發(fā)布時間：2024-03-24 14:49

　　非酒精性脂肪肝疾病的發(fā)展過程中,氧化應激在非酒精性脂肪肝脂質(zhì)過氧化作用中起到關鍵的作用。研究表明,當去除病因(高脂高糖飲食)后,肝臟的脂質(zhì)積累可自發(fā)逆轉(zhuǎn)。芳香受體(Aryl hydrocarbon receptor;AHR)是一種配體激活的轉(zhuǎn)導因子,多環(huán)芳香烴化物苯并芘(Benzo[a]pyrene;BaP)是一種廣泛認知的AHR激動劑,當激動劑與芳香受體結(jié)合后,AHR轉(zhuǎn)移到細胞核的位置與ARNT構(gòu)成二聚體,繼而形成的二聚體與細胞色素P4501A1酶(Cytochrome P450 1A1;CYP1A1)蛋白合成的啟動基因連接,激發(fā)CYP1A1蛋白的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程。CYP1A1是一種重要的調(diào)節(jié)活性氧生成的酶。研究顯示,CYP1A1在非酒精性脂肪肝中的蛋白表達是升高的,但是其在非酒精性脂肪肝中的起到什么樣的作用還不清楚。綜合以上的文獻,本課題意在說明CYP1A1在非酒精性脂肪肝起到催化脂質(zhì)過氧化的作用,沉默CYP1A1在非酒精性脂肪肝中的高表達,能夠減弱非酒精性脂肪肝中的脂質(zhì)過氧化作用。為了深化對CYP1A1在非酒精性脂肪肝中作用的探討,本課題首先檢測了CYP1A1在非酒精性脂肪肝進展期...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
1.實驗材料與儀器
    1.1 材料與試劑
        1.1.1 實驗動物和細胞
        1.1.2 主要試劑
    1.2 儀器
    1.3 主要試劑和溶液的配制
2.實驗方法
    2.1 小鼠動物模型的建立
    2.2 小鼠肝組織病理學檢測
        2.2.1 HE染色
        2.2.2 肝指數(shù)的測定
        2.2.3 血清ALT和AST測定
    2.3 HepG2細胞培養(yǎng)和傳代
    2.4 細胞水平逆轉(zhuǎn)實驗
    2.5 MTT實驗
    2.6 油酸誘導的脂肪變性
    2.7 細胞的油紅染色
    2.8 甘油三脂的測量
    2.9 CYP1A1-siRNA轉(zhuǎn)染油酸誘導的HepG2細胞
    2.10 BaP刺激作用
    2.11 細胞超氧化物歧化酶(SOD)的測定
    2.12 細胞活性氧(ROS)的測定
    2.13 肝臟/細胞丙二醛(MDA)的測定
    2.14 細胞4-羥基壬烯酸(HNE)的測定
    2.15 Real-timePCR實驗
        2.15.1 細胞總RNA的提取
        2.15.2 反轉(zhuǎn)錄
        2.15.3 RealtimePCR測定CYP1A1和CYP1A2mRNA的表達變化
    2.16 細胞/組織總蛋白的提取
    2.17 BCA蛋白定量
    2.18 蛋白免疫印跡實驗
    2.19 統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析處理
3.實驗結(jié)果
    3.1 CYP1A1在非酒精性脂肪肝肝組織中及逆轉(zhuǎn)肝組織中的表達變化
        3.1.1 小鼠肝臟外觀
        3.1.2 小鼠肝組織HE染色
        3.1.3 小鼠肝臟指數(shù)
        3.1.4 小鼠血清ALT及AST的含量變化
        3.1.5 小鼠非酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝逆轉(zhuǎn)組肝組織中CYP1A1蛋白的表達變化
        3.1.6 丙二醛(MDA)在小鼠脂質(zhì)積累模型組和脂質(zhì)積累逆轉(zhuǎn)組中的含量變化
    3.2 細胞水平體外造脂質(zhì)積累模型以及CYP1A1在脂質(zhì)積累模型中的表達情況
        3.2.1 MTT法檢測不同濃度的油酸造模液對HepG2細胞増殖的影響
        3.2.2 油酸誘導的HepG2細胞造體外脂質(zhì)積累模型的油紅O染色結(jié)果和甘油三酯含量
        3.2.3 不同時間點CYP1A1蛋白在油酸刺激的HepG2細胞的表達變化
        3.2.4 不同時間點CYP1A1mRNA在油酸刺激的HepG2細胞中表達變化
    3.3 體外細胞逆轉(zhuǎn)實驗
        3.3.1 CYP1A1在逆轉(zhuǎn)的HepG2細胞中的表達變化
        3.3.2 脂質(zhì)積累模型組和脂質(zhì)積累逆轉(zhuǎn)組中脂質(zhì)過氧化水平的變化
    3.4 CYP1A1-siRNA對油酸刺激的HepG2細胞中CYP1A1和CYP1A2表達的影響
        3.4.1 CYP1A1-siRNA對油酸刺激HepG2細胞中CYP1A1和CYP1A2蛋白表達的影響
        3.4.2 CYP1A1-siRNA對油酸刺激的HepG2細胞中CYP1A1和CYP1A2mRNA表達的影響
    3.5 沉默CYP1A1的表達降低脂質(zhì)積累模型中的氧化應激和脂質(zhì)過氧化作用
        3.5.1 CYP1A1-siRNA對油酸誘導的HepG2細胞中ROS和SOD水平的影響
        3.5.2 CYP1A1-siRNA對HepG2細胞中MDA和HNE水平的影響
    3.6 苯并芘(BaP)通過刺激CYP1A1的高表達加重油酸刺激的HepG2細胞中的脂質(zhì)過氧化作用
        3.6.1 在苯并芘(BaP)處理HepG2細胞中CYP1A1的mRNA和蛋白的表達變化
        3.6.2 苯并芘(BaP)對HepG2細胞中MDA和SOD的影響
4.討論
5.結(jié)論
參考文獻
個人簡歷
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3937613