發(fā)布時(shí)間：2024-03-01 20:22

　　目的探討體外實(shí)驗(yàn)中miR-21對(duì)C57BL/6J小鼠原代肝細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(H/R)損傷的影響及其可能的分子機(jī)制。方法建立體外原代培養(yǎng)肝細(xì)胞H/R模型,采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-21的表達(dá);Western blot法檢測(cè)肝細(xì)胞中第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡。結(jié)果原代培養(yǎng)肝細(xì)胞在H/R處理后miR-21表達(dá)下調(diào);而外源性miR-21模擬物處理的肝細(xì)胞經(jīng)H/R后PTEN表達(dá)降低、p-AKT表達(dá)升高、Bcl-2表達(dá)水平及Bcl-2/Bax比值升高,肝細(xì)胞凋亡減少,而抑制AKT磷酸化可導(dǎo)致肝細(xì)胞Bcl-2表達(dá)水平及Bcl-2/Bax比值降低,肝細(xì)胞凋亡增加。結(jié)論 miR-21可通過(guò)抑制PTEN/PI3K/AKT信號(hào)通路減輕H/R導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡,減輕H/R過(guò)程中肝細(xì)胞的損傷。

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠原代肝細(xì)胞提取
        1.2.2 細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝細(xì)胞mi R-21水平
        1.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡
        1.2.5 Western blot法檢測(cè)肝細(xì)胞PTEN、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白水平
        1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染agomi R-21后其表達(dá)水平明顯升高
    2.2 過(guò)表達(dá)mi R-21減輕H/R介導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡
    2.3 過(guò)表達(dá)mi R-21抑制PTEN表達(dá),促進(jìn)PI3K/AKT磷酸化
    2.4 過(guò)表達(dá)mi R-21調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)
    2.5 抑制PI3K表達(dá)可降低mi R-21的抗細(xì)胞凋亡作用
    2.6 抑制PI3K可降低AKT磷酸化水平
    2.7 抑制PI3K后肝細(xì)胞Bcl-2表達(dá)減少,Bcl-2/Bax比值降低
3 討論



本文編號(hào)：3915784