發(fā)布時間：2022-01-22 12:21

　　研究背景：重型肝炎是一種病死率很高的臨床危重癥。在我國,重型肝炎的主要原因仍是病毒性肝炎。研究證明,高遷移率族蛋白-1（HMGB1）在重型肝炎的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。核蛋白HMGB1是生命所必須物質(zhì),近年來,胞外HMGB1的促炎癥作用受到越來越多的學(xué)者關(guān)注。正常情況下,HMGB1動態(tài)結(jié)合于細(xì)胞核染色質(zhì)上,因此,HMGB1如何從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外是其發(fā)揮胞外作用的關(guān)鍵。目前已經(jīng)取得共識的是“活化免疫細(xì)胞的主動分泌”和“壞死細(xì)胞的被動漏出”兩種形式。而課題組前期研究發(fā)現(xiàn),肝細(xì)胞作為實質(zhì)細(xì)胞,在非壞死情況下亦能釋放HMGB1,但其釋放過程尚不明確。本研究第一部分以業(yè)已明確的免疫細(xì)胞分泌HMGB1的過程特點為對照,探討肝細(xì)胞分泌HMGB1的條件,旨在回答上述問題。同時,肝細(xì)胞作為實質(zhì)細(xì)胞,卻證實同免疫細(xì)胞一樣,能分泌炎癥因子HMGB1,但其分泌的HMGB1有何生物學(xué)特性尚不明確。而探討其生物學(xué)特性的前提是分離提純出其分泌的HMGB1蛋白。目前對天然蛋白的純化方法,尚處于探索階段。本研究第二部分就分離提純分泌型HMGB1的方法和條件進(jìn)行了初步探索,為進(jìn)一步研究其生物學(xué)特性奠定基礎(chǔ)。目的：（1... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英漢縮略語名詞對照表
前言
第一章 脂多糖誘導(dǎo)人肝細(xì)胞釋放HMGB1的過程研究
    1.1 材料與方法
        1.1.1 細(xì)胞株
        1.1.2 試劑和材料
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 分組與干預(yù)
        1.1.5 細(xì)胞存活率測定
        1.1.6 細(xì)胞培養(yǎng)上清液LDH含量測定
        1.1.7 HE染色觀察各組細(xì)胞形態(tài)
        1.1.8 DAPI染核觀察各組細(xì)胞核形態(tài)
        1.1.9 熒光TUNEL檢測細(xì)胞凋亡
        1.1.10 流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        1.1.11 RT-PCR檢測細(xì)胞HMGB1mRNA表達(dá)水平
        1.1.12 Western blot分析上清HMGB1蛋白含量
        1.1.13 細(xì)胞免疫熒光觀察HMGB1蛋白移位
        1.1.14 統(tǒng)計學(xué)方法
    1.2 實驗結(jié)果
        1.2.1 LPS刺激濃度的確定
        1.2.2 LPS作用不同時間點HepG2,L02及U937細(xì)胞存活率
        1.2.3 LPS作用不同時間點HepG2,L02及U937細(xì)胞上清LDH含量
        1.2.4 LPS刺激對HepG2,L02及U937細(xì)胞形態(tài)的影響
        1.2.5 LPS刺激對HepG2,L02及U937細(xì)胞凋亡的影響
        1.2.6 LPS作用對HepG2,L02及U937細(xì)胞HMGB1移位的影響
        1.2.7 LPS刺激對HepG2,L02及U937細(xì)胞分泌HMGB1蛋白的影響
        1.2.8 LPS刺激對HepG2,L02及U937細(xì)胞HMGB1mRNA表達(dá)水平的影響
    1.3 討論
    1.4 結(jié)論
第二章 天然分泌型HMGB1蛋白的初步純化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試劑和材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 液體配制
        2.1.4 蛋白沉淀
        2.1.5 考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白濃度
        2.1.6 二維凝膠電泳
        2.1.7 層析
        2.1.8 超濾濃縮
        2.1.9 銀染
        2.1.10 Western blot驗證各組分中的HMGB1蛋白
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 二維凝膠電泳
        2.2.2 蛋白沉淀法所得蛋白初步層析圖
        2.2.3 分子篩Sephadex G50/G75/G100層析峰
        2.2.4 離子交換層析圖
        2.2.5 超濾濃縮的分離效果
        2.2.6 Western blot檢測層析各組分HMGB1蛋白
        2.2.7 初步序貫分離結(jié)果
    2.3 討論
    2.4 結(jié)論
總結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間參與的項目及發(fā)表的文章


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]肝損傷模型小鼠高遷移率族蛋白-1的表達(dá)[J]. 劉洪波,范學(xué)工,劉悅暉,張磐,周蓉蓉,李寧,黃建軍.  生命科學(xué)研究. 2008(02)
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博士論文
[1]中國明對蝦在脅迫條件下肝胰臟的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 蔣昊.中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所） 2009



本文編號：3602191