酒精性肝病（Alcoholic liver disease,ALD）是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病。初期通常表現(xiàn)為脂肪肝,進(jìn)而可發(fā)展成酒精性肝炎、肝纖維化和肝硬化。其分子機(jī)制和病理機(jī)制不明,臨床上沒有確切的藥物用于ALD。研究發(fā)現(xiàn)嘌呤能信號（Purinergic signalling）參與肝臟疾病的病理生理調(diào)節(jié)過程。乙醇等外界刺激下,細(xì)胞將胞內(nèi)三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate,ATP）釋放至胞外,提示機(jī)體啟動免疫防御。當(dāng)細(xì)胞應(yīng)激或受損時(shí)ATP釋放至細(xì)胞外,立即被胞外酶CD39（ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase,NTPDase1）水解為一磷酸腺苷（Adenosine Monophosphate,AMP）,而胞外CD73（Ecto-5’-Nucleotidase,NT5E）將AMP水解為腺苷（Adenosine）。腺苷脫氨酶（Adenosine Deaminase,ADA）可水解滅活腺苷。因此,胞外酶CD39-CD73共同調(diào)控腺苷濃度。肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cells,HSCs）... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

ATP-CD39-CD73信號調(diào)節(jié)HSCs炎癥因子分泌及活化增殖的假設(shè)作用機(jī)制示意圖

安徽醫(yī)科大學(xué)博士論文20blotting或免疫組化。（8）二抗溶液：用含有5%伊利脫脂牛奶的TBST溶解，用于封閉，濃度為1:10000或按照使用說明書配制成所需濃度。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1急性酒精性肝損傷小鼠模型制備（1）模型組灌胃酒精溶液：灌胃前臨時(shí)配制，按照以下比例：95%乙醇的體積（ml）=要配乙醇液體積（ml）×0.33。水的量（ml）=擬配制酒精溶液的體積（ml）×0.67。將95%酒精的量與水混合，混勻。如此配制的酒精溶液為31.5%(v/v)。對照組灌胃糊精溶液：灌胃前臨時(shí)配制，按照以下比例：糊精的質(zhì)量（g）=擬配制糊精溶液的體積（ml）×0.45將以上糊精加水溶解，定容至擬配制糊精溶液的體積（ml）。如此配制的酒精溶液為45%(w/v)。灌胃：每只動物按體重計(jì)算，灌胃溶液的體積（μl）=體重（g）×20。注意：灌胃時(shí)，抽取酒精液體飼料（模型組）或糊精溶液之前需要重新?lián)u勻。（2）先適應(yīng)性喂養(yǎng)液體飼料5d，然后給予含5%酒精的液體飼料喂養(yǎng)10d，于第11d小鼠經(jīng)單次灌胃給予5g/kg的酒精，在灌胃后9h分別稱取體重后剖殺采集血液，留取肝臟組織待測。所有小鼠在取血剖殺前均禁食14h。模型制備的流程圖如下：圖2急性酒精性肝損傷小鼠模型制備Fig2Flowchartofmousemodelofacutealcoholicliverinjury

安徽醫(yī)科大學(xué)博士論文242.2.9慢性酒精性肝纖維化小鼠模型制備（1）灌胃用酒精溶液。用于模型組灌胃。灌胃前臨時(shí)配制，按照以下比例：95%乙醇的體積（ml）=要配乙醇液體積（ml）×0.33。水的量（ml）=擬配制酒精溶液的體積（ml）×0.67。將95%酒精的量與水混合，混勻。如此配制的酒精溶液為31.5%(v/v)。（2）灌胃用糊精溶液。用于對照組灌胃。灌胃前臨時(shí)配制，按照以下比例：糊精的質(zhì)量（g）=擬配制糊精溶液的體積（ml）×0.45將以上糊精加水溶解，定容至擬配制糊精溶液的體積（ml）。如此配制的酒精溶液為45%(w/v)。灌胃：每只動物按體重計(jì)算，灌胃溶液的體積（μl）=體重（g）×20。注意：灌胃時(shí)，抽取酒精液體飼料（模型組）或糊精溶液之前需要重新?lián)u勻。（3）參考文獻(xiàn)中的造模方法[44]。簡言之，C57BL/6小鼠液體飼料適應(yīng)5天后，用含5%酒精的液體飼料喂養(yǎng)8w，喂養(yǎng)期間每周給予5g/kg的酒精溶液灌胃2次/w，最后一次酒精灌胃9h后采血，留取肝臟組織待測。模型流程圖如下。圖3慢性酒精性肝纖維化小鼠模型制備Fig3Flowchartofmousemodelofalcoholicliverfibrosis（4）樣本處理

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Morin enhances hepatic Nrf2 expression in a liver fibrosis rat model[J]. Liang Sang,Xue-Mei Wang,Dong-Yang Xu,Li-Xuan Sang,Yang Han,Long-Yang Jiang.  World Journal of Gastroenterology. 2017(47)
[2]Naringenin prevents experimental liver fibrosis by blocking TGFβ-Smad3 and JNK-Smad3 pathways[J]. Erika Hernández-Aquino,Natanael Zarco,Sael Casas-Grajales,Erika Ramos-Tovar,Rosa E Flores-Beltrán,Jonathan Arauz,Mineko Shibayama,Liliana Favari,Víctor Tsutsumi,José Segovia,Pablo Muriel.  World Journal of Gastroenterology. 2017(24)
[3]萱草花總黃酮改善CCl4致大鼠肝纖維化的作用[J]. 沈楠,黃曉東,李治偉,王艷春,齊玲,安英,劉婷婷.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]Effects of tea polyphenols on hepatic fibrosis in rats with alcoholic liver disease[J]. You-Ming Li, Xing-Guo Zhang, Hua-Li Zhou, Shao-Hua Chen, Yu Zhang and Chao-Hui Yu Hangzhou, China Digestive Department, First Affiliated Hospital, Zhe- jiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2004(04)



本文編號：3540168