本文關鍵詞：S-烯丙基半胱氨酸對大鼠非酒精性脂肪肝的影響以及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 研究大蒜中的主要成分S-烯丙基半胱氨酸(S-allylcysteine, SAC)對非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)大鼠的肝保護作用，并對其可能的作用機制進行探討。 方法: 1.動物實驗分組及造模：正常組(Normal)、非酒精性脂肪肝模型組(Model)、SAC低、中、高劑量組及阿伐他汀鈣組(Atorvastatin calcium, ATC)。其中正常組喂養(yǎng)普通飼料，其余各組喂養(yǎng)高脂飼料。SAC低、中、高組分別每天灌胃(Intragastrical, ig)同體積不同濃度的SAC，其劑量分別為25mg/kg，50mg/kg，，100mg/kg。高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)12周，每天稱取各組大鼠觀察其體重變化以及大鼠活動情況。于第4，6，8周模型組剪尾取血檢測血清中甘油三酯(Total triglyceride,TG)、膽固醇(Total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(High density lipoproteincholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)，并按血脂水平、體重以及肝組織切片病理學標準篩選符合條件的脂肪肝大鼠。 2.SAC體外抗氧化作用：采用DPPH、ABTS、還原力、β-胡蘿卜素漂白法(β-beaching)、硫氰酸鐵法(Ferric thioeyanate, FTC)和硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid, TBA)方法檢測SAC的體外抗氧化作用。 3.SAC對非酒精性脂肪肝大鼠的血脂水平影響以及體內(nèi)抗氧化作用：連續(xù)ig12周后，各組大鼠心臟取血并分離血清，同時將每組大鼠肝組織勻漿，檢測血清和肝臟中TG、TC、HDL-C、LDL-C、游離脂肪酸(Nonesterified Free fatty acid,NEFA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)含量和谷胱甘肽過氧化酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性。 4.SAC對非酒精性脂肪肝大鼠的肝損傷的影響：檢測血清和肝組織內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平以及肝臟組織切片HE (Hematoxylin and eosin stain)染色。同時用Western blot法檢測肝組織中凋亡相關因子Bcl-2和Cleaved Caspase-3表達。 結果: 1.給藥連續(xù)12周后，與正常組相比，喂養(yǎng)高脂飼料的模型組體重明顯重于正常組，有顯著性差異（p0.05）；與模型組相比，SAC低、中、高劑量組和ATC組均有不同程度的體重減輕，且SAC高劑量組和ATC組均有顯著性差異（p0.05）。在肝重方面，模型組肝重明顯重于正常組及SAC高劑量組和ATC組。與正常組相比，模型組肝指數(shù)有顯著差異（p0.01）；與模型組相比，SAC高劑量組和ATC組肝指數(shù)均有顯著性差異（p0.01）；HE染色結果顯示：正常組肝細胞在12周末未出現(xiàn)任何脂肪侵潤，而模型組肝細胞出現(xiàn)大量的脂肪空泡，SAC低、中、高劑量組脂肪空泡相對減少，且脂質(zhì)沉積的程度有一定的緩解。與模型組相比，血清和肝組織中ALT、AST水平均下降且有顯著性差異（p0.05）；與正常組相比，TG、TC、LDL-C顯著升高，HDL-C明顯降低且有明顯差異（p0.05）。與模型組相比，TG、TC、LDL-C隨著SAC濃度升高而降低，而HDL-C則降低，均有顯著性差異（p0.05）。 2.抗氧化實驗結果顯示：SAC有一定的抗氧化作用；而β-beaching、FTC和TBA法的結果顯示SAC在脂質(zhì)抗氧化作用方面的能力較強；體內(nèi)抗氧化實驗結果顯示：模型組中血清和肝臟的SOD和GSH-PX的活性均低于正常組，MDA的水平和GSH的含量均高于正常組（p0.05）。SAC低、中、高劑量組中隨著藥物濃度的遞增，SOD和GSH-PX的活性也隨著增加，而MDA的水平和GSH的含量處于一個逐漸遞減的趨勢且呈劑量依賴性；Western blot法檢測結果顯示：SAC低、中、高劑量組中Bcl-2表達明顯升高，而Cleaved caspase-3的表達則明顯降低。 結論: SAC具有較強的體內(nèi)、外抗氧化能力，特別是抗脂質(zhì)過氧化能力較強。同時SAC可明顯降低NAFLD大鼠體內(nèi)TG、TC、ALT、AST、HDL-C和NEFA水平，增加LDL-C水平；提高SOD和GSH-PX的活性,降低MDA的水平和GSH的含量；另外SAC可上調(diào)Bcl-2的表達以及下調(diào)Cleaved Caspase-3的表達。以上實驗結果表明SAC具有明顯降低非酒精性脂肪肝大鼠體內(nèi)血脂水平,并通過抑制脂質(zhì)過氧化的反應及線粒體的凋亡來保護肝細胞。
