肝纖維化是所有慢性肝臟疾病形成的共同病理反應(yīng)過程,活化的肝星狀細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的增多是肝臟纖維化發(fā)病的最主要特征之一,肝星狀細(xì)胞(HSC)的增殖和活化是肝臟纖維化形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié),抑制HSC的增殖和活化成為抗肝纖維化治療的重要手段之一。研究表明組蛋白甲基化在HSC的增殖活化過程中起到了很重要的作用,但具體機(jī)制尚不明確。為了更進(jìn)一步地探討組蛋白甲基化在肝纖維化形成過程中的重要作用及其機(jī)制,通過在體與離體兩個(gè)不同的角度,首先觀察在肝纖維化組織中和活化的肝星狀細(xì)胞中與組蛋白甲基化有關(guān)的轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)變化情況,再觀察組蛋白甲基化有關(guān)的轉(zhuǎn)移酶對(duì)HSC增殖和活化的影響,最后更深一步地探討了其部分作用機(jī)制。本文主要研究?jī)?nèi)容包括下面四個(gè)部分:1.CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝臟組織中EZH2和Dkk1的表達(dá)變化。將40只大鼠分為正常組10只和模型組30只,取CCl4進(jìn)行腹腔注射用以建立大鼠肝纖維化的模型。模型組的大鼠以50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)進(jìn)行腹腔注射,每周注射2次,共注射12周;正常組以相同劑量植物油進(jìn)行腹腔注射,同樣每周注射2次,共注射12周。在12周結(jié)束后,處死實(shí)驗(yàn)大鼠并獲取肝臟...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
英文摘要
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 藥品與試劑
        2.2.1 抗體
        2.2.2 主要藥品與試劑
    2.3 儀器與設(shè)備
    2.4 圖象分析軟件
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理與模型的建立
    3.2 大鼠肝星狀細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.3 肝組織病理學(xué)檢測(cè)
        3.3.1 大鼠肝組織病理HE染色
        3.3.2 大鼠肝組織病理Masson染色
    3.4 免疫組織化學(xué)檢測(cè)
    3.5 MTT增殖實(shí)驗(yàn)
    3.6 肝臟組織與肝星狀細(xì)胞總RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄
        3.6.1RNA提取
        3.6.2 逆轉(zhuǎn)錄
    3.7 PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)
        3.7.1 引物序列
        3.7.2 Real-time PCR
    3.8 Western Blot實(shí)驗(yàn)
        3.8.1 用液的配制
        3.8.2 蛋白樣品制備
        3.8.3 SDS-PAGE電泳
        3.8.4 轉(zhuǎn)膜
        3.8.5 抗原抗體反應(yīng)
        3.8.6 顯影
        3.8.7 顯影結(jié)果的分析
    3.9 siRNA實(shí)驗(yàn)
        3.9.1 EZH2的siRNA實(shí)驗(yàn)
        3.9.2 Dkk1的siRNA實(shí)驗(yàn)
    3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 CCl₄誘導(dǎo)的大鼠肝組織中EZH2和Dkk1的表達(dá)變化
        4.1.1 肝臟的組織病理學(xué)檢測(cè)
        4.1.2 CCl₄誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化組織中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表達(dá)變化
        4.1.3 CCl₄誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化組織中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表達(dá)變化
    4.2 TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞中EZH2和Dkk1的表達(dá)變化
        4.2.1 TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1mRNA的表達(dá)變化
        4.2.2 TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞中 α-SMA、EZH2和Dkk1蛋白的表達(dá)變化
    4.3 EZH2對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞增殖活化的影響
        4.3.1 EZH2對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞增殖的影響
        4.3.2 EZH2對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的HSC-T6細(xì)胞活化的影響
    4.4 EZH2影響HSCs增殖活化的部分機(jī)制研究
        4.4.1 EZH2介導(dǎo)Dkk1的表達(dá)下降激活了Wnt/β-catenin通路從而影響HSCs的增殖活化
        4.4.2 EZH2通過激活ERK和PI3K/AKT通路從而促進(jìn)HSCs的增殖活化
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4022273