本文關鍵詞：IFN-λ與丙型肝炎患者應用IFN-α抗病毒治療療效的相關性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染可引起肝臟急慢性炎癥，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球約有1.8億人感染HCV，其中約有4250萬感染者在中國。約有20%-30%的HCV感染者在急性期可以自發(fā)清除病毒，而大部分HCV感染者轉(zhuǎn)化為慢性丙型肝炎（Chronic Hepatitis C, CHC），其中30%CHC患者可進展為肝硬化，而且CHC患者發(fā)生肝細胞癌的機會為正常人的20-30倍。因此CHC已成為值得關注的全球性公眾健康問題，迫切需要有效的抗病毒治療方案。干擾素(interferon，IFN)是機體細胞在受到某些病毒感染后所分泌的一類特異性細胞因子，具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及抗細胞增殖等多種生物學活性，根據(jù)IFN的氨基酸序列和生物學活性可分為三類：I、Ⅱ、Ⅲ型。I型INF包括IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ、IFN-δ和IFN-ζ等，其中IFN-α為臨床上應用比較廣泛的抗病毒藥物之一；Ⅱ型INF僅有1種為IFN-γ；Ⅲ型INF即IFN-λ，包括IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）。目前標準的抗HCV治療方案為聚乙二醇化干擾素-α（pegylated interferon α, PEG-IFN-α）聯(lián)合利巴韋林（ribavirin, RBV），治療4周時HCV-RNA轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）為快速病毒學應答（rapidvirologic response, RVR），若治療治療4周時HCV-RNA仍為陽性至治療12周時HCV-RNA轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）為早期病毒學應答（eralyvirologic response, EVR）。已有研究證實RVR和EVR能很好的預測持續(xù)病毒學應答(sustained virological response，SVR)即治療結束24周HCV-RNA小于1000IU/ml，其中獲得RVR的患者約88%-100%可獲得SVR，一旦達到SVR,99%以上可以維持病毒學應答5年甚至更久。但并不是所有丙型肝炎患者都可以獲得滿意的抗病毒療效，影響抗病毒療效的因素有病毒因素（如HCV基因型、基線病毒載量等）、藥物因素（如IFN-α種類、IFN-α和RBV有明顯的血液學和神經(jīng)系統(tǒng)抑制等不良反應、IFN-α藥代動力學特點等）、宿主因素［如對IFN-α耐受性不佳、免疫應答狀態(tài)、IL-28B單核苷酸基因多態(tài)性(single nucleotide polyorphism, SNP)等］。 近幾年一系列全基因組關聯(lián)分析研究報道了丙型肝炎患者的IL-28BSNP不同位點的基因型（rs12979860、rs8099917、rs12980275）與抗病毒治療應答密切相關，攜帶保護性基因型的丙型肝炎患者自發(fā)清除病毒、獲得SVR的機率比攜帶非保護基因型的患者高，同時發(fā)現(xiàn)攜帶保護性基因型的丙型肝炎患者血清中的IL-29、IL-28A、IL-28B水平和外周血單核細胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中的IL-29mRNA、IL-28AmRNA、IL-28B mRNA水平均高于攜帶非保護性基因型的患者，丙型肝炎患者血清中IL-29水平低于正常人、而IL-28A水平高于正常人，丙型肝炎患者肝組織中IL-28A mRNA和IL-29mRNA的表達高于正常人。已有研究證實，IFN-λ與IFN-α的結合受體及分布不同，但它們可以通過相同的信號傳導通路，傳導活化信號、誘導一系列干擾素激活基因的表達，IFN-λ與IFN-α可協(xié)同發(fā)揮抗病毒作用。上述研究表明，丙型肝炎患者IL-28B SNP與抗病毒治療療效密切相關，丙型肝炎患者體內(nèi)IFN-λ水平與抗病毒治療療效可能有相關性。 已有研究證實，RVR和EVR可以很好的預測SVR，其中RVR能更好的預測SVR，本研究根據(jù)患者應用IFN-α治療4周時HCV-RNA是否轉(zhuǎn)陰分為快速病毒學應答（RVR）組和非快速病毒學應答（N-RVR）組，旨在探討丙型肝炎患者體內(nèi)IL-28B rs12979860基因型、IFN-λ水平與其應用IFN-α抗病毒治療獲得RVR是否有相關性及其臨床意義。 方法：選取丙型病毒性肝炎患者45例，根據(jù)患者應用IFN-α治療4周時HCV-RNA是否轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）分為快速病毒學應答(RVR)組21例和非快速病毒學應答組(N-RVR)組24例，另外設健康對照組(Normal)組15例。 1病毒學指標檢測：應用微粒子酶聯(lián)免疫法檢測抗-HCV，采用熒光定量聚合酶鏈反應法檢測HCV-RNA水平。 2收集血清，應用ELISA法檢測血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平。 3收集新鮮外周抗凝血，用密度梯度離心法分離收集PBMCs：Trizol法抽提提取PBMCs中的總RNA，應用RT-PCR法檢測PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相對表達水平；提取PBMC中總蛋白，應用Western blot法檢測外周血PBMC中IL-29、IL-28A和IL28B蛋白表達水平。 4留取丙型肝炎患者外周（含EDTA）抗凝全血，提取DNA，應用TapManMGB蛋白探針法檢測IL-28B rs12979860基因型。 結果： 1血清中IL-29、IL-28A和IL-28B的表達水平 1.1健康對照組血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平分別為(11.78±0.78)、(268.13±9.82)、(267.26±8.26)。 1.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR組分別為(13.32±1.34)、(273.11±8.78)、(293.67±7.38)；N-RVR組分別為(10.58±1.44)、(243.05±9.48)、(254.85±8.67)。 1.