目的:探索二氫楊梅素對實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障的作用及可能的機(jī)制。方法:將50只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為五組:正常對照組,葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium,DSS）組,DSS+20mg/kg DHM（二氫楊梅素）組,DSS+40mg/kg DHM組,柳氮磺吡啶（Salazosulfapyridine,SASP）組。正常對照組自由飲用PBS 7天,其余各組自由飲用由PBS配制的2.5%DSS溶液7天,之后正常對照組及DSS組給予PBS灌胃7天,余各組分別給予不同濃度DHM或SASP灌胃治療7天,共14天。期間每天記錄各組小鼠大便性狀、體重、便血等情況計(jì)算DAI,第15天水合氯醛麻醉后采集門靜脈血,頸椎脫臼法處死小鼠,收集各組小鼠結(jié)腸組織。運(yùn)用HE（Hematoxylin and eosin）染色法檢測小鼠腸道組織損傷情況;通過免疫組化的方法檢測緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-2、Occludin的表達(dá)水平;采用TUNEL檢測試劑盒和免疫印跡的兩種方法檢測腸道細(xì)胞凋亡數(shù)量及凋亡相關(guān)蛋白BAX、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)水平;通過檢測小鼠門靜脈血中... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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引言
第一章 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
第二章 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 DSS結(jié)腸炎小鼠模型構(gòu)建
    2.2 免疫印跡法檢測 DHM 對凋亡相關(guān)蛋白 Caspase3、BAX、Bcl-2 表達(dá)的影響
        2.2.1 蛋白提取、濃度測定
        2.2.2 電泳
        2.2.3 轉(zhuǎn)膜
        2.2.4 封閉
        2.2.5 曝光、分析
    2.3 腸組織切片HE染色并組織學(xué)評分
    2.4 腸組織切片免疫組化染色
    2.5 TUNEL染色
    2.6 門靜脈血中細(xì)菌活力檢測
        2.6.1.門靜脈血采集
        2.6.2.細(xì)菌活力檢測
        2.6.3 細(xì)菌計(jì)數(shù)
    2.7 DHM保護(hù)DSS損害的結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障完整性
    2.8 MTT實(shí)驗(yàn)檢測LPS和DHM對IEC6細(xì)胞增殖的影響
    2.9 反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)
        2.9.1.提取RNA
        2.9.2.逆轉(zhuǎn)錄RNA成c DNA
        2.9.3.PCR反應(yīng)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 DHM對結(jié)腸炎小鼠DAI及體重的影響
    3.2 DHM對結(jié)腸炎小鼠腸道長度及組織學(xué)的影響
    3.3 DHM促進(jìn)腸道緊密連接蛋白的表達(dá)
    3.4 DHM對腸道細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3.5 DHM減少結(jié)腸炎小鼠門靜脈血中細(xì)菌活力
    3.6.DHM保護(hù)DSS引起的結(jié)腸炎小鼠腸黏膜屏障完整性破壞
    3.7.DHM對腸上皮細(xì)胞增殖的影響
    3.8.LPS對腸上皮細(xì)胞增殖的影響
    3.9.DHM對炎性條件下腸上皮細(xì)胞炎性因子分泌的影響
第四章 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間研究成果
致謝



本文編號(hào)：3664488