本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體4通過依賴NFκ-B激活胱硫醚β合成酶介導(dǎo)腸易激綜合征大鼠的內(nèi)臟痛敏，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的腸易激綜合征(IBS)是一種以腹部不適伴排便習(xí)慣改變?yōu)樘卣鞯墓δ苄阅c病。近年來,隨著人們生活節(jié)奏的加快、飲食結(jié)構(gòu)的改變,神經(jīng)、精神、感染因素所致的腸易激綜合征發(fā)病率有上升趨勢,對患者的生活質(zhì)量和工作造成了很大的困擾。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖且孕律诮Y(jié)腸炎大鼠(NCI)為動物模型,研究Toll樣受體4與NF-?B調(diào)控內(nèi)源性硫化氫合成酶胱硫醚β合成酶(CBS)表達(dá)的上調(diào),以及在新生期結(jié)腸炎性刺激誘導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛覺中的作用。方法1.以出生10天的雄性SD大鼠為對象,肛門處插入2cm,結(jié)腸內(nèi)注射0.2ml的0.5%稀乙酸來建立內(nèi)臟痛覺高敏的模型,注射等容量的生理鹽水作為對照。待大鼠成年(6周)后,運(yùn)用腹壁撤回評分(AWR score)方法評測NCI大鼠的痛行為反應(yīng)。2.運(yùn)用Western blotting方法分析對照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG,T13-L2)的Toll樣受體4,NF-?B,CBS蛋白表達(dá)量。3.結(jié)腸管壁注射熒光素(Dil)來逆行標(biāo)記結(jié)腸特異性背根節(jié)(DRG)神經(jīng)元,運(yùn)用全細(xì)胞膜片鉗方法檢測DRG神經(jīng)元的興奮性。4.運(yùn)用免疫熒光的方法研究Toll樣受體4是否與NF-?B、CBS在結(jié)腸相關(guān)DRG(T13-L2)神經(jīng)元上共表達(dá)。5.運(yùn)用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證在NCI大鼠的DRG中NF-?B與CBS的啟動子區(qū)特異性結(jié)合情況。結(jié)果1.NCI增加腸相關(guān)DRG神經(jīng)元(T13-L2)Toll樣受體4的表達(dá)。2.行為學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),鞘內(nèi)注射Toll樣受體4的拮抗劑CLI-095,能夠顯著降低NCI大鼠的內(nèi)臟痛覺高敏。3.運(yùn)用電生理膜片鉗技術(shù)對腸特異性DRG神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn),Toll樣受體4的拮抗劑CLI-095能顯著降低腸相關(guān)DRG神經(jīng)元的興奮性。4.為了進(jìn)一步研究Toll樣受體4的作用機(jī)制,我們采用免疫熒光的方法發(fā)現(xiàn)Toll樣受體4與CBS在Dil標(biāo)記的腸相關(guān)DRG神經(jīng)元上共表達(dá),并且Toll樣受體4的拮抗劑CLI-095能夠翻轉(zhuǎn)NCI大鼠結(jié)腸相關(guān)DRG的CBS的表達(dá)。5.免疫熒光結(jié)果發(fā)現(xiàn),Toll樣受體4與NF-κB在Dil標(biāo)記的腸相關(guān)DRG神經(jīng)元上也有共表達(dá),另外,western blotting結(jié)果顯示NCI能夠增加細(xì)胞核NF-κB,并且Toll樣受體4的拮抗劑CLI-095能夠翻轉(zhuǎn)這一增加。6.腹腔注射NF-κB的拮抗劑PDTC,能夠減少CBS的表達(dá),并且可以降低NCI導(dǎo)致的內(nèi)臟痛覺超敏。7.與對照組相比,染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示CBS與NF-κB的DNA結(jié)合位點(diǎn)在NCI大鼠腸相關(guān)DRG中的特異性結(jié)合顯著增強(qiáng)。8.為了進(jìn)一步確認(rèn)Toll樣受體4的作用機(jī)制,我們運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)的方法,體外孵育Toll樣受體4的激動劑脂多糖(LPS),發(fā)現(xiàn)LPS可以顯著增加NF-κB和CBS的表達(dá),并且孵育NF-κB的拮抗劑PDTC可以翻轉(zhuǎn)CBS的增加,但是孵育CBS的拮抗劑AOAA并不能翻轉(zhuǎn)NF-κB的增加。結(jié)論我們的結(jié)果提示CBS的表達(dá)上調(diào)可能是由TLR4/NF-κB信號通路的激活來介導(dǎo)的,TLR4在IBS慢性內(nèi)臟痛覺高敏的形成中發(fā)揮作用。因此,本實(shí)驗(yàn)研究在一定程度上揭示了功能性胃腸疾病如IBS病人慢性內(nèi)臟痛產(chǎn)生的分子機(jī)制,從而可能為慢性內(nèi)臟痛的治療提供更有效的治療靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：背根神經(jīng)節(jié) 內(nèi)臟痛 硫化氫 Toll樣受體 NF-κB
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 引言11-13
• 第二章 材料與方法13-26
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對象13
• 2.2 新生期結(jié)腸炎性刺激癥（NEONATAL COLONIC INFLAMMATION ，NCI）模型的建立13
• 2.3 腹壁撤回反射(ABDOMINAL WITHDRAWAL REFLEX，AWR) 評分檢測痛閾13-14
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)儀器13
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法13-14
• 2.3.3 給藥方法14
