達(dá)量明顯降低；而轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3-IRF3過表達(dá)IRF3后,α-SMA和Collal表達(dá)量顯著上調(diào)。3.IRF3通過激活A(yù)KT信號(hào)通路調(diào)節(jié)LX-2細(xì)胞凋亡和增殖為了探究IRF3對(duì)LX-2的增殖和凋亡作用,實(shí)驗(yàn)采用了MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)。MTT結(jié)果表明,在TGF-β1刺激24 h后,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染siRNA-IRF3后能夠明顯抑制LX-2細(xì)胞的增殖。流式凋亡結(jié)果發(fā)現(xiàn),相較于對(duì)照組,轉(zhuǎn)染siRNA-IRF3后LX-2細(xì)胞凋亡比例明顯增加。此外,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沉默IRF3后可以降低LX-2細(xì)胞中p-AKT的表達(dá),提示IRF3可能通過正調(diào)控AKT信號(hào)通路影響LX-2細(xì)胞的凋亡及增值。
【關(guān)鍵詞】：IRF3 肝星狀細(xì)胞 AKT信號(hào)通路 肝纖維化
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 英文縮略詞6-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 1. 前言13-14
• 2. 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 2.1 肝組織材14
• 2.2 藥品與試劑14-15
• 2.3 抗體15
• 2.4 儀器與設(shè)備15-16
• 2.5 基因序列16-17
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法17-27
• 3.1 肝星狀細(xì)胞LX-2的培養(yǎng)17
• 3.2 人體肝組織病理HE染色17-18
• 3.3 人體肝組織病理Masson染色及其判定18
• 3.4 免疫組織化學(xué)測定18-19
• 3.5 RNAi干擾實(shí)驗(yàn)19
• 3.6 IRF3質(zhì)粒提取及轉(zhuǎn)染19-21
• 3.7 Western Blot21-24
• 3.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR24-26
• 3.9 細(xì)胞凋亡檢測（Annexin V-FITC/PI雙染法）26
• 3.10 實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析26-27
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-42
• 4.1 IRF3在人體纖維化組織中表達(dá)變化27-30
• 4.2 IRF3在TGF-β1誘導(dǎo)的LX-2細(xì)胞中的表達(dá)變化30-33
• 4.3 IRF3對(duì)肝纖維化的調(diào)控作用33-36
• 4.4 IRF3對(duì)LX-2細(xì)胞增殖及凋亡的影響36-37
• 4.5 IRF3對(duì)LX-2細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響37-39
• 4.6 IRF3在LX-2細(xì)胞中對(duì)AKT信號(hào)通路的調(diào)控作用39-42
• 5. 討論42-44
• 6. 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 附錄48-50
• 致謝50-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 學(xué)員須知59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 涂傳濤,張順財(cái);過氧化物酶體增殖物激活受體γ與肝星狀細(xì)胞[J];肝臟;2002年02期

2 龔浩,張忠濤,王宇;血管緊張素Ⅱ與肝星狀細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2005年06期

3 龔浩;王宇;張忠濤;李建設(shè);馬雪梅;周延忠;;血管緊張素Ⅱ及其受體拮抗劑對(duì)肝星狀細(xì)胞Ⅰ型膠原合成的影響[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

4 張宗h，

本文編號(hào)：556894