本文關(guān)鍵詞：扶正化瘀方抑制血管生成相關(guān)基因?qū)Ψ蔷凭灾拘愿卫w維化防治作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除外酒精和其他明確損肝因素所致的以彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合癥,包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化及肝細(xì)胞癌。非酒精性脂肪性肝纖維化是該病進(jìn)展為肝硬化的重要階段,但其發(fā)病機(jī)制尚未明確,亦缺乏特效療法。我們前期研究發(fā)現(xiàn),扶正化瘀方可抑制肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)、調(diào)節(jié)炎癥及纖維化相關(guān)基因的表達(dá),阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的進(jìn)展。近年研究發(fā)現(xiàn),肝星狀細(xì)胞活化與肝微循環(huán)障礙及新生血管增長(zhǎng)有關(guān),但血管生成相關(guān)基因在非酒精性脂肪性肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用尚不清楚。本研究應(yīng)用高脂、蛋氨酸-膽堿缺乏(methionine and choline deficient,MCD)飲食建立小鼠非酒精性脂肪性肝纖維化模型,扶正化瘀方及血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)激動(dòng)劑血晶素(Hemin)進(jìn)行干預(yù),觀察α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及其下游血管生成相關(guān)基因血管內(nèi)皮生成因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible NO synthase,i NOs)和巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)m RNA和蛋白的表達(dá)變化,探明血管生成相關(guān)基因在非酒精性脂肪性肝纖維化進(jìn)展中的作用及扶正化瘀方和/HO-1激動(dòng)劑阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的主要機(jī)制,為臨床治療非酒精性脂肪性肝纖維化提供理論依據(jù)。方法:選用清潔級(jí)7~8周齡健康雄性C57BL/6J小鼠30只,隨機(jī)分為5組,每組6只,分別為對(duì)照組、模型組、扶正化瘀方組、血晶素組、扶正化瘀聯(lián)合血晶素組。采用MCD飲食建立非酒精性脂肪性肝纖維化模型,分別應(yīng)用扶正化瘀方、血晶素、扶正化瘀方聯(lián)合血晶素進(jìn)行干預(yù),以膽堿-蛋氨酸充足飼料設(shè)立對(duì)照組。觀察實(shí)驗(yàn)小鼠精神及活動(dòng)情況、毛發(fā)及體重變化;8周末處死動(dòng)物,留取部分肝組織,4%甲醛溶液固定,石蠟包埋,備做病理切片,其5μm切片,蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察肝臟脂肪變、炎癥程度、Masson三色染色觀察肝組織纖維化程度;余肝組織以液氮速凍后置于-80oC冰箱保存,分別提取蛋白和RNA,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction,Real Time PCR)檢測(cè)α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1αm RNA的表達(dá)情況;Western blot和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1α蛋白的表達(dá)情況,應(yīng)用Quantity one分析系統(tǒng)軟件對(duì)Western blot結(jié)果進(jìn)行半定量分析,結(jié)果以HIF-1α/β-actin、VEGF/β-actin、i NOs/β-actin積分光密度比值表示。肝組織m RNA及蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件,各組間比較采用單因素方差分析,組間比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn),P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并對(duì)比分析上述基因表達(dá)與肝組織病理學(xué)變化的關(guān)系,明確不同基因表達(dá)水平與肝纖維化進(jìn)展的關(guān)系。結(jié)果:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況:對(duì)照組小鼠活潑,好動(dòng);毛發(fā)有光澤,體重隨造模時(shí)間逐漸增加;模型組精神萎靡,少動(dòng),毛發(fā)無(wú)光澤,體重明顯減輕;應(yīng)用扶正化瘀方及血晶素組小鼠精神稍差,活動(dòng)較少,毛發(fā)光澤較差,體重減輕,但較模型組明顯好轉(zhuǎn),尤以扶正化瘀方聯(lián)合血晶素組小鼠較模型組改善明顯。