• 2.3.4 實(shí)驗(yàn)用藥14
• 2.4 WESTERN BLOTTING檢測蛋白表達(dá)14-16
• 2.4.1 實(shí)驗(yàn)試劑14-15
• 2.4.2 實(shí)驗(yàn)儀器15
• 2.4.3 實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 2.5 急性分離DRG神經(jīng)元和全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)16-19
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)試劑16
• 2.5.2 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.5.3 熒光染料DiI標(biāo)記腸相關(guān)DRG神經(jīng)元17
• 2.5.4 急性分離DRG神經(jīng)元17-18
• 2.5.5 拉制玻璃微電極18
• 2.5.6 全細(xì)胞膜片鉗記錄18-19
• 2.5.7 神經(jīng)元興奮性記錄19
• 2.6 原代DRG細(xì)胞培養(yǎng)19-21
• 2.6.1 實(shí)驗(yàn)試劑19-20
• 2.6.2 實(shí)驗(yàn)儀器20
• 2.6.3 急性分離DRG神經(jīng)元20
• 2.6.4 培養(yǎng)DRG神經(jīng)元20-21
• 2.7 免疫組化21-22
• 2.7.1 實(shí)驗(yàn)試劑21
• 2.7.2 實(shí)驗(yàn)儀器21
• 2.7.3 實(shí)驗(yàn)方法21-22
• 2.8 核蛋白提取22-23
• 2.8.1 實(shí)驗(yàn)試劑Nc-細(xì)胞核/漿蛋白抽提試劑盒（康為世紀(jì)）22-23
• 2.8.2 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.8.3 實(shí)驗(yàn)方法23
• 2.9 染色質(zhì)免疫共沉淀(CHIP)23-26
• 2.9.1 實(shí)驗(yàn)試劑Chromatin Immunoprecipitation Kit (Millipore公司)23
• 2.9.2 實(shí)驗(yàn)儀器23
• 2.9.3 實(shí)驗(yàn)方法23-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-37
• 3.1 TOLL樣受體 4（TLR4）介導(dǎo)新生期結(jié)腸炎性刺激（NEONATAL COLONIC INFLAMMATION ，NCI）誘導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛26-27
• 3.1.1 TLR4 的表達(dá)上調(diào)參與新生期結(jié)腸炎性刺激誘導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛26
• 3.1.2 TLR4 參與NCI誘導(dǎo)的慢性內(nèi)臟痛覺超敏26-27
• 3.2 TLR4 抑制劑CLI-095 能夠減少NCI大鼠腸相關(guān)DRG神經(jīng)元的興奮性27-29
• 3.3 TLR4 抑制劑CLI-095 能夠減少NCI大鼠腸相關(guān)DRG神經(jīng)元中CBS的表達(dá)29-30
• 3.4 NCI通過活化的TLR4 上調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-ΚB的表達(dá)30-32
• 3.4.1 TLR4 和核轉(zhuǎn)錄因子p65 在SD大鼠結(jié)腸特異性神經(jīng)元中共表達(dá)30
• 3.4.2 NCI誘導(dǎo)NF-κB （p65）活化30-31
• 3.4.3 TLR4 的拮抗劑CLI-095 翻轉(zhuǎn)NF-κB （p65）的高表達(dá)31-32
• 3.5 核轉(zhuǎn)錄因子NF-ΚB在NCI誘發(fā)的慢性內(nèi)臟痛中的作用32-34
• 3.5.1 核轉(zhuǎn)錄因子p65 和胱硫醚合酶CBS在大鼠結(jié)腸特異性神經(jīng)元中共表達(dá)32-33
• 3.5.2 NF-κB抑制劑PDTC翻轉(zhuǎn)NCI誘導(dǎo)的成年大鼠內(nèi)臟痛覺過敏33-34
• 3.6 NCI能夠增強(qiáng)NF-ΚB和CBS基因啟動子區(qū)的結(jié)合34-35
• 3.7 NF-ΚB抑制劑能夠翻轉(zhuǎn)TLR4 誘導(dǎo)的CBS蛋白表達(dá)的增加35-37
• 3.7.1 TLR4 激動劑LPS孵育DRG神經(jīng)元可引起NF-κB和CBS蛋白表達(dá)的改變35
• 3.7.2 PDTC能夠翻轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)激活的CBS的蛋白表達(dá)升高35-37
• 第四章 討論37-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-56
• References50-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文、會議摘要和獎勵56-57
• 致謝57-59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ;Emerging role of Toll-like receptors in the control of pain and itch[J];Neuroscience Bulletin;2012年02期

2 Cynthia KY Cheung;Justin CY Wu;;Genetic polymorphism in pathogenesis of irritable bowel syndrome[J];World Journal of Gastroenterology;2014年47期

  本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體4通過依賴NFκ-B激活胱硫醚β合成酶介導(dǎo)腸易激綜合征大鼠的內(nèi)臟痛敏，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：354715