背景與目的 乙型肝炎由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染所致,是危害人類健康的全球性疾病。由于該病流行面廣,危害性大,因此其傳播途徑,發(fā)病機(jī)制及治療手段的研究一直是各國政府和科學(xué)家們高度重視的課題。已有研究證實(shí),HBV基因能夠整合到精子的染色體上,由精子導(dǎo)入受精卵的HBV基因能夠在早期胚胎細(xì)胞中復(fù)制與表達(dá)。然而,HBV具有嗜肝性,著床前的胚胎細(xì)胞是未分化的全能細(xì)胞,它既非肝臟細(xì)胞,也非已分化的非肝臟細(xì)胞,HBV基因?yàn)楹文茉谄渲袕?fù)制和表達(dá)?是否有宿主基因參與了上述生物學(xué)事件?這些問題的闡明,不僅在病毒傳播的分子機(jī)制研究中具有重要的理論意義,還在阻斷HBV基因傳播、提高生育素質(zhì)和防止肝癌發(fā)生方面具有廣闊的應(yīng)用前景。 材料與方法 材料:(1)人精子;(2)金黃地鼠去透明帶卵母細(xì)胞;(3)項(xiàng)目組前期工作獲得的、經(jīng)大腸桿菌(E. coli DH5α)轉(zhuǎn)染擴(kuò)增的陽性重組質(zhì)粒pGEM-T-X;(4)實(shí)驗(yàn)用試劑與培養(yǎng)基。 方法:(1) PCR技術(shù);(2)消減文庫cDNA探針制備技術(shù);(3)基因芯片技術(shù);(4)測序技術(shù);(5)生物信息學(xué)技術(shù);(6)人精子與金黃地鼠去透明帶卵母...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
主要縮略語中英文對照表
前言
技術(shù)路線
材料與方法
    1 材料
        1.1 質(zhì)粒
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及標(biāo)本
            1.2.1 金黃地鼠
            1.2.2 精液標(biāo)本
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 其它材料
        1.6 主要溶液及培養(yǎng)基（配制見附錄）
    2 方法
        2.1 菌液PCR鑒定消減文庫
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)樣本
            2.1.2 引物的設(shè)計(jì)和合成
            2.1.3 步驟
        2.2 芯片的制備
            2.2.1 陽性重組質(zhì)粒的提取
            2.2.2 PCR擴(kuò)增重組質(zhì)粒中插入的cDNA片段
            2.2.3 PCR產(chǎn)物的純化
            2.2.4 點(diǎn)制芯片
        2.3 探針的制備
        2.4 芯片的雜交與洗片
        2.5 差異表達(dá)基因的鑒定
            2.5.1 圖像的掃描與分析
            2.5.2 確定陽性克隆
            2.5.3 測序
        2.6 靶標(biāo)基因的認(rèn)定及其功能分析
        2.7 宿主細(xì)胞中靶標(biāo)基因存在及表達(dá)的驗(yàn)證
            2.7.1 RT-PCR引物的設(shè)計(jì)及合成
            2.7.2 樣本收集和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理
            2.7.3 RT-PCR檢測
結(jié)果
    1. 菌液PCR鑒定結(jié)果
    2. 芯片的準(zhǔn)備
    3. 探針檢測結(jié)果
    4. 芯片檢測結(jié)果
        4.1 芯片掃描結(jié)果
        4.2 Cy3 和Cy5 相關(guān)性分析
        4.3 陽性克隆的篩選
    5. 測序結(jié)果
    6. 靶基因的認(rèn)定及其功能分析
    7. 宿主細(xì)胞中靶標(biāo)基因存在及表達(dá)的驗(yàn)證
        7.1 RT-PCR引物的設(shè)計(jì)及合成
        7.2 宿主靶標(biāo)基因在胚胎細(xì)胞中存在與表達(dá)的證實(shí)
討論
全文小結(jié)
特色與創(chuàng)新
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3854060