發(fā)布時間：2024-03-01 20:22

　　目的探討體外實驗中miR-21對C57BL/6J小鼠原代肝細胞缺氧/復氧(H/R)損傷的影響及其可能的分子機制。方法建立體外原代培養(yǎng)肝細胞H/R模型,采用實時定量PCR檢測miR-21的表達;Western blot法檢測肝細胞中第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、Bcl-2、Bax的蛋白表達水平;流式細胞術(shù)檢測肝細胞凋亡。結(jié)果原代培養(yǎng)肝細胞在H/R處理后miR-21表達下調(diào);而外源性miR-21模擬物處理的肝細胞經(jīng)H/R后PTEN表達降低、p-AKT表達升高、Bcl-2表達水平及Bcl-2/Bax比值升高,肝細胞凋亡減少,而抑制AKT磷酸化可導致肝細胞Bcl-2表達水平及Bcl-2/Bax比值降低,肝細胞凋亡增加。結(jié)論 miR-21可通過抑制PTEN/PI3K/AKT信號通路減輕H/R導致的肝細胞凋亡,減輕H/R過程中肝細胞的損傷。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠原代肝細胞提取
        1.2.2 細胞分組及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實時熒光定量PCR檢測肝細胞mi R-21水平
        1.2.4 流式細胞術(shù)檢測肝細胞凋亡
        1.2.5 Western blot法檢測肝細胞PTEN、AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白水平
        1.2.6 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 細胞轉(zhuǎn)染agomi R-21后其表達水平明顯升高
    2.2 過表達mi R-21減輕H/R介導的肝細胞凋亡
    2.3 過表達mi R-21抑制PTEN表達,促進PI3K/AKT磷酸化
    2.4 過表達mi R-21調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白表達
    2.5 抑制PI3K表達可降低mi R-21的抗細胞凋亡作用
    2.6 抑制PI3K可降低AKT磷酸化水平
    2.7 抑制PI3K后肝細胞Bcl-2表達減少,Bcl-2/Bax比值降低
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