發(fā)布時間：2017-07-06 12:13

  本文關(guān)鍵詞：重癥急性胰腺炎相關(guān)性MiR-551b-5p對ICC細(xì)胞C-KIT基因的表達和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響

  更多相關(guān)文章： 重癥急性胰腺炎 Cajal間質(zhì)細(xì)胞 mi R-551b-5p c-KIT基因 鈣離子

【摘要】：目的:通過研究重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis SAP)相關(guān)性miR-551b-5p對ICC細(xì)胞C-KIT基因、鈣離子濃度的影響,來探討SAP相關(guān)性miR-551b-5p影響胃腸道動力功能的機制。方法:1、Cajal間質(zhì)細(xì)胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)的分離培養(yǎng),從SD乳大鼠中獲取其小腸組織,顯微鏡下剝除小腸系膜、血管及小腸漿膜層,進一步剝除小腸黏膜及黏膜下層,在剩下的平滑肌層中獲取ICC細(xì)胞并進行細(xì)胞培養(yǎng)。2、根據(jù)研究目的將分離培養(yǎng)的ICC細(xì)胞分為5組:A組:正常對照組;B組:MiR-551b-5p過表達組(轉(zhuǎn)染MiR-551b-5p mimic);C組:MiR-551b-5p mimic陰性對照組;D組:MiR-551b-5p下調(diào)表達組(轉(zhuǎn)染MiR-551b-5p inhibitor);E組:MiR-551b-5p inhibitor陰性對照組。3、上調(diào)和下調(diào)ICC細(xì)胞中特異性MiR-551b-5p表達前后的檢測。a、RT-PCR測定ICC細(xì)胞中MiR-551b-5p以及c-KIT mRNA的表達,并根據(jù)以上分組每組重復(fù)3次。b、Western blotting檢測ICC細(xì)胞中c-KIT蛋白,每組重復(fù)3次。c、激光共聚焦顯微鏡檢測ICC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化。以免疫熒光法檢測c-KIT表達,Fluo-3AM法檢測鈣離子濃度。結(jié)果:1、和正常對照組相比,miR-551b-5p mimic組miR-551b-5p表達顯著升高(P0.01);miR-551b-5p inhibitor組miR-551b-5p表達顯著降低(P0.01);miR-551b-5p mimic組和miR-551b-5p mimic陰性對照組相比,miR-551b-5p表達顯著升高(P0.01);miR-551b-5p inhibitor組和miR-551b-5p inhibitor陰性對照組相比,miR-551b-5p表達顯著降低(P0.01)。2、和正常對照組相比,miR-551b-5p mimic組和miR-551b-5p inhibitor組c-KIT表達無明顯差異(P0.05)3、和正常對照組相比,miR-551b-5p mimic組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度顯著升高(P0.05);miR-551b-5p inhibitor組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度顯著降低(P0.05)。結(jié)論:1、SAP相關(guān)性miR-551b-5p的表達與ICC細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化正相關(guān),通過使ICC細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的升高,使ICC細(xì)胞的起搏功能出現(xiàn)障礙,從而引起胃腸動力的障礙;2、SAP相關(guān)性miR-551b-5p的表達對ICC細(xì)胞中c-KIT表達無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：重癥急性胰腺炎 Cajal間質(zhì)細(xì)胞 mi R-551b-5p c-KIT基因 鈣離子
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R576
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 縮略詞對照表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料和方法12-23
• 2.1 試劑和材料12-14
• 2.1.1 主要試劑12-13
• 2.1.2 主要儀器13-14
• 2.1.3 主要試劑配制14
• 2.2 方法14-22
• 2.2.1 ICC細(xì)胞的分離培養(yǎng)14
• 2.2.2 小鼠小腸ICC細(xì)胞的鑒定14-15
• 2.2.3 實驗分組15
• 2.2.4 細(xì)胞總RNA提取15-16
• 2.2.5 上調(diào)和下調(diào)ICC細(xì)胞中特異性MiR-551b-5p表達前后檢測：16-22
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析22-23
• 第3章 結(jié)果23-29
• 3.1 正常體外培養(yǎng)的ICC細(xì)胞及轉(zhuǎn)染MiR-551b-5pmimic和MiR-551b-5pinhibitor后的ICC細(xì)胞23
• 3.2 Realtime PCR測定ICC細(xì)胞中miR-551b-5p和c-KIT mRNA表達23-25
• 3.2.1 各實驗分組的ICC細(xì)胞中miR-551b-5p的表達差異23-25
• 3.2.2 各組細(xì)胞中c-KIT mRNA和c-KIT蛋白的表達25
• 3.3 激光共聚焦顯微鏡檢測ICC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變25-29
• 第4章 討論29-34
• 4.1 ICC細(xì)胞與胃腸道電活動30-32
• 4.2 ICC細(xì)胞c-KIT基因的表達32-34
• 第5章 結(jié)論與展望34-35
• 5.1 結(jié)論34
• 5.2 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述40-45
• 參考文獻43-45

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊曉娟;重癥急性胰腺炎相關(guān)性MiR-551b-5p對ICC細(xì)胞C-KIT基因的表達和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響[D];南昌大學(xué);2016年

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本文編號：526167