本文關(guān)鍵詞：IFN-λ與丙型肝炎患者應(yīng)用IFN-α抗病毒治療療效的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染可引起肝臟急慢性炎癥，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球約有1.8億人感染HCV，其中約有4250萬感染者在中國。約有20%-30%的HCV感染者在急性期可以自發(fā)清除病毒，而大部分HCV感染者轉(zhuǎn)化為慢性丙型肝炎（Chronic Hepatitis C, CHC），其中30%CHC患者可進(jìn)展為肝硬化，而且CHC患者發(fā)生肝細(xì)胞癌的機(jī)會(huì)為正常人的20-30倍。因此CHC已成為值得關(guān)注的全球性公眾健康問題，迫切需要有效的抗病毒治療方案。干擾素(interferon，IFN)是機(jī)體細(xì)胞在受到某些病毒感染后所分泌的一類特異性細(xì)胞因子，具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及抗細(xì)胞增殖等多種生物學(xué)活性，根據(jù)IFN的氨基酸序列和生物學(xué)活性可分為三類：I、Ⅱ、Ⅲ型。I型INF包括IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ、IFN-δ和IFN-ζ等，其中IFN-α為臨床上應(yīng)用比較廣泛的抗病毒藥物之一；Ⅱ型INF僅有1種為IFN-γ；Ⅲ型INF即IFN-λ，包括IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）。目前標(biāo)準(zhǔn)的抗HCV治療方案為聚乙二醇化干擾素-α（pegylated interferon α, PEG-IFN-α）聯(lián)合利巴韋林（ribavirin, RBV），治療4周時(shí)HCV-RNA轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）為快速病毒學(xué)應(yīng)答（rapidvirologic response, RVR），若治療治療4周時(shí)HCV-RNA仍為陽性至治療12周時(shí)HCV-RNA轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）為早期病毒學(xué)應(yīng)答（eralyvirologic response, EVR）。已有研究證實(shí)RVR和EVR能很好的預(yù)測(cè)持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(sustained virological response，SVR)即治療結(jié)束24周HCV-RNA小于1000IU/ml，其中獲得RVR的患者約88%-100%可獲得SVR，一旦達(dá)到SVR,99%以上可以維持病毒學(xué)應(yīng)答5年甚至更久。但并不是所有丙型肝炎患者都可以獲得滿意的抗病毒療效，影響抗病毒療效的因素有病毒因素（如HCV基因型、基線病毒載量等）、藥物因素（如IFN-α種類、IFN-α和RBV有明顯的血液學(xué)和神經(jīng)系統(tǒng)抑制等不良反應(yīng)、IFN-α藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)等）、宿主因素［如對(duì)IFN-α耐受性不佳、免疫應(yīng)答狀態(tài)、IL-28B單核苷酸基因多態(tài)性(single nucleotide polyorphism, SNP)等］。 近幾年一系列全基因組關(guān)聯(lián)分析研究報(bào)道了丙型肝炎患者的IL-28BSNP不同位點(diǎn)的基因型（rs12979860、rs8099917、rs12980275）與抗病毒治療應(yīng)答密切相關(guān)，攜帶保護(hù)性基因型的丙型肝炎患者自發(fā)清除病毒、獲得SVR的機(jī)率比攜帶非保護(hù)基因型的患者高，同時(shí)發(fā)現(xiàn)攜帶保護(hù)性基因型的丙型肝炎患者血清中的IL-29、IL-28A、IL-28B水平和外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中的IL-29mRNA、IL-28AmRNA、IL-28B mRNA水平均高于攜帶非保護(hù)性基因型的患者，丙型肝炎患者血清中IL-29水平低于正常人、而IL-28A水平高于正常人，丙型肝炎患者肝組織中IL-28A mRNA和IL-29mRNA的表達(dá)高于正常人。已有研究證實(shí)，IFN-λ與IFN-α的結(jié)合受體及分布不同，但它們可以通過相同的信號(hào)傳導(dǎo)通路，傳導(dǎo)活化信號(hào)、誘導(dǎo)一系列干擾素激活基因的表達(dá)，IFN-λ與IFN-α可協(xié)同發(fā)揮抗病毒作用。上述研究表明，丙型肝炎患者IL-28B SNP與抗病毒治療療效密切相關(guān)，丙型肝炎患者體內(nèi)IFN-λ水平與抗病毒治療療效可能有相關(guān)性。 已有研究證實(shí)，RVR和EVR可以很好的預(yù)測(cè)SVR，其中RVR能更好的預(yù)測(cè)SVR，本研究根據(jù)患者應(yīng)用IFN-α治療4周時(shí)HCV-RNA是否轉(zhuǎn)陰分為快速病毒學(xué)應(yīng)答（RVR）組和非快速病毒學(xué)應(yīng)答（N-RVR）組，旨在探討丙型肝炎患者體內(nèi)IL-28B rs12979860基因型、IFN-λ水平與其應(yīng)用IFN-α抗病毒治療獲得RVR是否有相關(guān)性及其臨床意義。 方法：選取丙型病毒性肝炎患者45例，根據(jù)患者應(yīng)用IFN-α治療4周時(shí)HCV-RNA是否轉(zhuǎn)陰（HCV-RNA1000IU/ml）分為快速病毒學(xué)應(yīng)答(RVR)組21例和非快速病毒學(xué)應(yīng)答組(N-RVR)組24例，另外設(shè)健康對(duì)照組(Normal)組15例。 1病毒學(xué)指標(biāo)檢測(cè)：應(yīng)用微粒子酶聯(lián)免疫法檢測(cè)抗-HCV，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)HCV-RNA水平。 2收集血清，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平。 3收集新鮮外周抗凝血，用密度梯度離心法分離收集PBMCs：Trizol法抽提提取PBMCs中的總RNA，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相對(duì)表達(dá)水平；提取PBMC中總蛋白，應(yīng)用Western blot法檢測(cè)外周血PBMC中IL-29、IL-28A和IL28B蛋白表達(dá)水平。 4留取丙型肝炎患者外周（含EDTA）抗凝全血，提取DNA，應(yīng)用TapManMGB蛋白探針法檢測(cè)IL-28B rs12979860基因型。 結(jié)果： 1血清中IL-29、IL-28A和IL-28B的表達(dá)水平 1.1健康對(duì)照組血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平分別為(11.78±0.78)、(268.13±9.82)、(267.26±8.26)。 1.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR組分別為(13.32±1.34)、(273.11±8.78)、(293.67±7.38)；N-RVR組分別為(10.58±1.44)、(243.05±9.48)、(254.85±8.67)。 1.