2肝組織病理學(xué)變化:對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)均正常,肝索排列整齊,以中央靜脈呈放射狀分布;模型組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝細(xì)胞呈現(xiàn)大泡性為主脂肪變性,小葉內(nèi)可見(jiàn)點(diǎn)、灶狀肝細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)、竇周纖維化,匯管區(qū)纖維組織增生,纖維間隔形成(NAS評(píng)分為5~6,肝纖維化評(píng)分為2~3);應(yīng)用扶正化瘀方或血晶素組肝細(xì)胞脂肪變、炎癥及纖維化較模型組明顯改善(NAS評(píng)分為2~4,肝纖維化評(píng)分為1~2);血晶素聯(lián)合扶正化瘀方組肝損傷進(jìn)一步減輕(NAS評(píng)分為1~3,肝纖維化評(píng)分為0~1)。3肝組織α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1αm RNA表達(dá):模型組小鼠肝組織α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1αm RNA表達(dá)較對(duì)照組均顯著上調(diào),依次為8.33±2.32 vs 1.01±0.19,4.50±0.78 vs 1.03±0.28,7.40±1.54 vs 0.92±0.20,9.94±1.60 vs 0.93±0.20,7.65±1.87 vs 1.01±0.11,P0.001;與模型組相比,應(yīng)用扶正化瘀方組肝組織α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1αm RNA表達(dá)明顯降低,依次為3.83±0.53,3.02±0.55,3.23±0.94,3.60±0.96,3.70±1.14,P0.01;應(yīng)用血晶素組上述基因m RNA表達(dá)亦較模型組明顯降低,依次為3.94±0.83,2.29±0.78,3.17±1.06,2.81±0.41,4.16±1.31,P0.001;扶正化瘀方聯(lián)合血晶素組上述基因m RNA表達(dá)進(jìn)一步下降,依次為2.33±0.76,1.61±0.20,1.58±0.23,2.09±0.62,2.07±0.10。4肝組織α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs和MIP-1α蛋白表達(dá):模型組小鼠肝組織α-SMA陽(yáng)性面積百分比較對(duì)照組顯著增加,為(1.08±0.20)%vs(0.29±0.07)%,P0.001;與模型組相比,應(yīng)用扶正化瘀方或血晶素組肝組織α-SMA陽(yáng)性面積百分比明顯下降,分別為(0.53±0.04)%、(0.49±0.11)%,P0.001;扶正化瘀方聯(lián)合血晶素組α-SMA陽(yáng)性面積百分比進(jìn)一步下降為(0.29±0.07)%;模型組小鼠肝組織HIF-1α、VEGF、i NOs蛋白表達(dá)較對(duì)照組均顯著增強(qiáng),依次為0.55±0.08 vs 0.24±0.07,1.08±0.034 vs 0.36±0.05,3.30±0.88 vs 1.08±0.09,P0.001;應(yīng)用扶正化瘀方組肝組織HIF-1α、VEGF和i NOs蛋白表達(dá)明顯降低,依次為0.44±0.02,0.54±0.07,1.61±0.21,P0.05;應(yīng)用血晶素組上述基因蛋白表達(dá)水平亦較模型組明顯降低,依次為0.36±0.11,0.46±0.05,2.31±0.39,P0.01;扶正化瘀方聯(lián)合血晶素組上述基因蛋白表達(dá)水平進(jìn)一步下降,依次為0.28±0.02,0.31±0.06,1.26±0.38;模型組小鼠肝組織MIP-1α陽(yáng)性面積百分比較對(duì)照組顯著增加,為(0.71±0.09)%vs(0.11±0.03)%,P0.001;與模型組相比,應(yīng)用扶正化瘀方或血晶素組肝組織MIP-1α陽(yáng)性面積百分比明顯降低,分別為(0.41±0.07)%、(0.43±0.11)%,P0.001;扶正化瘀方聯(lián)合血晶素組上述基因蛋白陽(yáng)性面積百分比為(0.25±0.07)%,較單用扶正化瘀方及血晶素組進(jìn)一步降低。結(jié)論:1α-SMA、HIF-1α、VEGF、i NOs及MIP-1α在MCD飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝纖維化發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。2扶正化瘀方通過(guò)抑制肝星狀細(xì)胞活化,下調(diào)HIF-1α及其下游VEGF、i NOs等血管生成相關(guān)基因表達(dá)阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的發(fā)生進(jìn)展。3扶正化瘀方與HO-1激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用可協(xié)同抑制肝星狀細(xì)胞活化及血管生成相關(guān)基因的表達(dá),更有效地阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝纖維化 中藥 扶正化瘀 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 血管內(nèi)皮生成因子 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-30
• 附表30-32
• 討論32-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 綜述 血管內(nèi)皮生成因子和肝纖維化38-50
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：扶正化瘀方抑制血管生成相關(guān)基因?qū)Ψ蔷凭灾拘愿卫w維化防治作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：359855