目的：分離培養(yǎng)原代肝枯否細(xì)胞(kupffer cell, KC),并探討urotensin II (UII)及其受體(UT)在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激KC前炎細(xì)胞因子表達(dá)中的作用。方法：采用在體原位灌注、密度梯度離心和早期細(xì)胞換液等方法分離純化大鼠KC,并采用墨汁吞噬和ED2染色試驗(yàn)對(duì)分離培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。采用LPS刺激肝KC。按照處理方式將細(xì)胞分為四組：A組：正常對(duì)照；B組：urantide;C組：LPS：D組：urantide+LPS。細(xì)胞UII及UT mRNA表達(dá)采用real-time PCR檢測(cè),培養(yǎng)上清液UII多肽的表達(dá)采用酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)檢測(cè)；細(xì)胞TNF-a和IL-1p表達(dá)與分泌分別采用RT-PCR和ELISA檢測(cè)。結(jié)果：成功分離和純化大鼠肝KC,并經(jīng)墨汁吞噬和ED2染色試驗(yàn)鑒定證實(shí)；經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,原代肝KC的UII mRNA相對(duì)表達(dá)水平,C組顯著高于A、B及D組[(14.785±1.441)比1、(0.926±0.263)、(4.069±0.575),均P<0.01],D組高于A組及B組(均Jp<0.01),而A...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１枯否細(xì)胞顯微鏡下表現(xiàn)??Ａ：分離后４ｈ的枯否細(xì)胞（Ｘ２００）：?Ｂ：分離后４ｈ的枯否細(xì)胞（Ｘ１００）

原代分離培養(yǎng)的ＫＣ形態(tài)可隨培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，出現(xiàn)明顯變化。這一點(diǎn)與原代??肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞有明顯不同。初分離的ＫＣ鏡下呈折光性很強(qiáng)的圓球形，培養(yǎng)３０?ｍｉｎ??后即逐漸貼壁，呈扁圓形（圖３．１）。培養(yǎng)４ｈ的ＫＣ已牢固貼壁，并呈不規(guī)則形??狀，部分已伸出偽足。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞伸出的偽....

圖３．２枯否細(xì)胞呑隨墨汁后的表現(xiàn)??Ａ；枯否細(xì)胞吞喧墨汁４ｈ后的表現(xiàn)（Ｘ２００）；?Ｂ：枯否細(xì)胞吞隨墨汁化后的表現(xiàn)（Ｘ２００）

圖中箭頭所示可見(jiàn)枯否細(xì)胞吞晚了大量的墨汁。??３３?ＥＤ２染色結(jié)果??圖３．３為ＫＣ免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果。圖中可見(jiàn)許多細(xì)胞被染成了黃褐色。??由于大部分ＫＣ表達(dá)ＣＤ１６３，經(jīng)ＥＤ２染色后，細(xì)胞可被染成黃褐色。通過(guò)該項(xiàng)??染色方法，可十分準(zhǔn)確地將ＫＣ鑒定出來(lái)。該結(jié)果提示我們已成功分....

圖３．３?ＫＣ免疫細(xì)胞化學(xué)染色表現(xiàn)（ＥＤ２染色）??Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：陰性對(duì)照（Ｘ４００）

Ａ；?ＥＤ２?染色（Ｘ４００）；?Ｂ：陰性對(duì)照（Ｘ４００）。??３．４原代枯否細(xì)胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的表達(dá)情況??各組大鼠肝枯否細(xì)胞ＵＩＩ和ＵＴ?ｍＲＮＡ的相對(duì)表達(dá)量見(jiàn)圖３．４。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處??理，原代肝ＫＣ的ＵＩＩ?ｍＲＮＡ相對(duì)表達(dá)水平Ｃ組顯著高于Ａ、Ｂ及Ｄ組??［（１４．７....

圖３．４原代枯否細(xì)胞ＵＩ！和ＵＴ?ｍＲＮＡ表達(dá)情況（ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣ民）??＊＊糾

＜０．０１?ｖｓ?Ｃ?組??３．５細(xì)胞培養(yǎng)上清液ＵＩＩ多化的水平??大鼠ＫＣ細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ＵＩＩ蛋白分泌水平如圖３．５。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，原??代細(xì)胞培養(yǎng)上清液ＵＩＩ多膚分泌水平，Ｃ組顯著高于Ａ、Ｂ及Ｄ組??［（３５４．４８５±１０．６５８）?ｐｇ／ｍＬ?比（２０２．２４±５．４２....

本文編號(hào)：3913863