肝纖維化是所有慢性肝臟疾病形成的共同病理反應過程,活化的肝星狀細胞分泌的細胞外基質(zhì)(ECM)的增多是肝臟纖維化發(fā)病的最主要特征之一,肝星狀細胞(HSC)的增殖和活化是肝臟纖維化形成的關鍵環(huán)節(jié),抑制HSC的增殖和活化成為抗肝纖維化治療的重要手段之一。研究表明組蛋白甲基化在HSC的增殖活化過程中起到了很重要的作用,但具體機制尚不明確。為了更進一步地探討組蛋白甲基化在肝纖維化形成過程中的重要作用及其機制,通過在體與離體兩個不同的角度,首先觀察在肝纖維化組織中和活化的肝星狀細胞中與組蛋白甲基化有關的轉(zhuǎn)移酶的表達變化情況,再觀察組蛋白甲基化有關的轉(zhuǎn)移酶對HSC增殖和活化的影響,最后更深一步地探討了其部分作用機制。本文主要研究內(nèi)容包括下面四個部分:1.CCl4誘導的大鼠肝臟組織中EZH2和Dkk1的表達變化。將40只大鼠分為正常組10只和模型組30只,取CCl4進行腹腔注射用以建立大鼠肝纖維化的模型。模型組的大鼠以50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)進行腹腔注射,每周注射2次,共注射12周;正常組以相同劑量植物油進行腹腔注射,同樣每周注射2次,共注射12周。在12周結束后,處死實驗大鼠并獲取肝臟...

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮寫詞對照
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英文摘要
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗動物
    2.2 藥品與試劑
        2.2.1 抗體
        2.2.2 主要藥品與試劑
    2.3 儀器與設備
    2.4 圖象分析軟件
3 實驗方法
    3.1 實驗動物的處理與模型的建立
    3.2 大鼠肝星狀細胞的培養(yǎng)
    3.3 肝組織病理學檢測
        3.3.1 大鼠肝組織病理HE染色
        3.3.2 大鼠肝組織病理Masson染色
    3.4 免疫組織化學檢測
    3.5 MTT增殖實驗
    3.6 肝臟組織與肝星狀細胞總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄
        3.6.1RNA提取
        3.6.2 逆轉(zhuǎn)錄
    3.7 PCR擴增實驗
        3.7.1 引物序列
        3.7.2 Real-time PCR
    3.8 Western Blot實驗
        3.8.1 用液的配制
        3.8.2 蛋白樣品制備
        3.8.3 SDS-PAGE電泳
        3.8.4 轉(zhuǎn)膜
        3.8.5 抗原抗體反應
        3.8.6 顯影
        3.8.7 顯影結果的分析
    3.9 siRNA實驗
        3.9.1 EZH2的siRNA實驗
        3.9.2 Dkk1的siRNA實驗
    3.10 統(tǒng)計學處理
4 實驗結果
    4.1 CCl₄誘導的大鼠肝組織中EZH2和Dkk1的表達變化
        4.1.1 肝臟的組織病理學檢測
        4.1.2 CCl₄誘導的大鼠肝纖維化組織中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表達變化
        4.1.3 CCl₄誘導的大鼠肝纖維化組織中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表達變化
    4.2 TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞中EZH2和Dkk1的表達變化
        4.2.1 TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表達變化
        4.2.2 TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表達變化
    4.3 EZH2對TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞增殖活化的影響
        4.3.1 EZH2對TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞增殖的影響
        4.3.2 EZH2對TGF-β1 誘導的HSC-T6細胞活化的影響
    4.4 EZH2影響HSCs增殖活化的部分機制研究
        4.4.1 EZH2介導Dkk1的表達下降激活了Wnt/β-catenin通路從而影響HSCs的增殖活化
        4.4.2 EZH2通過激活ERK和PI3K/AKT通路從而促進HSCs的增殖活化
5 討論
6 結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：4022273