【關鍵詞】：非酒精性脂肪肝 凋亡 S-烯丙基半胱氨酸 氧化應激 肝損傷
【學位授予單位】：武漢科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮寫對照表9-13
• 前言13-15
• 第一部分 SAC 對 NAFLD 大鼠血脂的影響及肝保護作用15-26
• 1.1 材料與儀器15-16
• 1.1.1 血脂水平檢測相關試劑15
• 1.1.2 儀器15-16
• 1.1.3 藥品16
• 1.2 方法16-19
• 1.2.1 實驗動物模型分組及模型制備16
• 1.2.2 動物體重及肝指數(shù)檢測16
• 1.2.3 血清及肝臟中血脂水平的檢測16
• 1.2.4 甘油三酯(TG)的檢測16-17
• 1.2.5 膽固醇(TC)的檢測17
• 1.2.6 高密度脂蛋白(HDL-C)的檢測17
• 1.2.7 低密度脂蛋白(LDL-C)的檢測17
• 1.2.8 游離脂肪酸(NEFA)的測定17-18
• 1.2.9 組織蛋白濃度的測定18
• 1.2.10 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的檢測18
• 1.2.11 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的檢測18
• 1.2.12 石蠟包埋切片18-19
• 1.2.13 HE 染色19
• 1.2.14 統(tǒng)計學分析19
• 1.3 結果19-24
• 1.3.1 大鼠體重以及肝指數(shù)19-21
• 1.3.2 大鼠血清和肝臟 TG、TC、HDL-C、LDL-C 和 FFA 水平21-22
• 1.3.3 AST 和 ALT 水平22-23
• 1.3.4 HE 染色23-24
• 1.4 討論24-26
• 第二部分 SAC 抗大鼠非酒精性脂肪肝機制的研究26-42
• 2.1 材料與儀器26-29
• 2.1.1 材料26-28
• 2.1.2 儀器28
• 2.1.3 主要試劑配置28-29
• 2.2 方法29-35
• 2.2.1 總還原力的檢測29-30
• 2.2.2 β-胡蘿卜素漂白實驗30
• 2.2.3 硫氰酸鐵法30
• 2.2.4 硫代巴比妥酸法30-31
• 2.2.5 DPPH 自由基清除實驗31
• 2.2.6 ABTS 自由基清除實驗31
• 2.2.7 超氧化物歧化酶活力的測定31-32
• 2.2.8 丙二醛含量的測定32
• 2.2.9 谷胱甘肽含量的測定32-33
• 2.2.10 谷胱甘肽過氧化物酶的測定33-34
• 2.2.11 Western blot 法檢測肝組織 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表達34
• 2.2.12 統(tǒng)計學分析34-35
• 2.3 結果35-39
• 2.3.1 總還原力的檢測35
• 2.3.2 β-胡蘿卜素漂白35
• 2.3.3 FTC 法和 TBA 法35
• 2.3.4 DPPH 和 ABTS 清除自由基活性35-36
• 2.3.5 大鼠血清和肝臟 SOD 及 GSH-PX 活性、MDA 和 GSH 水平36-38
• 2.3.6 Western blot 法檢測肝組織中 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表達38-39
• 2.4. 討論39-42
• 結論42-43
• 參考文獻43-47
• 致謝47-48
• 綜述48-57
• 參考文獻53-57
• 附錄 1 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文57-58
• 附錄 2 攻讀碩士學位期間參加的科研項目58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 朱科倫;朱郇憫;曾文鋌;梁建新;;非酒精性脂肪肝流行病學的研究進展[J];廣州醫(yī)藥;2011年04期

2 夏菁;孫濤;;非酒精性脂肪肝發(fā)病機制及治療研究進展[J];海軍總醫(yī)院學報;2010年02期

3 戴寧;非酒精性脂肪肝[J];遼寧醫(yī)學雜志;2004年02期

4 趙保路;;自由基、營養(yǎng)、天然抗氧化劑與衰老[J];生物物理學報;2010年01期

  本文關鍵詞：S-烯丙基半胱氨酸對大鼠非酒精性脂肪肝的影響以及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：452213