發(fā)布時(shí)間：2022-02-15 02:17

　　目的:NS2TP基因是抑制性消減雜交技術(shù)（SSH）篩選出的HCV NS2反式激活的基因之一。本實(shí)驗(yàn)中,我們對HCV NS2反式激活NS2TP基因從翻譯水平和轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行驗(yàn)證,進(jìn)而定位NS2TP基因啟動(dòng)子的核心區(qū)域,并初步探究了NS2TP基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機(jī)制。方法:（1） HCV NS2對NS2TP基因反式激活作用的驗(yàn)證。首先,運(yùn)用pcDNA3.1（–）-NS2表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,以pcDNA3.1（–）為陰性對照組。提取總蛋白、總RNA,然后分別從翻譯水平,即Western Blot實(shí)驗(yàn),和轉(zhuǎn)錄水平,即進(jìn)行Real-time PCR實(shí)驗(yàn)。分析和研究NS2對NS2TP基因的反式激活作用。（2） NS2TP基因啟動(dòng)子的活性分析與核心區(qū)的確定。首先,成功構(gòu)建pGL4.10-NS2TP啟動(dòng)子雙熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體系統(tǒng),運(yùn)用構(gòu)建的不同截短型載體轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,在對啟動(dòng)子活性進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上,實(shí)驗(yàn)確定了NS2TP基因啟動(dòng)子活性的核心區(qū)域,同時(shí)也分析了NS2對NS2TP基因啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)作用。（3） NS2TP基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子CREB作用啟動(dòng)子核心區(qū)的驗(yàn)證。運(yùn)用生物信息學(xué)技術(shù)分析了啟動(dòng)子... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HCV基因組和NS2主要轉(zhuǎn)錄、翻譯產(chǎn)物NS2TP基因是一個(gè)從抑制性消減雜交篩選出的HCVNS2反式激活基因，編碼

NS2上調(diào)NS2TP表達(dá)

Real Time PCR 擴(kuò)增反應(yīng)采用了如圖 2-3 顯示的 SYBR Green I 嵌合熒光法，即在反應(yīng)體系中加入與雙鏈 DNA 結(jié)合便可發(fā)出熒光的熒光染料 SYBR Green I，通過檢測 PCR 反應(yīng)液中的熒光信號強(qiáng)度，可以對目的基因進(jìn)行準(zhǔn)確定量，同時(shí)還可以測定擴(kuò)增的目的 DNA 片段的融解溫度。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PEG10 Activation by Co-Stimulation of CXCR5 and CCR7 Essentially Contributes to Resistance to Apoptosis in CD19+CD34+ B Cells from Patients with B Cell Lineage Acute and Chronic Lymphocytic Leukemia[J]. Chunsong Hu~1 Jei Xiong~(2,3) Linjei Zhang~1 Baojun Huang~1 Qiuping Zhang~3 Qun Li~1 Mingzhen Yang~4 Yaou Wu~1 Qun Wu~3 Qian Shen~1 Qingping Gao~5 Kejian Zhang~5 Zhimin Sun~6 Junyan Liu~3 Youxin Jin~2 Jinquan Tan~(1,3,7) ~1Department of Immunology,College of Basic Medical Sciences.Anhui Medical University,Hefei 230032,China.~2The Stat Key Laboratory of Molecular Biology.Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences.Chinese Academy of Science,Shanghai,China.~3Department of Immunology,and Sino-Danish Joint Laboratory of Immunology.Wuhan University School of Medicine.Wuhan 430071.China.~4Department of Hematology,The Affiliated University Hospital.Anhui Medical University,Hefei 230031.China.~5Department of Hematology,The Renmin and Zongnan University Hospital,Wuhan University,Wuhan 43007 1,China.~6Department of Hematology.The Provincial Hospital of Anhui.Hcfei 230020.China..  Cellular & Molecular Immunology. 2004(04)



本文編號：3625715