目的:克羅恩病(Crohn’s disease,CD)是一種病因尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性病變,該病呈慢性經(jīng)過,反復(fù)發(fā)作,逐漸形成腸壁纖維化,導(dǎo)致腸蠕動功能下降,甚至腸腔狹窄,腸梗阻�，F(xiàn)有的藥物只能減輕炎癥和改善癥狀,并不能改善腸纖維化。因此探索腸纖維化發(fā)病的分子機(jī)制以延緩或阻斷纖維化發(fā)生發(fā)展進(jìn)程的策略,具有重要的實際意義。IL-17A是一種炎性細(xì)胞因子,其表達(dá)水平異常被認(rèn)為是多種急慢性疾病發(fā)生發(fā)展的潛在診斷標(biāo)志。研究證實CD患者腸黏膜組織中有大量的Th17細(xì)胞浸潤,且Th17及IL-17A水平較正常組明顯增高。但I(xiàn)L-17A是否參與CD腸纖維化的發(fā)生發(fā)展目前少見報道。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在組織纖維化發(fā)生中的作用越來越受到重視。上皮細(xì)胞可發(fā)生EMT,其細(xì)胞表型和功能發(fā)生改變,上皮細(xì)胞標(biāo)志物消失,取而代之的是大量纖維化性間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物形成,并獲得產(chǎn)生大量膠原蛋白和纖維連接蛋白的能力,使ECM沉積,促進(jìn)纖維化形成。本研究主要探討IL-17A是否參與CD相關(guān)腸纖維化及其可能的作用機(jī)制。方法:1、收集2012年8月至20...

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【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分：IL-17A在CD患者腸黏膜組織中的表達(dá)及與EMT指標(biāo)相關(guān)性
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 臨床組織
            2.1.2 藥品與試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 Real-timePCR法檢測臨床腸黏膜活檢組織中IL-17A及EMT相關(guān)指標(biāo)的mRNA轉(zhuǎn)錄水平
            2.2.2 Western免疫印跡分析臨床組織中IL-17A及EMT相關(guān)指標(biāo)的蛋白表達(dá)水平
        2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 實驗結(jié)果
        3.1 IL-17AmRNA及蛋白表達(dá)水平在CD及對照組患者腸黏膜活檢組織中的變化
        3.2 E-cadherinmRNA及蛋白表達(dá)水平在CD及對照組患者腸黏膜活檢組織中的變化
        3.3 vimentinmRNA及蛋白表達(dá)水平在CD及對照組患者腸黏膜活檢組織中的變化
        3.4 snailmRNA及蛋白表達(dá)水平在CD及對照組患者腸黏膜活檢組織中的變化
        3.5 α-SMA蛋白表達(dá)水平在CD及對照組患者腸黏膜活檢組織中的變化
        3.6 IL-17AmRNA轉(zhuǎn)錄水平與EMT指標(biāo)的相關(guān)性
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分：IL-17A誘導(dǎo)腸上皮細(xì)胞發(fā)生EMT
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 實驗儀器
            2.1.3 主要試劑
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞干預(yù)
            2.2.3 細(xì)胞形態(tài)觀察
            2.2.4 免疫熒光觀察細(xì)胞EMT相關(guān)指標(biāo)的變化
            2.2.5 Real-timePCR反應(yīng)測定ColIα1mRNA的轉(zhuǎn)錄水平
            2.2.6 WesternBlot檢測EMT相關(guān)蛋白及纖維化蛋白的表達(dá)
        2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 實驗結(jié)果
        3.1 IL-17A對IEC-6細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.2 免疫熒光觀察IL-17A對E-cadherin表達(dá)的影響
        3.3 Real-timePCR檢測IEC-6細(xì)胞經(jīng)IL-17A刺激后ColIα1的mRNA水平
        3.4 Westernblot檢測IL-17A對EMT及纖維化指標(biāo)的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第三部分：阻斷IL-17A改善實驗性結(jié)腸炎腸纖維化
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 藥品與試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 實驗對象與分組
            2.2.1 實驗動物
            2.2.2 模型建立與實驗分組
            2.2.3 標(biāo)本的采集與處理
            2.2.4 觀察指標(biāo)及檢測方法
            2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 各組小鼠一般狀況、疾病活動指數(shù)(DAI)及存活率
        3.2 各組小鼠結(jié)腸組織大體形態(tài)改變
        3.3 各組小鼠結(jié)腸組織的病理表現(xiàn)
        3.4 各組小鼠結(jié)腸組織Masson染色鏡下表現(xiàn)
        3.5 各組小鼠結(jié)腸組織羥脯氨酸含量
        3.6 各組小鼠EMT相關(guān)蛋白及纖維化蛋白的表達(dá)情況
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間所取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：4036824