肝臟是機體重要的代謝器官,肝損傷所致的肝臟功能失調(diào),不僅危害患者健康,甚至可以危及患者生命安全。因此,積極探索肝損傷發(fā)病機制和尋找治療策略,具有重要的臨床意義。T GF-β1(transforming growth factorβ1)屬于TGF-β家族成員,具有抑制肝細胞增殖及促進細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)生成等作用,被認為是誘導(dǎo)慢性肝損傷和肝纖維化的關(guān)鍵分子。果蠅Mad基因3哺乳動物類似基因(Mammalian homologs of the Drosophila Madgene3,Smad3)是介導(dǎo)TGF-β信號傳導(dǎo)的重要分子,在慢性肝臟疾病及肝纖維化發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。四氯化碳(c arbon tetrachloride,CCl₄)誘導(dǎo)的肝損傷是典型的化學(xué)性肝損傷,相關(guān)文獻以及實驗室前期研究均表明T GF-β1/Smad3信號通路參與了CCl₄誘導(dǎo)的慢性肝損傷的發(fā)生發(fā)展過程。但T GF-β1及其受體后信號分子Smad3在CCl₄所致小鼠急性肝損傷時的表達及其作用機制仍不...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第1章 文獻綜述
    1.1 TGF-β1 的研究進展
        1.1.1 TGF-β 超家族的組成及其生物學(xué)作用
        1.1.2 TGF-β1 參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程
    1.2 TGF-β1 的信號傳導(dǎo)
    1.3 TGF-β/Smad信號與多種臟器疾病相關(guān)
    1.4 TGF-β/Smad信號與肝臟疾病密切相關(guān)
    1.5 肝臟損傷的研究進展
        1.5.1 肝臟損傷的原因
        1.5.2 TGF-β1/Smad3與CCl₄所致肝臟損傷的關(guān)系
    1.6 本研究主要內(nèi)容與特色
        1.6.1 研究設(shè)想
        1.6.2 研究內(nèi)容
        1.6.3 特色和創(chuàng)新
第2章 材料與方法
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗試劑
    2.3 實驗主要試劑的配制
        2.3.1 4%多聚甲醛的配制
        2.3.2 PBS緩沖液的配制
        2.3.3 Western blotting相關(guān)試劑的配置
    2.4 實驗常用儀器
    2.5 實驗方法
        2.5.1 動物模型的建立
        2.5.2 血清轉(zhuǎn)氨酶ALT及AST測定
        2.5.3 H&E染色
        2.5.4 免疫組織化學(xué)染色
        2.5.5 TUNEL染色
        2.5.6 RT-PCR
        2.5.7 流式細胞術(shù)
        2.5.8 ELISA
        2.5.9 Western blotting
        2.5.10 統(tǒng)計學(xué)處理
第3章 實驗結(jié)果
    3.1 TGF-β1 及Smad3在CCl₄模型鼠肝損傷中的表達
        3.1.1 CCl₄肝損傷模型鼠的鑒定
        3.1.2 CCl₄模型鼠TGF-β1 水平變化
        3.1.3 CCl₄模型鼠肝組織中TβRII、Smads m RNA及Smad3蛋白表達變化
    3.2 Smad3過表達對CCl₄模型鼠肝損傷的影響
        3.2.1 Smad3過表達小鼠肝組織Smad3表達水平
        3.2.2 Smad3過表達對CCl₄模型鼠血清ALT及AST水平的影響
        3.2.3 Smad3過表達對CCl₄模型鼠肝組織病理學(xué)變化的影響
        3.2.4 Smad3過表達對CCl₄模型鼠肝組織炎性細胞數(shù)量的影響
        3.2.5 Smad3過表達對CCl₄模型鼠炎性細胞因子水平的影響
        3.2.6 Smad3過表達對CCl₄模型鼠肝細胞凋亡的影響
    3.3 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠肝損傷的影響
        3.3.1 Smad3 sh RNA小鼠肝臟Smad3表達水平
        3.3.2 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠血清ALT及AST水平的影響
        3.3.3 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠肝組織病理學(xué)變化的影響
        3.3.4 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠肝組織炎性細胞數(shù)量的影響
        3.3.5 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠炎性細胞因子水平的影響
        3.3.6 Smad3 sh RNA對CCl₄模型鼠肝細胞凋亡的影響
第4章 討論
    4.1 CCl₄誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷過程中TGF-β1 的表達變化
    4.2 Smad3在CCl₄肝損傷模型鼠中的表達
    4.3 Smad3過表達對CCl₄模型鼠肝損傷的影響
    4.4 Smad3基因敲低對CCl₄模型鼠肝臟的保護作用
第5章 結(jié)論
參考文獻
個人簡介以及取得的成就
致謝



本文編號：3904970