目的:非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是與胰島素抵抗(Insulin resistance,IR)密切相關的肝損傷性疾病,已成為目前全球最常見的慢性肝病,也是世界公共健康問題之一。研究表明,改善胰島素抵抗可有效緩解NAFLD。AWRK6是實驗室從東北林蛙皮膚分泌物中鑒定并改造的18個氨基酸的陽離子多肽,具有提高機體的胰島素敏感性,緩解胰島素抵抗,改善小鼠2型糖尿病等多種功能。本研究擬對AWRK6改善NAFLD的作用進行分析,并進一步對其作用機制進行探究,為NAFLD的治療提供新策略。方法:利用油酸(OA)誘導HepG2肝細胞內(nèi)甘油三酯(TG)積累,構(gòu)建具有NAFLD病征的體外細胞模型。使用MTT法檢測細胞存活率,分析細胞內(nèi)TG含量變化,優(yōu)化確定AWRK6最佳作用條件(5×10-8 mol/L,4 h),并以5×10-8mol/L AWRK6干預油酸誘導模型細胞4 h,檢測細胞內(nèi)TG含量,在細胞水平評估AWRK6改善NAFLD的作用。同時利用高脂飼料飼養(yǎng)小鼠12周,構(gòu)建NAFLD小鼠模型,建模成功后將小鼠隨機分為NC組(普通...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 NAFLD治療藥物研究現(xiàn)狀
        1.2.1 非肽類藥物
        1.2.2 肽類藥物
    1.3 NAFLD致病機制
        1.3.1 NAFLD致病機制相關學說
        1.3.2 NAFLD相關信號通路
    1.4 NAFLD臨床前模型構(gòu)建
    1.5 研究目的及意義
第2章 脂質(zhì)積累細胞模型建立及AWRK6作用條件優(yōu)化
    2.1 引言
    2.2 實驗材料和儀器
        2.2.1 實驗細胞
        2.2.2 實驗材料
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 實驗試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 脂質(zhì)積累細胞模型的建立
        2.3.3 AWRK6處理最佳條件的篩選
        2.3.4 AWRK6 對脂質(zhì)積累細胞內(nèi)TG含量的影響
        2.3.5 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 脂質(zhì)積累細胞模型建立
        2.4.2 AWRK6作用濃度及時間的確定
        2.4.3 Exendin-4 作用濃度的確定
        2.4.4 AWRK6 對細胞內(nèi)TG含量影響
    2.5 討論
第3章 AWRK6改善小鼠非酒精性脂肪肝
    3.1 引言
    3.2 實驗材料和儀器
        3.2.1 實驗動物
        3.2.2 實驗材料
        3.2.3 實驗儀器
        3.2.4 實驗試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.3.2 分組及給藥
        3.3.3 空腹血糖測定
        3.3.4 生理生化指標測定
        3.3.5 小鼠肝臟處理、HE染色和油紅O染色
        3.3.6 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 NAFLD小鼠模型建立
        3.4.2 AWRK6 降低NAFLD小鼠體重
        3.4.3 AWRK6影響肝臟形態(tài)、降低肝臟重量和系數(shù)
        3.4.4 AWRK6 改善NAFLD小鼠的胰島素抵抗
        3.4.5 AWRK6 改善NAFLD小鼠血清生化指標
        3.4.6 AWRK6 抑制NAFLD小鼠肝臟病變和脂質(zhì)積累
    3.5 討論
第4章 AWRK6 通過AMPK/ACC信號通路改善NAFLD
    4.1 引言
    4.2 實驗材料和儀器
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗儀器
        4.2.3 實驗試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞處理及給藥
        4.3.2 細胞蛋白提取
        4.3.3 組織蛋白提取
        4.3.4 Western blot
        4.3.5 統(tǒng)計學分析
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 AWRK6對Hep G2 細胞內(nèi)蛋白的影響
        4.4.2 AWRK6對小鼠肝臟中蛋白的影響
    4.5 討論
結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文及參加科研情況



本文編號：3786517