本文關(guān)鍵詞：杏仁核nesfatin-1對(duì)大鼠內(nèi)臟敏感性的影響及可能機(jī)制研究

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【摘要】：【背景】腸易激綜合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一種以腹脹、腹痛或腹部不適,伴有排便習(xí)慣和糞便性狀改變的功能性腸道疾病,經(jīng)檢查可排除引起這些癥狀的器質(zhì)性和生化改變。目前,其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。內(nèi)臟高敏感作為IBS的生物學(xué)標(biāo)志近年來受到廣泛的關(guān)注。研究顯示,應(yīng)激和下丘腦-垂體-腎上腺軸功能失調(diào)均參與了內(nèi)臟高敏感的發(fā)生過程。此外,杏仁核作為焦慮和恐懼的調(diào)節(jié)中樞,其高表達(dá)的糖皮質(zhì)激素受體(GR)和鹽皮質(zhì)激素受體(MR)均已被證實(shí)參與了大鼠內(nèi)臟高敏感的形成過程。Nesfatin-1是2006年由日本學(xué)者新發(fā)現(xiàn)的一種攝食調(diào)節(jié)肽,它是由前體物質(zhì)核組蛋白2(nucleobindin 2,NUCB2)在激素原轉(zhuǎn)化酶的作用下水解而來的一條片段。在中樞,nesfatin-1主要分布于下丘腦視上核(SON)、室旁核(PVN)、孤束核(NTS)、藍(lán)斑(LC)等應(yīng)激調(diào)節(jié)有關(guān)的核團(tuán);此外,在邊緣系統(tǒng)的焦慮、恐懼調(diào)節(jié)中樞杏仁核中也發(fā)現(xiàn)有nesfatin-1的表達(dá)。Nesfatin-1可激活下丘腦-垂體-腎上腺軸,中樞注射nesfatin-1亦可引起大鼠的焦慮和恐懼行為,但是,目前關(guān)于nesfaitn-1對(duì)IBS內(nèi)臟高敏感的關(guān)系的研究較少。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)中樞nesfatin-1可能通過促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素及其受體(CRF-CRFR)途徑參與大鼠內(nèi)臟高敏感的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn),杏仁核內(nèi)注射皮質(zhì)酮可通過GR增加CRF的表達(dá)。那么杏仁核中的nesfatin-1是否也參與了大鼠內(nèi)臟高敏感的形成呢?其又是通過什么途徑呢?因此,本研究通過采用新生期母嬰分離方法來建立大鼠的內(nèi)臟高敏感模型。初步探討杏仁核中的nesfatin-1對(duì)大鼠內(nèi)臟敏感性的影響及可能的機(jī)制。【研究目的】采用新生期母嬰分離方法來建立大鼠的內(nèi)臟高敏感模型,探討杏仁核中nesfatin-1是對(duì)大鼠內(nèi)臟高敏感性的形成及可能的機(jī)制�！痉椒ā�1.內(nèi)臟高敏感性大鼠模型的建立:新生的雄性SD大鼠隨機(jī)分成母嬰分離組和正常對(duì)照組,母嬰分離組大鼠從出生后第2-16天,每天上午在8:00-11:00之間,將幼鼠與母鼠分開,其余時(shí)間幼鼠與母鼠共籠飼養(yǎng)。對(duì)照組大鼠除不與母鼠分離外,其他處理與母嬰分離組大鼠一致。觀察兩組大鼠體質(zhì)量的變化情況。2.內(nèi)臟敏感性的檢測(cè):通過觀察不同壓力(20 mm Hg、40 mm Hg、60 mm Hg和80mm Hg)下的結(jié)直腸擴(kuò)張刺激時(shí)的腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)評(píng)分和腹外斜肌放電活動(dòng)(electromyographic,EMG)的肌電圖的曲線下面積來評(píng)估大鼠的內(nèi)臟敏感性。3.ELISA法檢測(cè)大鼠血清nesfatin-1和糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)的含量,并做二者之間的相關(guān)性分析。4.Western-blot和RT-PCR法分別檢測(cè)母嬰分離組和正常對(duì)照組大鼠的杏仁核組織中nesfatin-1/NUCB2的蛋白及m RNA表達(dá)以及兩組大鼠杏仁核中的GR和MR的蛋白及m RNA表達(dá)情況。5.將母嬰分離組大鼠隨機(jī)分成2組,分別給予杏仁核內(nèi)注射抗nesfatin-1/NUCB2抗體或溶劑對(duì)照,2h后再次檢測(cè)該2組大鼠的內(nèi)臟敏感性的變化。