本文關鍵詞：FGF21在對乙酰氨基酚誘導的小鼠急性肝功能衰竭中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP)是臨床常用的解熱鎮(zhèn)痛藥物，在治療劑量對機體起到很好保護作用，但是在過高劑量使用時會產(chǎn)生嚴重的副作用，引起肝臟的損傷壞死，進一步演變成急性肝功能衰竭（acute liver failure，ALF）。在西方國家由APAP過量引起的ALF已成為肝功能衰竭的主要原因。目前，臨床上主要使用N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）來治療APAP引起的ALF，但是NAC療效的發(fā)揮具有很大局限性，只能在APAP攝入后1小時左右使用NAC才有效，時間過長則失去治療效果，因此尋找具有更好治療效果的藥物已成為APAP研究的一大熱點。 成纖維細胞生長因子21（fibroblast growth factor21，F(xiàn)GF21）是一種新發(fā)現(xiàn)的成纖維細胞生長因子家族FGF19亞家族的成員。它能調(diào)節(jié)脂類和糖類的代謝，尤其是其所具有的降低血糖而又非胰島素依賴性的特性使其受到越來越多的關注。最近大量研究表明在一些急性刺激引起的病理條件下，F(xiàn)GF21能對機體起到較好的保護作用，表明了FGF21有可能作為一個應激反應基因發(fā)揮抵抗疾病的作用。本課題通過構建急性肝功能衰竭小鼠模型，對比在功能缺失和功能獲得條件下肝臟損傷的差異，初步探究了FGF21在APAP引起的ALF中的作用。 小鼠經(jīng)過夜禁食之后，腹腔注射400mg/kg的APAP來誘導ALF模型。首先檢測造模成功鼠內(nèi)源性的FGF21表達變化，其次比較在APAP處理之后野生型鼠與FGF21基因敲除鼠肝臟損傷的差異，，最后檢測了外源性FGF21蛋白處理對肝臟損傷程度的影響。采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)、定量聚合酶鏈反應（quantity-polymerase chain reaction，Q-PCR）、蛋白質印跡（western blotting，WB）等檢測技術以及生化、形態(tài)學等指標進行綜合分析。結果表明，APAP處理之后肝臟組織及血清中FGF21水平急劇增加，隨著時間延長FGF21恢復至初始水平。在對比野生型鼠與FGF21基因敲除鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF21基因缺失之后血清轉氨酶水平顯著升高并且肝臟的壞死程度也增大。FGF21基因缺失之后，肝臟中與加劇損傷有關的趨化因子及細胞間粘附因子的水平明顯增加，而一些具有保護作用的因子的水平卻下降。在用外源性FGF21蛋白處理時發(fā)現(xiàn)，外源FGF21蛋白能抑制轉氨酶水平的升高，降低肝臟壞死的程度。中性粒細胞浸潤引起的氧化應激是肝臟損傷的重要機制，研究發(fā)現(xiàn)FGF21基因缺失使與中性粒細胞浸潤有關的多種基因水平升高，而用外源性的FGF21處理則顯著減低了這些基因的水平。 本研究初步發(fā)現(xiàn)，在APAP過量誘導的ALF模型中FGF21能起減輕肝臟損傷。FGF21基因缺失加劇了肝臟損傷，而外源性的FGF21蛋白處理能減輕肝臟損傷。對相關機制的初步探究表明，F(xiàn)GF21可能通過減輕中性粒細胞浸潤程度，降低氧化應激來發(fā)揮保護作用。
【關鍵詞】：成纖維細胞生長因子21 急性肝功能衰竭 對乙酰氨基酚 中性粒細胞浸潤 氧化應激
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮寫詞8-12
• 第1章 文獻綜述12-19
• 1.1 成纖維細胞生長因子 2112-16
• 1.1.1 成纖維細胞生長因子 21 概述12-13
• 1.1.2 成纖維細胞生長因子 21 的生理作用13-15
• 1.1.3 成纖維細胞生長因子 21 與臨床疾病的相關研究15-16
• 1.2 對乙酰氨基酚引發(fā)的急性肝功能衰竭16-19
• 1.2.1 對乙酰氨基酚引發(fā)的急性肝功能衰竭概述16
• 1.2.2 對乙酰氨基酚在機體的代謝16-17
• 1.2.3 對乙酰氨基酚引發(fā)的急性肝功能衰竭的相關機制17-19
• 第2章 材料與方法19-34
• 2.1 主要試劑和器材19-21
• 2.1.1 主要試劑19-20
• 2.1.2 器材20
• 2.1.3 主要儀器20-21
• 2.2 實驗動物21
• 2.3 急性肝功能衰竭（ALF）動物模型構建及分組處理21-22
• 2.3.1 急性肝功能衰竭（ALF）動物模型構建方法21-22
• 2.3.2 實驗分組及處理22
• 2.4 樣品的分離和制備22-23
• 2.5 血清 ALT 和 AST 檢測23-24
• 2.6 形態(tài)學檢測24-25
• 2.6.1 肝臟組織包埋和切片24
• 2.6.2 HE 染色24-25
• 2.7 組織蛋白提取及濃度檢測25-26
• 2.7.1 組織總蛋白提取25
• 2.7.2 BCA 法測蛋白濃度25-26
• 2.8 肝臟 ROS 水平檢測26-27
• 2.8.1 ROS 檢測原理26
• 2.8.2 ROS 檢測步驟26-27
• 2.9 肝臟 MDA 水平檢測27-28
• 2.9.1 MDA 檢測原理27
• 2.9.2 MDA 檢測步驟27-28
• 2.10 血清及組織 FGF21 蛋白水平檢測28-29
• 2.11 Western Blotting 方法檢測肝臟組織蛋白變化29-31
• 2.11.1 配制上樣體系29
• 2.11.2 SDS-PAGE 電泳29
• 2.11.3 轉膜29-30
• 2.11.4 封閉30
• 2.11.5 抗體孵育30
• 2.11.6 檢測30-31
• 2.12 Q-PCR 檢測組織 mRNA 變化31-33
• 2.12.1 RNA 的提取31
• 2.12.2 逆轉錄31-32
• 2.12.3 Q-PCR 檢測32-33
• 2.13 統(tǒng)計學分析33-34
• 第3章 實驗結果34-44
• 3.1 APAP 處理對內(nèi)源性 FGF21 表達的影響34-36
• 3.2 FGF21 基因缺失后的影響36-40
• 3.3 外源性 FGF21 蛋白對 APAP 處理鼠的影響40-44
• 第4章 討論44-48
• 4.1 ALF 小鼠模型的建立44
• 4.2 APAP 處理影響內(nèi)源性 FGF21 的表達和分泌44-45
• 4.3 FGF21 基因缺失加劇肝臟的損傷程度45-46
• 4.4 外源 FGF21 蛋白能減輕肝臟的損傷程度46-48
• 第5章 結論48-49
• 參考文獻49-54
• 作者簡介及在學期間所取得的科研成果54-55
• 致謝55

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：FGF21在對乙酰氨基酚誘導的小鼠急性肝功能衰竭中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：358900