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時(shí)血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平：RVR組分別為(12.90±1.04)、(288.49±13.50)、(308.53±9.48)；N-RVR組分別為(10.14±0.46)、(253.53±4.37)、(247.34±6.39)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以上結(jié)果得出：RVR組血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平在治療前、治療4周時(shí)均明顯高于N-RVR組，P 0.01差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Table1）；而健康對(duì)照組處于RVR組和N-RVR組之間，其中IL-28B的水平明顯低于RVR組、高于N-RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Table1）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周血清中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平變化不大。 2將PBMCs中GAPDH的表達(dá)量設(shè)定為1.00，與GAPDH表達(dá)量相比，得出IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA相對(duì)表達(dá)水平2.1健康對(duì)照組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達(dá)水平分別為(0.76±0.02)、(0.68±0.02)、(0.70±0.02)。 2.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達(dá)水平：RVR組分別為(0.80±0.02)、(0.79±0.02)、(0.72±0.02)；N-RVR組分別為(0.71±0.02)、(0.65±0.02)、(0.68±0.01)。 2.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時(shí)PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達(dá)水平：RVR組分別為(0.80±0.02)、(0.79±0.01)、(0.74±0.02)；N-RVR組分別為(0.70±0.01)、(0.64±0.01)、(0.66±0.01)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以上結(jié)果得出：RVR組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達(dá)水平在治療前、治療4周時(shí)均明顯高于N-RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Table2）；而健康對(duì)照組處于RVR組和N-RVR組之間，其中IL-28A的mRNA表達(dá)水平低于RVR組，P 0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Table2）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B的mRNA表達(dá)水平變化不大。 3將PBMC中內(nèi)參β-actin相對(duì)表達(dá)量設(shè)定為1.00，與β-actin表達(dá)量相比較，得出IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達(dá)水平： 3.1健康對(duì)照組PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達(dá)水平分別為(0.67±0.12)、(0.58±0.13)、(0.70±0.11)。 3.2丙型肝炎患者在干擾素-α治療前（0周）PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達(dá)水平：RVR組分別為(0.73±0.01)、(0.69±0.03)、(0.73±0.03)；N-RVR組分別為(0.52±0.02)、(0.48±0.03)、(0.53±0.03)。 3.3丙型肝炎患者在干擾素-α治療4周時(shí)PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達(dá)水平：RVR組分別為(0.73±0.09)、(0.70±0.11)、(0.77±0.09)；N-RVR組分別為(0.55±0.09)、(0.50±0.10)、(0.57±0.09)。采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以上結(jié)果得出：RVR組PBMCs中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白表達(dá)水平在治療前、治療4周時(shí)均明顯高于N-RVR組，P 0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見Table3）；丙型肝炎患者在干擾素-α治療前與治療4周PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B蛋白的表達(dá)水平變化不大。 4IL-28B rs12979860CC型丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平明顯高于CT和TT型患者，P 0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CT型患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B水平介于CC和TT型患者之間，其中血清中IL-28B水平明顯高于TT型患者，PBMC中IL-28A mRNA水平明顯高于TT型患者，P 0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見Table4/5/6）。 5Pearson卡方相關(guān)分析法分析三種IL-28B rs12979860基因型與RVR率的關(guān)系，，結(jié)果：IL-28B rs12979860CC基因型攜帶者獲得RVR率明顯高于CT、TT基因型攜帶者（見Table7）。 6將丙型肝炎患者HCV-RNA基線水平、HCV分型、IL-28B rs12979860基因型、PBMC和血清中IL-29、IL-28A、IL-28B水平等多種因素與IFN-α抗病毒應(yīng)答療效進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析（Table8）； 6.1通過向后逐步排除法，進(jìn)入回歸方程的自變量為X3、X6、X12；卡方檢驗(yàn)，χ2=32.183， P0.01，回歸方程有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�；貧w方程：logitP=-2.76+2.94X3+3.30X6+6.58X12。6.2X3、X6、X12的logistic回歸系數(shù)反應(yīng)對(duì)RVR/N-RVR的影響：IL28B CC基因型對(duì)獲得RVR的優(yōu)勢(shì)比（OR）為5.06；PBMC中IL28B mRNA水平每增加一個(gè)等級(jí)對(duì)獲得RVR的優(yōu)勢(shì)比為6.28； PBMC中IL28B蛋白水平每增加一個(gè)等級(jí)對(duì)獲得RVR的優(yōu)勢(shì)比為13.87。 結(jié)論：1丙型肝炎患者血清和PBMC中IL-29、IL-28A、IL-28B的水平與RVR密切 相關(guān)。 2IL-28B rs12979860CC基因型與RVR密切相關(guān)。 3IL-28B rs12979860CC基因型、PBMC中在基因和蛋白水平高表達(dá)的IL-28B可能是RVR的預(yù)測(cè)因素。
【關(guān)鍵詞】：丙型肝炎病毒 慢性丙型肝炎 干擾素-α 干擾素-λ 快速病毒學(xué)應(yīng)答 持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.63
【目錄】：

