乙型病毒性肝炎，簡稱乙肝，是一種由乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）感染機(jī)體后所引起的疾病。乙肝流行面廣、傳染性強(qiáng)、易于慢性化和重癥化，并且以人類為惟一宿主，因此對人類健康造成了很大傷害。HBV是一種嗜肝DNA病毒，主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)并損害肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞炎癥、壞死、纖維化。HBV感染肝細(xì)胞的機(jī)理比較復(fù)雜，尚未完全明確。目前，控制乙型肝炎傳播最為直接和有效的措施是接種乙肝疫苗。在HBV感染期間，肝細(xì)胞大量分泌20nm的外膜主蛋白顆粒，由細(xì)胞系或酵母方法制備的同樣顆粒就是有效預(yù)防病毒感染的疫苗。乙肝疫苗經(jīng)歷了乙肝病毒外膜主蛋白（即S蛋白，HBsAg）重組疫苗；乙肝病毒外膜主蛋白、中蛋白（前S2蛋白+S蛋白）及大蛋白（前S1蛋白+前S2蛋白+S蛋白）重組疫苗；乙肝DNA疫苗等幾個(gè)階段。這些疫苗雖然能夠有效地降低HBV母嬰傳播的發(fā)生率，然而在人體保護(hù)率、抗體應(yīng)答水平、免疫持久性等方面還存在一定的問題。因此，尋找免疫原性更強(qiáng)的HBV疫苗成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。HBV的外膜由開放讀框S基因（S-ORF，核苷酸nt2854-0-832）編碼合成，包括3種外膜成分：大蛋白（L）... 

【文章來源】：河南科技大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HBsAg1-6的PCR結(jié)果

圖 2-2 HBsAg1-6 的 PCR 結(jié)果Fig.2-2 Result of PCR with HBsAg1-6切鑒定的結(jié)果粒大片段條帶和各大小不同的目的基因片段條帶見圖 2-3。從結(jié)S1-preS2-s(1-174)約 600bp、preS1-preS2-s(1-245)約 810bp、pre) 約 957bp 、 preS1-preS2-s(1-341) 約 1098bp 、 preS1-preS2-s(preS1-preS2-s(1-400)約 1275bp。

果入目的條帶正確的陽性質(zhì)粒送北京六合華大基因科技股份有限，測序結(jié)果用 DNAman 軟件進(jìn)行比對以驗(yàn)證目的片段序列建的表達(dá)載體序列測定的結(jié)果顯示：重組載體 pcDNA3.1/P-preS2-HBsAg(1-6)-HA 測序驗(yàn)證不同長度的 preS1-preS2-HBs無突變，見附錄 B。達(dá)載體 pcDNA3.1/Pro-UK-6*His-preS1-preS2-HBsAg(1-6)-H3.1（+）載體為哺乳動(dòng)物穩(wěn)定表達(dá)載體，全長 5.4kb，具有完結(jié)構(gòu)和氨卞青霉素抗性，利用質(zhì)粒自身的順式成分將外源目的位點(diǎn)后經(jīng)轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞 293 后可以獲得表達(dá)，從而完成蛋白的

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本文編號：3622354