一、研究背景非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)包括肝細(xì)胞單純性脂肪變、非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及由其進(jìn)展的肝纖維化和肝硬化[1]。由于肥胖和代謝綜合癥發(fā)病率快速增加,NAFLD成為全世界范圍內(nèi)最主要的慢性肝病之一。與單純性脂肪變相比,NASH患者進(jìn)展為終末期肝病的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。目前,NASH發(fā)生及發(fā)展為肝纖維化的分子機(jī)制尚未闡明,尚無特異性治療NASH及NASH相關(guān)肝纖維化的藥物。臨床及動(dòng)物研究結(jié)果已證實(shí),肝組織中性粒細(xì)胞浸潤增強(qiáng)是NASH的重要組織病理學(xué)特征之一[1]。中性粒細(xì)胞顆粒蛋白是中性粒細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)控作用的重要因子。Micro RNA-223(miR-223)是一種在中性粒細(xì)胞中具有高豐度的micro RNA,其在多種炎癥狀態(tài)下調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的活化及炎性反應(yīng)。研究miR-223及中性粒細(xì)胞顆粒蛋白調(diào)控NASH相關(guān)肝纖維化的功能和分子機(jī)制對于深入揭示NASH進(jìn)展為肝纖維化的關(guān)鍵病理生理機(jī)制以及發(fā)現(xiàn)藥物研發(fā)的新型、潛在靶點(diǎn)具有重要科學(xué)意義。二、研究目的...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 NASH相關(guān)的肝臟炎癥及肝纖維化
        1.1.1 NASH的概念及流行病學(xué)特征
        1.1.2 組織病理學(xué)特征及診斷標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.3 發(fā)病機(jī)制
    1.2 中性粒細(xì)胞與肝臟天然免疫反應(yīng)、肝臟代謝性炎癥及其纖維化
        1.2.1 中性粒細(xì)胞概述
        1.2.2 中性粒細(xì)胞與肝臟天然免疫反應(yīng)
        1.2.3 中性粒細(xì)胞分泌的天然免疫介導(dǎo)因子
        1.2.4 中性粒細(xì)胞在NASH相關(guān)的肝臟炎癥及肝纖維化過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能
    1.3 MiR-223與中性粒細(xì)胞功能、肝臟代謝性炎癥及肝纖維化
        1.3.1 Micro RNA及 miR-223 概述
        1.3.2 MiR-223調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞功能
        1.3.3 MiR-223在肝臟代謝性炎癥及纖維化過程中發(fā)揮重要功能
    1.4 擬解決科學(xué)問題及研究意義
    1.5 研究策略
第二章 實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)材料及儀器設(shè)備
    2.1 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.1 動(dòng)物來源及飼養(yǎng)環(huán)境
        2.1.2 樣品收集
        2.1.3 樣品處理
        2.1.4 病理學(xué)檢測
        2.1.5 蛋白檢測
        2.1.6 核酸檢測
        2.1.7 生化檢測
        2.1.8 肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞(non-parenchymal cell,NPC)的分離
        2.1.9 原代中性粒細(xì)胞分離、骨髓細(xì)胞分離
        2.1.10 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 飼料
        2.2.2 化學(xué)試劑
        2.2.3 抗體
        2.2.4 引物
    2.3 儀器設(shè)備
    2.4 溶液配方
第三章 NASH相關(guān)肝纖維化動(dòng)物模型的誘導(dǎo)與評價(jià)
    3.1 引言
        3.1.1 NAFLD實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)
        3.1.2 NAFLD理想動(dòng)物模型的標(biāo)準(zhǔn)
        3.1.3 目前NASH的動(dòng)物模型及其優(yōu)勢和局限
        3.1.4 研究目標(biāo)與對策
    3.2 NASH相關(guān)肝纖維化模型的誘導(dǎo)方案及結(jié)果
        3.2.1 模型誘導(dǎo)方案
        3.2.2 模型誘導(dǎo)結(jié)果
    3.3 本章小結(jié)
第四章 MiR-223 介導(dǎo)NASH相關(guān)肝纖維化的病理生理學(xué)功能研究
    4.1 引言
    4.2 MiR-223 的肝內(nèi)豐度在CDAHFD飲食飼喂小鼠中顯著升高
    4.3 成功獲得miR-223 敲除(miR-223 KO或 miR-223-/-)小鼠
    4.4 MiR-223 缺失對CDAHFD飲食誘導(dǎo)的NASH肝臟炎癥及其相關(guān)肝纖維化的影響
        4.4.1 實(shí)驗(yàn)方案
        4.4.2 檢測結(jié)果
    4.5 小結(jié)
第五章 MiR-223調(diào)控中性粒細(xì)胞肝臟浸潤及其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的功能研究
    5.1 引言
    5.2 MiR-223 缺失顯著增加CDAHFD飲食誘導(dǎo)小鼠中性粒細(xì)胞的肝臟浸潤
    5.3 MiR-223缺失導(dǎo)致中性粒細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)
    5.4 MiR-223 缺失顯著增加CDAHFD飲食誘導(dǎo)小鼠肝臟中性粒細(xì)胞顆粒蛋白的表達(dá)
    5.5 多種祛濕化濁中藥可抑制免疫細(xì)胞中促炎性因子及顆粒蛋白的表達(dá)
    5.6 小結(jié)
第六章 MiR-223調(diào)控中性粒細(xì)胞顆粒蛋白表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子鑒定
    6.1 引言
    6.2 技術(shù)路線
    6.3 MiR-223調(diào)控中性粒細(xì)胞顆粒蛋白的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄組結(jié)果
    6.4 MiR-223調(diào)控中性粒細(xì)胞顆粒蛋白的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果的驗(yàn)證
    6.5 雙熒光素酶報(bào)告基因方法檢測miR-223與轉(zhuǎn)錄因子的相互作用
        6.5.1 實(shí)驗(yàn)方案
        6.5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.6 MiR-223通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子影響中性粒細(xì)胞顆粒蛋白的表達(dá)
    6.7 小結(jié)
第七章 髓系細(xì)胞來源的miR-223在NASH相關(guān)肝纖維化中發(fā)揮重要功能
    7.1 引言
    7.2 骨髓嵌合型小鼠的獲得及NASH相關(guān)肝纖維化模型誘導(dǎo)
    7.3 野生型小鼠骨髓細(xì)胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導(dǎo)的NASH肝臟炎癥及其相關(guān)肝纖維化
        7.3.1 野生型小鼠骨髓細(xì)胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導(dǎo)的NASH組織病理學(xué)特征
        7.3.2 野生型小鼠骨髓細(xì)胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導(dǎo)的肝纖維化
        7.3.3 野生型小鼠骨髓細(xì)胞嵌合改變miR-223 敲除小鼠經(jīng)CDAHFD飲食誘導(dǎo)的肝損傷
    7.4 野生型小鼠骨髓細(xì)胞嵌合不影響miR-223 敲除小鼠CDAHFD飲食誘導(dǎo)的肥胖代謝表型
    7.5 小結(jié)
第八章 結(jié)論與展望
    8.1 結(jié)論
    8.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 縮略詞
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號：3945715