發(fā)布時(shí)間：2017-06-15 11:01

  本文關(guān)鍵詞：S-烯丙基半胱氨酸對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的影響以及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 研究大蒜中的主要成分S-烯丙基半胱氨酸(S-allylcysteine, SAC)對(duì)非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)大鼠的肝保護(hù)作用，并對(duì)其可能的作用機(jī)制進(jìn)行探討。 方法: 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組及造模：正常組(Normal)、非酒精性脂肪肝模型組(Model)、SAC低、中、高劑量組及阿伐他汀鈣組(Atorvastatin calcium, ATC)。其中正常組喂養(yǎng)普通飼料，其余各組喂養(yǎng)高脂飼料。SAC低、中、高組分別每天灌胃(Intragastrical, ig)同體積不同濃度的SAC，其劑量分別為25mg/kg，50mg/kg，，100mg/kg。高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)12周，每天稱取各組大鼠觀察其體重變化以及大鼠活動(dòng)情況。于第4，6，8周模型組剪尾取血檢測(cè)血清中甘油三酯(Total triglyceride,TG)、膽固醇(Total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白(High density lipoproteincholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)，并按血脂水平、體重以及肝組織切片病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)篩選符合條件的脂肪肝大鼠。 2.SAC體外抗氧化作用：采用DPPH、ABTS、還原力、β-胡蘿卜素漂白法(β-beaching)、硫氰酸鐵法(Ferric thioeyanate, FTC)和硫代巴比妥酸法(Thiobarbituric acid, TBA)方法檢測(cè)SAC的體外抗氧化作用。 3.SAC對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的血脂水平影響以及體內(nèi)抗氧化作用：連續(xù)ig12周后，各組大鼠心臟取血并分離血清，同時(shí)將每組大鼠肝組織勻漿，檢測(cè)血清和肝臟中TG、TC、HDL-C、LDL-C、游離脂肪酸(Nonesterified Free fatty acid,NEFA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)含量和谷胱甘肽過(guò)氧化酶(Glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性。 4.SAC對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的肝損傷的影響：檢測(cè)血清和肝組織內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase, ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平以及肝臟組織切片HE (Hematoxylin and eosin stain)染色。同時(shí)用Western blot法檢測(cè)肝組織中凋亡相關(guān)因子Bcl-2和Cleaved Caspase-3表達(dá)。 結(jié)果: 1.給藥連續(xù)12周后，與正常組相比，喂養(yǎng)高脂飼料的模型組體重明顯重于正常組，有顯著性差異（p0.05）；與模型組相比，SAC低、中、高劑量組和ATC組均有不同程度的體重減輕，且SAC高劑量組和ATC組均有顯著性差異（p0.05）。在肝重方面，模型組肝重明顯重于正常組及SAC高劑量組和ATC組。與正常組相比，模型組肝指數(shù)有顯著差異（p0.01）；與模型組相比，SAC高劑量組和ATC組肝指數(shù)均有顯著性差異（p0.01）；HE染色結(jié)果顯示：正常組肝細(xì)胞在12周末未出現(xiàn)任何脂肪侵潤(rùn)，而模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)大量的脂肪空泡，SAC低、中、高劑量組脂肪空泡相對(duì)減少，且脂質(zhì)沉積的程度有一定的緩解。與模型組相比，血清和肝組織中ALT、AST水平均下降且有顯著性差異（p0.05）；與正常組相比，TG、TC、LDL-C顯著升高，HDL-C明顯降低且有明顯差異（p0.05）。與模型組相比，TG、TC、LDL-C隨著SAC濃度升高而降低，而HDL-C則降低，均有顯著性差異（p0.05）。 2.抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SAC有一定的抗氧化作用；而β-beaching、FTC和TBA法的結(jié)果顯示SAC在脂質(zhì)抗氧化作用方面的能力較強(qiáng)；體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組中血清和肝臟的SOD和GSH-PX的活性均低于正常組，MDA的水平和GSH的含量均高于正常組（p0.05）。SAC低、中、高劑量組中隨著藥物濃度的遞增，SOD和GSH-PX的活性也隨著增加，而MDA的水平和GSH的含量處于一個(gè)逐漸遞減的趨勢(shì)且呈劑量依賴性；Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示：SAC低、中、高劑量組中Bcl-2表達(dá)明顯升高，而Cleaved caspase-3的表達(dá)則明顯降低。 結(jié)論: SAC具有較強(qiáng)的體內(nèi)、外抗氧化能力，特別是抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力較強(qiáng)。同時(shí)SAC可明顯降低NAFLD大鼠體內(nèi)TG、TC、ALT、AST、HDL-C和NEFA水平，增加LDL-C水平；提高SOD和GSH-PX的活性,降低MDA的水平和GSH的含量；另外SAC可上調(diào)Bcl-2的表達(dá)以及下調(diào)Cleaved Caspase-3的表達(dá)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SAC具有明顯降低非酒精性脂肪肝大鼠體內(nèi)血脂水平,并通過(guò)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的反應(yīng)及線粒體的凋亡來(lái)保護(hù)肝細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪肝 凋亡 S-烯丙基半胱氨酸 氧化應(yīng)激 肝損傷
