目的:通過觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）對(duì)肝星狀細(xì)胞（HSC）細(xì)胞周期及調(diào)控蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討MSC對(duì)HSC增殖抑制作用的機(jī)制。方法:MSC的分離:在無菌條件下分離SD雄性大鼠股骨骨髓,采用貼壁培養(yǎng)法進(jìn)行MSC培養(yǎng)、純化和擴(kuò)增,傳代至第4代使用;大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）和纖維原細(xì)胞系凍融后傳代使用。應(yīng)用6孔塑料細(xì)胞培養(yǎng)盒,在半透膜（transwell insert）上接種MSC （2×105cells/ well）,在6孔塑料培養(yǎng)板上接種HSC-T6細(xì)胞（2×105cells/ well） ,建立上下雙層細(xì)胞共培養(yǎng)體系,常規(guī)培養(yǎng);實(shí)驗(yàn)分3組:①實(shí)驗(yàn)組在半透膜上接種大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在6孔塑料培養(yǎng)板上接種肝星狀細(xì)胞,建立上下雙層細(xì)胞共培養(yǎng)體系;②對(duì)照組將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞更換為成纖維細(xì)胞;③空白組僅行肝星狀細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)。以上體系培養(yǎng)觀察72 h。每天于倒置相差顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察活體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;WST-8法檢測(cè)肝星狀細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,RT-PCR檢測(cè)肝星狀細(xì)胞CyclinD1和P27 mRNA的表達(dá),Western blot檢測(cè)肝星狀細(xì)胞Cycl... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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