• 摘要4-9
• ABSTRACT9-14
• 前言14-17
• 材料與方法17-24
• 結(jié)果24-27
• 附圖27-31
• 附表31-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 干擾素-λ與丙型肝炎患者抗病毒治療的相關(guān)性42-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張野;聶青和;;干擾素λ:慢性丙型肝炎治療新方法[J];傳染病信息;2014年04期

2 陳暉;李_g;蔣敦科;蘇錦明;曾錦榮;阮族明;莫林芳;葉力;;不同類型干擾素對(duì)Toll樣受體在Huh7細(xì)胞中表達(dá)的影響[J];中華疾病控制雜志;2014年06期

3 Shaidi Tang;Ming Yue;Jiajia Wang;Yun Zhang;Rongbin Yu;Jing Su;Zhihang Peng;Jie Wang;;Associations of IFN-γ rs2430561 T/A,IL28B rs12979860 C/T and ERα rs2077647 T/C polymorphisms with outcomes of hepatitis B virus infection:a meta-analysis[J];The Journal of Biomedical Research;2014年06期

4 Nicola Coppola;Mariantonietta Pisaturo;Caterina Sagnelli;Lorenzo Onorato;Evangelista Sagnelli;;Role of genetic polymorphisms in hepatitis C virus chronic infection[J];World Journal of Clinical Cases;2015年09期

5 鄭拓;吳長德;;犬IL-29基因的克隆與原核表達(dá)[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2015年23期

6 肖春媛;黃新芳;吳勵(lì);沈南;;miR-150促進(jìn)TLR3通路活化后IFN-λ的分泌[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2013年04期

7 高萌;云升;;IFN-λs抗腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年02期

8 莫柱冰;項(xiàng)丹丹;;樹突狀細(xì)胞分泌的IFN-λ在丙型肝炎病毒感染中的作用[J];天津藥學(xué);2015年03期

9 Raquel Francine Liermann Garcia;Simone Moreira;Ana Lucia de Araújo Ramos;Leslie Ecker Ferreira;Angelo Alves de Mattos;Cristiane Valle Tovo;Lysandro Alsina Nader;Juliene Antonio Ramos;Edson Rondinelli;Arnaldo de Jesus Dominici;Christian Evangelista Garcia;Mauro de Souza Leite Pinho;Carlos Eduardo Brand嗾o-Mello;Cristiane Alves Villela-Nogueira;Paulo Henrique Condeixa de Fran

本文編號(hào)：384030