6.取正常大鼠隨機(jī)分成四組,分別給予杏仁核內(nèi)注射nesfatin-1、GR拮抗劑(米非司酮)+nesfatin-1、MR受體拮抗劑(安體舒通)+nesfatin-1和溶劑對(duì)照,7天后觀察四組大鼠在結(jié)直腸擴(kuò)張刺激時(shí)的AWR評(píng)分和EMG曲線下面積。7.ELISA法檢測(cè)nesfatin-1組和溶劑對(duì)照組大鼠的血清GC的含量�！窘Y(jié)果】1.在出生后第20天時(shí),母嬰分離組大鼠和正常對(duì)照組大鼠之間的體重沒有明顯差別(P0.05),但是在出生后第8周時(shí),母嬰分離組大鼠的體重則要明顯低于正常對(duì)照大鼠的體重,二者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.母嬰分離組大鼠在結(jié)直腸擴(kuò)張壓力為40、60和80mm Hg時(shí)的AWR評(píng)分以及EMG幅值均明顯高于對(duì)照組(P0.05)。3.ELISA結(jié)果顯示,母嬰分離組大鼠血清nesfatin-1水平明顯升高,與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。此外,母嬰分離大鼠血清GC的含量明顯高于正常組大鼠(P0.05)。4.母嬰分離大鼠血清nesfatin-1水平與血清GC水平呈正相關(guān)關(guān)系;并且血清nesfatin-1水平與結(jié)直腸擴(kuò)張刺激時(shí)的各個(gè)壓力下的AWR評(píng)分和EMG曲線下面積均呈正相關(guān)關(guān)系。5.母嬰分離組大鼠杏仁核中nesfatin-1/NUCB2的蛋白表達(dá)水平及m RNA的表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組大鼠,兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.與正常對(duì)照組大鼠相比,母嬰分離組大鼠杏仁核中的GR和MR的蛋白水平及m RNA水平的表達(dá)無明顯改變,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7.母嬰分離大鼠杏仁核內(nèi)注射抗nesfatin-1/NUCB2抗體后,與注射溶劑對(duì)照相比,模型大鼠在結(jié)直腸擴(kuò)張刺激的各個(gè)壓力下的AWR評(píng)分和EMG曲線下面積均明顯降低(P0.05)。8.給予正常大鼠杏仁核內(nèi)注射nesfatin-1一周以后,大鼠的AWR評(píng)分和EMG曲線下面積在結(jié)直腸擴(kuò)張壓力為20、40、60和80mm Hg時(shí)明顯高于溶劑組(P0.05);而注射米非司酮+nesfatin-1組和安體舒通+nesfatin-1組的大鼠的AWR評(píng)分和EMG曲線下面積在各個(gè)擴(kuò)張壓力下與注射溶劑組相比均無明顯差異。9.與溶劑對(duì)照組相比,杏仁核內(nèi)注射nesfatin-1組的大鼠血清GC水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】杏仁核內(nèi)的nesfatin-1可能與大鼠內(nèi)臟高敏感的發(fā)生有關(guān),其可能通過增加血漿GC的含量,進(jìn)而通過杏仁核中糖皮質(zhì)激素受體GR或鹽皮質(zhì)激素受體MR途徑實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：腸易激綜合征 內(nèi)臟高敏感 nesfatin-1 杏仁核 糖皮質(zhì)激素受體 鹽皮質(zhì)激素受體
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R574.4
【目錄】：

• 中英文對(duì)照及縮略詞表(Abbreviations)5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-18
• 材料18-25
• 方法25-37
• 結(jié)果37-50
• 討論50-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 綜述62-75
• 參考文獻(xiàn)69-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況75-76
• 致謝76

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本文編號(hào)：550115