利用干細(xì)胞強(qiáng)大的增殖能力和分化能力來修復(fù)受損組織、重建組織結(jié)構(gòu)、恢復(fù)臟器功能一直是干細(xì)胞研究關(guān)注點(diǎn)之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)羊膜來源的細(xì)胞具有干細(xì)胞的特性,包括羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞兩類細(xì)胞,都表達(dá)一定量的與胚胎干細(xì)胞類似的多能性標(biāo)志,在體外經(jīng)誘導(dǎo)后具有多向分化能力,這使羊膜來源的細(xì)胞成為最有應(yīng)用潛能的干細(xì)胞之一。此外,羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞有其自身獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),如較低的免疫原性和抗炎作用;屬于產(chǎn)后廢棄物,在獲取上避免了胚胎干細(xì)胞研究的倫理學(xué)爭(zhēng)執(zhí);來源豐富;在細(xì)胞的制備方面相對(duì)安全、簡(jiǎn)單。鑒于此,羊膜來源細(xì)胞的研究越來越受到重視,成為再生醫(yī)學(xué)和組織工程研究中有價(jià)值的種子細(xì)胞。在本課題中,我們重點(diǎn)研究這兩類細(xì)胞的多向分化能力,并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討其在治療肝纖維化方面的可行性。 目的: 研究羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞的多向分化能力,并探討這兩種細(xì)胞用于治療肝纖維化疾病的可行性。 方法: 收集剖宮產(chǎn)足月胎盤的羊膜組織,通過多次胰酶消化法獲取羊膜上皮細(xì)胞,再經(jīng)膠原酶消化獲取羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞,應(yīng)用特定的誘導(dǎo)條件向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肝細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化,通過形態(tài)學(xué)觀察,特殊染...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1不同培養(yǎng)條件下hAECs的相差顯微鏡觀察圖片

表13種不同的培養(yǎng)條件下hAECs的貼壁和增殖情況比較Ⅰ組Ⅱ組Ⅲ組原代細(xì)胞48h貼壁率20%40%70%首次傳代時(shí)間（天）753平均傳代時(shí)間（天）5.5±0.54±0.52.5±0.51.2不同培養(yǎng)條件下羊膜上皮細(xì)胞形態(tài)比較：各組培養(yǎng)條件下的原....

圖1-2hMSC的相差顯微鏡觀察圖片

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文1.3羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞：體外培養(yǎng)的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞存在大、小兩種形態(tài)（圖1-2），經(jīng)過流式細(xì)胞檢測(cè)兩種形態(tài)的細(xì)胞都表達(dá)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一致的表面標(biāo)記。體外培養(yǎng)增殖后像骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一樣形成漩渦樣生長(zhǎng)，在傳代后保持各自的形態(tài)。

圖1-3羊膜上皮細(xì)胞及羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫組化和免疫熒光結(jié)果(A)圖為羊膜組織pan-CK免疫組化染色，(B)圖為高羊膜上皮細(xì)胞爬片pan-CK免疫熒光染色，

-28-上皮細(xì)胞中的共表達(dá)（圖1-3E）。圖1-3羊膜上皮細(xì)胞及羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫組化和免疫熒光結(jié)果(A)圖為羊膜組織pan-CK免疫組化染色，(B)圖為高羊膜上皮細(xì)胞爬片pan-CK免疫熒光染色，(C)圖為羊膜組織SSEA-4免疫熒光染色，(D)圖為第一代....

圖1-4A流式檢測(cè)原代培養(yǎng)AEC不表達(dá)CD34、CD45，間充質(zhì)標(biāo)志表達(dá)CD73、CD105表達(dá)分別為99.27%、60.93%，組織相容性抗原HLA-ABC98.03%，不表達(dá)HLA-DR，CD326(EpCAM)陽性率為93.02%，干細(xì)胞多能性標(biāo)記SSEA-4

-29-圖1-4A流式檢測(cè)原代培養(yǎng)AEC不表達(dá)CD34、CD45，間充質(zhì)標(biāo)志表達(dá)CD73、CD105表達(dá)分別為99.27%、60.93%，組織相容性抗原HLA-ABC98.03%，不表達(dá)HLA-DR，CD326(EpCAM)陽性率為93.02%....

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