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR組分別為(12.90±1.04)、(288.49±13.50)、(308.53±9.48)；N-RVR組分別為(10.14±0.46)、(253.53±4.37)、(247.34±6.39)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計學處理以上結果得出：RVR組血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平在治療前、治療4周時均明顯高于N-RVR組，P 0.01差異有統(tǒng)計學意義（Table1）；而健康對照組處于RVR組和N-RVR組之間，其中IL-28B的水平明顯低于RVR組、高于N-RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計學意義（Table1）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平變化不大。 2將PBMCs中GAPDH的表達量設定為1.00，與GAPDH表達量相比，得出IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相對表達水平2.1健康對照組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達水平分別為(0.76±0.02)、(0.68±0.02)、(0.70±0.02)。 2.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達水平：RVR組分別為(0.80±0.02)、(0.79±0.02)、(0.72±0.02)；N-RVR組分別為(0.71±0.02)、(0.65±0.02)、(0.68±0.01)。 2.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達水平：RVR組分別為(0.80±0.02)、(0.79±0.01)、(0.74±0.02)；N-RVR組分別為(0.70±0.01)、(0.64±0.01)、(0.66±0.01)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計學處理以上結果得出：RVR組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達水平在治療前、治療4周時均明顯高于N-RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計學意義（Table2）；而健康對照組處于RVR組和N-RVR組之間，其中IL-28A的mRNA表達水平低于RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計學意義（Table2）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達水平變化不大。 3將PBMC中內(nèi)參β-actin相對表達量設定為1.00，與β-actin表達量相比較，得出IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達水平： 3.1健康對照組PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達水平分別為(0.67±0.12)、(0.58±0.13)、(0.70±0.11)。 3.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達水平：RVR組分別為(0.73±0.01)、(0.69±0.03)、(0.73±0.03)；N-RVR組分別為(0.52±0.02)、(0.48±0.03)、(0.53±0.03)。 3.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達水平：RVR組分別為(0.73±0.09)、(0.70±0.11)、(0.77±0.09)；N-RVR組分別為(0.55±0.09)、(0.50±0.10)、(0.57±0.09)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計學處理以上結果得出：RVR組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白表達水平在治療前、治療4周時均明顯高于N-RVR組，P 0.05，差異有統(tǒng)計學意義（見Table3）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達水平變化不大。 4IL-28B rs12979860CC型丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平明顯高于CT和TT型患者，P 0.05差異具有統(tǒng)計學意義；CT型患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平介于CC和TT型患者之間，其中血清中IL-28B水平明顯高于TT型患者，PBMC中IL-28A mRNA水平明顯高于TT型患者，P 0.05差異具有統(tǒng)計學意義（見Table4/5/6）。 5Pearson卡方相關分析法分析三種IL-28B rs12979860基因型與RVR率的關系，，結果：IL-28B rs12979860CC基因型攜帶者獲得RVR率明顯高于CT、TT基因型攜帶者（見Table7）。 6將丙型肝炎患者HCV-RNA基線水平、HCV分型、IL-28B rs12979860基因型、PBMC和血清中IL-29、IL-28A、IL-28B水平等多種因素與IFN-α抗病毒應答療效進行l(wèi)ogistic回歸分析（Table8）； 6.1通過向后逐步排除法，進入回歸方程的自變量為X3、X6、X12；卡方檢驗，χ2=32.183， P0.01，回歸方程有統(tǒng)計學意義�；貧w方程：logitP=-2.76+2.94X3+3.30X6+6.58X12。6.2X3、X6、X12的logistic回歸系數(shù)反應對RVR/N-RVR的影響：IL28B CC基因型對獲得RVR的優(yōu)勢比（OR）為5.06；PBMC中IL28B mRNA水平每增加一個等級對獲得RVR的優(yōu)勢比為6.28； PBMC中IL28B蛋白水平每增加一個等級對獲得RVR的優(yōu)勢比為13.87。 結論：1丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平與RVR密切 相關。 2IL-28B rs12979860CC基因型與RVR密切相關。 3IL-28B rs12979860CC基因型、PBMC中在基因和蛋白水平高表達的IL-28B可能是RVR的預測因素。
【關鍵詞】：丙型肝炎病毒 慢性丙型肝炎 干擾素-α 干擾素-λ 快速病毒學應答 持續(xù)病毒學應答
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.63
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-24
• 結果24-27
• 附圖27-31
• 附表31-35
• 討論35-39
• 結論39
• 參考文獻39-42
• 綜述 干擾素-λ與丙型肝炎患者抗病毒治療的相關性42-52
• 參考文獻49-52
• 致謝52-53
• 個人簡歷53

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：384030