本文關鍵詞：間歇性低氧對肝細胞脂質代謝的影響及可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的 非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一類除酒精和其他明確因素影響，以肝細胞內脂質過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征[1-2]。近來有文獻報道，睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（sleepuapnea-hypopnea syndrome，SAHS）患者肝細胞內有異常的脂質沉積，認為慢性睡眠呼吸暫停綜合征所致的間歇性低氧（intermenthypoxia，IH）可以誘發(fā)肝細胞脂質異常代謝[3]，目前有關間歇性低氧與肝細胞脂代謝之間的關系鮮見研究報道�；钚匝酰╮eactive oxygenspecies，ROS)、低氧誘導因子（hypoxia inducible factors,HIFs)是調控哺乳動物適應低氧環(huán)境的重要因子，脂肪分化相關蛋白（adiposedifferentiation-related protein，adipophilin ADFP）、固醇調節(jié)原件結合蛋白（sterol regulatory element binding protein, SREBP）-1c、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase, FAS）是調節(jié)肝細胞脂肪酸轉運和合成的關鍵分子。本實驗擬用三氣培養(yǎng)箱、人正常肝細胞（L02）、肝癌細胞（HepG2）建立間歇性低氧細胞模型，探討間歇性低氧對肝細胞脂代謝及相關分子的影響，旨在為治療和預防NAFLD提供新的理論依據(jù)。方法 1、實驗分組：對照組（21%O2）、實驗組（間歇性低氧組） 2、建立間歇性低氧細胞模型：在三氣培養(yǎng)箱中用不同氧濃度（1%02、2%02、3%02、21%02）培養(yǎng)人肝L02細胞和HepG2細胞持續(xù)8h/d，相繼處理1、2、3、4、5、6d，，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化，MTT方法檢測細胞活力，甘油三酯試劑盒測定細胞內甘油三酯含量；油紅O染色觀察肝細胞脂質沉積情況。 3、western-blot方法檢測HIF-1α、HIF-2α、ADFP、SREBP-1c、FAS在肝細胞內的表達。 4、活性氧檢測試劑盒檢測ROS在L02、HepG2細胞內含量的變化。結果第一部分間歇性低氧誘導肝細胞脂質異常沉積 1、低氧濃度的篩選：MTT方法檢測1%02、2%02、3%02、21%02對HepG2、L02細胞存活率的影響，結果示：經(jīng)上述干預，1%02條件下，6d后細胞存活率小于50%，2%02、3%02條件下6d后的細胞存活率約100%，根據(jù)相關參考文獻[19,15]，選擇2%02、3%02進行后續(xù)篩選。 2、間歇性低氧時間點篩選：甘油三酯試劑盒檢測2%02、3%02對肝細胞內TG的影響，結果示：2%02、3%02低氧處理組隨時間延長，各時間點細胞內TG含量逐漸增加，至第5d達高峰；相同對應時間點2%02低氧組肝細胞內TG含量較3%02低氧組明顯升高（L02：78.7±2.73vs56.2±1.73， t=13.92, p0.05; HepG2:96.4±3.67vs88.37±2.36,t=3.68, p0.05），差異有統(tǒng)計學意義，因此選用2%02為最佳低氧濃度，1、2、3、4、5d為低氧處理時間。 3、肝細胞內脂質檢測 （1）隨著時間的延長，對照組肝細胞TG含量無明顯變化（FL02=0.6，P=0.670.05; FHepG2=0.82，P=0.530.05），經(jīng)2%02間歇性低氧干擾后，隨著處理時間的延長TG含量逐漸增多，差異均有統(tǒng)計學意義（FL02=61.83，P0.01；FHepG2=104.19，P0.01）。 （2）油紅O染色：與對照組相比較，經(jīng)間歇性低氧處理后L02和HepG2細胞胞質內橘紅色脂滴隨時間延長增多并出現(xiàn)融合現(xiàn)象。第二部分間歇性低氧對肝細胞脂質代謝影響的可能機制 1、肝細胞內HIF-1α、HIF-2α的蛋白表達變化 經(jīng)2%02持續(xù)干擾8h/d，分別依次處理1、2、3、4、5d后，HIF-1α、HIF-2α在第1d表達量較對照組明顯增多（P0.05），隨著處理時間的延長HIF-1α的表達量逐漸增多（FL02=371.19, FHepG2=150.84,P0.05），HIF-2α的表達卻逐漸下降，至低氧干預第4天低于對照組水平（tL02=3.18, tHepG2=2.54，P0.05）。 2、 L02和HepG2細胞中ROS的變化 實驗組L02和HepG2細胞內的ROS含量較對照組增多（tL02=22.06,tHepG2=7.2, P0.05）并呈時間依賴性增多（FL02=1021.84，F(xiàn)HepG2=49.89，P0.01），差異有統(tǒng)計學意義。 3、肝細胞內SREBP-1c、FAS、ADFP分子的表達 與對照組比較，實驗組第2d，SREBP-1c、FAS和ADFP蛋白表達開始升高（L02:tSREBP-1c=5.83, tFAS=9.84,tADFP=19.99, P0.05;HepG2:tSREBP-1c=8.4,tFAS=9.18, tADFP=5.46,P0.05），隨著時間延長表達量逐漸增多，（FL02,SREBP-1c=204.49, FL02,FAS=38.2, FL02,ADFP=154.31, P0.05;FHepG2,SREBP-1c=107.35, FHepG2,FAS=279.71, FHepG2,ADFP.=352.06, P0.05），差異有統(tǒng)計學意義。結論 1、間歇性低氧可以誘導L02和HepG2細胞發(fā)生脂質異常沉積 2、間歇性低氧誘導產(chǎn)生的ROS可能通過調節(jié)低氧誘導因子和脂肪分化相關蛋白的表達，影響HIF-1α-SREBP-1c-FAS和ADFP途徑導致肝細胞脂代謝異常，HIF-2α可能參與間歇性低氧誘導肝細胞脂變的早期事件。 3、活性氧和低氧誘導因子有可能成為研究非酒精性脂肪性肝病的新靶點。
【關鍵詞】：間歇性低氧 活性氧 肝細胞脂變 低氧誘導因子
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575.5
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-11
• ABSTRACT11-16
• 前言16-18
• 第一部分 間歇性低氧對肝細胞脂質代謝的影響18-29
• 前言18
• 1 材料和方法18-22
• 2 結果22-25
• 3 討論25-26
• 4 小結26-27
• 參考文獻27-29
• 第二部分 間歇低氧對肝細胞脂代謝影響的可能機制29-46
• 前言29-30
• 1 材料和方法30-36
• 2 結果36-41
• 3 討論41-44
• 參考文獻44-46
• 全文總結46-47
• 文獻綜述47-54
• 參考文獻51-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學位期間完成的論文55-56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 高愛濱;肖謙;;PPARα與非酒精性脂肪肝[J];國際消化病雜志;2007年01期

2 曹潔;沈薇;;非酒精性脂肪性肝病與慢性間歇性缺氧研究進展[J];實用肝臟病雜志;2012年04期

3 陳尉華;徐中南;陸倫根;曾民德;劉梅;茅益民;曹愛平;夏春光;房靜遠;;異甘草酸鎂對培養(yǎng)肝細胞增殖影響的實驗研究[J];肝臟;2006年01期

  本文關鍵詞：間歇性低氧對肝細胞脂質代謝的影響及可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：354216