目的：分離培養(yǎng)原代肝枯否細胞(kupffer cell, KC),并探討urotensin II (UII)及其受體(UT)在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激KC前炎細胞因子表達中的作用。方法：采用在體原位灌注、密度梯度離心和早期細胞換液等方法分離純化大鼠KC,并采用墨汁吞噬和ED2染色試驗對分離培養(yǎng)的細胞進行鑒定。采用LPS刺激肝KC。按照處理方式將細胞分為四組：A組：正常對照；B組：urantide;C組：LPS：D組：urantide+LPS。細胞UII及UT mRNA表達采用real-time PCR檢測,培養(yǎng)上清液UII多肽的表達采用酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)檢測；細胞TNF-a和IL-1p表達與分泌分別采用RT-PCR和ELISA檢測。結(jié)果：成功分離和純化大鼠肝KC,并經(jīng)墨汁吞噬和ED2染色試驗鑒定證實；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理,原代肝KC的UII mRNA相對表達水平,C組顯著高于A、B及D組[(14.785±1.441)比1、(0.926±0.263)、(4.069±0.575),均P<0.01],D組高于A組及B組(均Jp<0.01),而A...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１枯否細胞顯微鏡下表現(xiàn)??Ａ：分離后４ｈ的枯否細胞（Ｘ２００）：?Ｂ：分離后４ｈ的枯否細胞（Ｘ１００）

原代分離培養(yǎng)的ＫＣ形態(tài)可隨培養(yǎng)時間延長，出現(xiàn)明顯變化。這一點與原代??肝實質(zhì)細胞有明顯不同。初分離的ＫＣ鏡下呈折光性很強的圓球形，培養(yǎng)３０?ｍｉｎ??后即逐漸貼壁，呈扁圓形（圖３．１）。培養(yǎng)４ｈ的ＫＣ已牢固貼壁，并呈不規(guī)則形??狀，部分已伸出偽足。隨著培養(yǎng)時間的延長，細胞伸出的偽....

圖３．２枯否細胞呑隨墨汁后的表現(xiàn)??Ａ；枯否細胞吞喧墨汁４ｈ后的表現(xiàn)（Ｘ２００）；?Ｂ：枯否細胞吞隨墨汁化后的表現(xiàn)（Ｘ２００）

圖中箭頭所示可見枯否細胞吞晚了大量的墨汁。??３３?ＥＤ２染色結(jié)果??圖３．３為ＫＣ免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果。圖中可見許多細胞被染成了黃褐色。??由于大部分ＫＣ表達ＣＤ１６３，經(jīng)ＥＤ２染色后，細胞可被染成黃褐色。通過該項??染色方法，可十分準(zhǔn)確地將ＫＣ鑒定出來。該結(jié)果提示我們已成功分....

圖３．３?ＫＣ免疫細胞化學(xué)染色表現(xiàn)（ＥＤ２染色）??Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：陰性對照（Ｘ４００）

Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：陰性對照（Ｘ４００）。??３．４原代枯否細胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的表達情況??各組大鼠肝枯否細胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的相對表達量見圖３．４。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處??理，原代肝ＫＣ的ＵＩＩ?ｍＲＮＡ相對表達水平Ｃ組顯著高于Ａ、Ｂ及Ｄ組??［（１４．７....

圖３．４原代枯否細胞ＵＩ！和ＵＴ?ｍＲＮＡ表達情況（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣ民）??＊＊糾

＜０．０１?ｖｓ?Ｃ?組??３．５細胞培養(yǎng)上清液ＵＩＩ多化的水平??大鼠ＫＣ細胞培養(yǎng)上清液中ＵＩＩ蛋白分泌水平如圖３．５。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，原??代細胞培養(yǎng)上清液ＵＩＩ多膚分泌水平，Ｃ組顯著高于Ａ、Ｂ及Ｄ組??［（３５４．４８５±１０．６５８）?ｐｇ／ｍＬ?比（２０２．２４±５．４２....

本文編號：3913863