肝纖維化(liver fibrosis)是各種慢性肝病的共同病理過(guò)程,嚴(yán)重的肝纖維化可發(fā)展成肝硬化甚至肝癌。在我國(guó),肝纖維化、肝硬化多與病毒性肝炎有關(guān),往往是由于慢性病毒性肝炎遷延難愈而造成的。針對(duì)慢性肝炎肝纖維化的病理特征,本文采用CCl4和PS誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型,研究ALR對(duì)大鼠肝纖維化的治療作用并探討其抗肝纖維化的機(jī)制。 研究發(fā)現(xiàn)在各種急、慢性肝損傷動(dòng)物模型中,ALR可促進(jìn)肝細(xì)胞再生,減輕肝損傷,改善肝功能,增加動(dòng)物存活率和存活時(shí)間。本文采用尾靜脈注射pcDNA3.1-hALR重組質(zhì)粒治療毒物誘導(dǎo)和免疫性大鼠肝纖維化。 研究結(jié)果顯示,ALR基因治療可明顯減輕大鼠肝損傷和肝纖維化,其機(jī)制可能是抑制肝細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激,下調(diào)各種致纖維化因子,阻止肝星狀細(xì)胞的活化。ALR治療可顯著減少α-SMA的表達(dá),減少肝內(nèi)活性氧簇水平,并下調(diào)TGF-β1、PDGF-BB和TIMP-1的表達(dá)。與肝硬化模型組大鼠相比,治療組大鼠的血清AST, ALT和AKP水平明顯降低,但是,血清ALB明顯高于模型組大鼠而接近健康對(duì)照組。血清生化指標(biāo)的變化與肝組織病理檢查結(jié)果相符,治療組大鼠肝組織H&E染色顯...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫
第一章 前言
    1.1 肝臟
    1.2 肝纖維化
    1.3 基因治療肝纖維化
    1.4 ALR與肝纖維化治療
    1.5 研究意義
第二章 ALR重組質(zhì)粒的制備
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、質(zhì)粒及載體
        2.1.2 酶類
        2.1.3 試劑盒
        2.1.4 化學(xué)試劑
        2.1.5 分子量標(biāo)準(zhǔn)
        2.1.6 培養(yǎng)基等
        2.1.7 儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.2 pcDNA3.1-hALR重組質(zhì)粒的鑒定
        2.2.3 pcDNA3.1-hALR重組質(zhì)粒的大量提取(試劑盒法)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果
        2.3.2 陽(yáng)性克隆序列測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 質(zhì)粒大量提取及酶切鑒定結(jié)果
    2.4 討論
第三章 ALR對(duì)CCl₄誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的治療作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑及試劑盒
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 肝纖維化大鼠模型的建立
        3.2.2 質(zhì)粒DNA大量提取
        3.2.3 肝纖維化大鼠的治療
        3.2.4 大鼠肝臟組織病理學(xué)檢查
        3.2.5 飽和苦味酸-天狼星紅染色
        3.2.6 肝組織羥基脯氨酸含量測(cè)定
        3.2.7 血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定
        3.2.8 抗氧化指標(biāo)測(cè)定
        3.2.9 ATP酶活力測(cè)定
        3.2.10 免疫組化
        3.2.11 RNA制備和分析
        3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況
        3.3.2 大鼠肝臟裸眼觀察
        3.3.3 肝系數(shù)和脾系數(shù)分析
        3.3.4 肝組織病理學(xué)檢查
        3.3.5 膠原含量分析
        3.3.6 肝臟組織病理學(xué)分級(jí)
        3.3.7 ALR對(duì)大鼠肝功能指標(biāo)的影響
        3.3.8 基因轉(zhuǎn)染后ALR在大鼠肝臟中的表達(dá)
        3.3.9 肝星狀細(xì)胞的激活
        3.3.10 ALR對(duì)致纖因子TGF-β1和PDGF-BB表達(dá)的影響
        3.3.11 ALR對(duì)大鼠肝組織MDA、SOD及GPx的影響
        3.3.12 ALR對(duì)肝細(xì)胞ATP酶的影響
    3.4 討論
第四章 ALR對(duì)PS誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的治療作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 肝纖維化動(dòng)物模型的建立
        4.2.2 質(zhì)粒DNA大量提取
        4.2.3 肝纖維化大鼠的治療
        4.2.4 大鼠肝臟組織病理學(xué)和其他各項(xiàng)指標(biāo)檢查
        4.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況
        4.3.2 大鼠肝臟裸眼觀察
        4.3.3 肝系數(shù)和脾系數(shù)分析
        4.3.4 肝組織病理學(xué)檢查及肝纖維化病理分級(jí)
        4.3.5 膠原含量分析
        4.3.6 ALR對(duì)PS誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠肝功能的影響
        4.3.7 肝組織中α-SMA的分布及表達(dá)
        4.3.8 ALR對(duì)致纖因子表達(dá)的影響
        4.3.9 ALR對(duì)大鼠肝臟MDA和SOD的影響
    4.4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
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