酒精性肝損傷(Alcoholic Liver Injury,ALI)是由于長期或過量的酒精攝入導(dǎo)致的肝細胞功能障礙性疾病,是我國常見的肝臟疾病。目前對于ALI的病因普遍接受的觀點是,酒精及其在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物使腸道通透性增加,使內(nèi)毒素/脂多糖(LPS)釋放,刺激肝臟巨噬細胞活化,產(chǎn)生大量的促炎細胞因子,從而造成了肝細胞的損傷。我們課題組的前期研究表明,在酒精性肝損傷中肝細胞凋亡廣泛發(fā)生,抑制肝細胞凋亡是防治肝損傷的重要措施。除戒酒以及保肝藥輔助治療以外,酒精性肝損傷目前尚無有效的治療方案。因此,進一步研究其發(fā)病機制,尋找有效的治療靶點是亟待解決的科研問題。白細胞介素9(Interleukin-9,IL-9)主要是由Th9細胞產(chǎn)生,盡管IL-9被認為是經(jīng)典的Th2相關(guān)的細胞因子,研究表明IL-9與炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病密切相關(guān),在過去幾年受到廣泛關(guān)注。然而,IL-9在酒精性肝損傷中的作用研究尚無文獻報道。本課題通過尾靜脈注射腺相關(guān)病毒(AAV9)在體過表達IL-9,旨在探究IL-9對酒精性肝損傷巨噬細胞相關(guān)的炎癥反應(yīng)以及肝細胞凋亡的影響。在體外實驗中我們利用RAW264.7和AML-12...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗細胞
        2.1.3 主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 酒精性肝損傷動物模型的建立
        2.3.2 小鼠單核細胞RAW264.7 以及小鼠正常肝細胞AML-12 的培養(yǎng)
        2.3.3 Western Blot實驗
            2.3.3.1 貼壁細胞總蛋白的提取
            2.3.3.2 制膠及SDS-PAGE電泳
            2.3.3.3 濕轉(zhuǎn)
            2.3.3.4 孵一抗和孵二抗
            2.3.3.5 顯影
            2.3.3.6 蛋白條帶灰度值的分析
        2.3.4 ELISA分析
        2.3.5 LipofectamineTM2000 瞬時轉(zhuǎn)染si RNA-STAT3 沉默STAT3
        2.3.6 流式細胞術(shù)檢測AML-12肝細胞凋亡
        2.3.7 TUNEL染色檢測細胞凋亡
        2.3.8 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 IL-9在酒精性肝損傷中的表達變化
        3.1.1 酒精性肝損傷動物模型的建立
        3.1.2 IL-9在原代肝臟巨噬細胞以及酒精刺激的RAW264.7細胞中的表達變化
    3.2利用尾靜脈注射腺相關(guān)病毒(AAV9)在體過表達IL-9
        3.2.1 尾靜脈注射腺相關(guān)病毒(AAV9)
        3.2.2 檢測病毒過表達IL-9成功與否
    3.3 IL-9對肝臟損傷的影響
    3.4 IL-9對酒精性肝損傷中炎癥反應(yīng)的影響
        3.4.1 IL-9對酒精性肝損傷動物模型中促炎因子的影響
        3.4.2 IL-9對酒精刺激的RAW264.7細胞促炎因子的影響
    3.5 IL-9對酒精性肝損傷中肝細胞凋亡的影響
        3.5.1 IL-9對酒精性肝損傷動物模型中肝細胞凋亡的影響
        3.5.2 巨噬細胞分泌的IL-9對肝細胞凋亡的影響
    3.6 IL-9抑制酒精誘導(dǎo)的肝細胞凋亡的機制研究
        3.6.1 IL-9/IL-9R與 STAT3 信號通路在酒精性肝損傷肝細胞凋亡中的作用
        3.6.2 沉默STAT3對肝細胞凋亡的影響
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述 巨噬細胞在肝臟疾病中的作用
    參考文獻



本文編號：3960850