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 英文縮寫對(duì)照表9-13
• 前言13-15
• 第一部分 SAC 對(duì) NAFLD 大鼠血脂的影響及肝保護(hù)作用15-26
• 1.1 材料與儀器15-16
• 1.1.1 血脂水平檢測(cè)相關(guān)試劑15
• 1.1.2 儀器15-16
• 1.1.3 藥品16
• 1.2 方法16-19
• 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型分組及模型制備16
• 1.2.2 動(dòng)物體重及肝指數(shù)檢測(cè)16
• 1.2.3 血清及肝臟中血脂水平的檢測(cè)16
• 1.2.4 甘油三酯(TG)的檢測(cè)16-17
• 1.2.5 膽固醇(TC)的檢測(cè)17
• 1.2.6 高密度脂蛋白(HDL-C)的檢測(cè)17
• 1.2.7 低密度脂蛋白(LDL-C)的檢測(cè)17
• 1.2.8 游離脂肪酸(NEFA)的測(cè)定17-18
• 1.2.9 組織蛋白濃度的測(cè)定18
• 1.2.10 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的檢測(cè)18
• 1.2.11 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的檢測(cè)18
• 1.2.12 石蠟包埋切片18-19
• 1.2.13 HE 染色19
• 1.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析19
• 1.3 結(jié)果19-24
• 1.3.1 大鼠體重以及肝指數(shù)19-21
• 1.3.2 大鼠血清和肝臟 TG、TC、HDL-C、LDL-C 和 FFA 水平21-22
• 1.3.3 AST 和 ALT 水平22-23
• 1.3.4 HE 染色23-24
• 1.4 討論24-26
• 第二部分 SAC 抗大鼠非酒精性脂肪肝機(jī)制的研究26-42
• 2.1 材料與儀器26-29
• 2.1.1 材料26-28
• 2.1.2 儀器28
• 2.1.3 主要試劑配置28-29
• 2.2 方法29-35
• 2.2.1 總還原力的檢測(cè)29-30
• 2.2.2 β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)30
• 2.2.3 硫氰酸鐵法30
• 2.2.4 硫代巴比妥酸法30-31
• 2.2.5 DPPH 自由基清除實(shí)驗(yàn)31
• 2.2.6 ABTS 自由基清除實(shí)驗(yàn)31
• 2.2.7 超氧化物歧化酶活力的測(cè)定31-32
• 2.2.8 丙二醛含量的測(cè)定32
• 2.2.9 谷胱甘肽含量的測(cè)定32-33
• 2.2.10 谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的測(cè)定33-34
• 2.2.11 Western blot 法檢測(cè)肝組織 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表達(dá)34
• 2.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析34-35
• 2.3 結(jié)果35-39
• 2.3.1 總還原力的檢測(cè)35
• 2.3.2 β-胡蘿卜素漂白35
• 2.3.3 FTC 法和 TBA 法35
• 2.3.4 DPPH 和 ABTS 清除自由基活性35-36
• 2.3.5 大鼠血清和肝臟 SOD 及 GSH-PX 活性、MDA 和 GSH 水平36-38
• 2.3.6 Western blot 法檢測(cè)肝組織中 Bcl-2 和 Cleaved Caspase-3 表達(dá)38-39
• 2.4. 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 綜述48-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 附錄 1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文57-58
• 附錄 2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 朱科倫;朱郇憫;曾文鋌;梁建新;;非酒精性脂肪肝流行病學(xué)的研究進(jìn)展[J];廣州醫(yī)藥;2011年04期

2 夏菁;孫濤;;非酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制及治療研究進(jìn)展[J];海軍總醫(yī)院學(xué)報(bào);2010年02期

3 戴寧;非酒精性脂肪肝[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

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  本文關(guān)鍵詞：S-烯丙基半胱氨酸對(duì)大鼠非酒精性脂肪肝的影響以及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：452213