第一部分NAFLD疾病狀態(tài)下CYP3A表達(dá)與PXR核轉(zhuǎn)位的變化實(shí)驗(yàn)?zāi)康?非酒精性脂肪性肝病對(duì)肝臟的多種藥物代謝酶產(chǎn)生影響,其中CYP3A是主要的代謝酶,孕烷X受體（PXR）參與CYP3A轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié),本實(shí)驗(yàn)中我們闡述NAFLD疾病狀態(tài)下兩者表達(dá)水平的變化,為后續(xù)探討兩者可能存在的相互聯(lián)系打下基礎(chǔ)。材料和方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)我們選擇C57BL/6小鼠,雄性,周齡為7-8周。分別給予正常飲食（SCD）、高脂飲食（HFD）喂養(yǎng),8周后觀察小鼠肝臟的脂肪變性,同時(shí)測(cè)定兩者甘油三脂含量變化。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)我們選擇了人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞,采用棕櫚酸（PA）刺激24h誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝病體外模型,并測(cè)定甘油三酯含量。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白質(zhì)免疫印記（Western Blot）等手段檢測(cè)HFD造模小鼠中CYP3A11的mRNA表達(dá),以及PA造模HepG2細(xì)胞中CYP3A4的mRNA表達(dá),同時(shí)檢測(cè)兩者PXR核轉(zhuǎn)位水平的變化。結(jié)果:HFD造模小鼠肝臟中,檢測(cè)到CYP3A11的mRNA與蛋白表達(dá)水平下降,PA造模HepG2細(xì)胞中,檢測(cè)到CYP3A4的mRNA表達(dá)水平下降,NAFLD造模... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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引言
第一部分 NAFLD疾病狀態(tài)下CYP3A表達(dá)與PXR核轉(zhuǎn)位的變化
    1 材料與方法
        1.1 試劑
        1.2 儀器與耗材
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 NAFLD小鼠造模方案
        2.2 HepG2細(xì)胞培養(yǎng)及NAFLD造模
        2.3 肝臟組織、細(xì)胞樣本油紅染色
        2.4 肝臟組織、細(xì)胞樣本甘油三酯含量測(cè)定
        2.5 組織、細(xì)胞樣本提取總RNA及逆轉(zhuǎn)錄
        2.6 qPCR
        2.7 組織、細(xì)胞樣本提取總蛋白及蛋白定量
        2.8 組織、細(xì)胞樣本提取核蛋白
        2.9 Western blot
        2.10 免疫熒光
        2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    3 結(jié)果
        3.1 NAFLD小鼠模型的構(gòu)建與評(píng)價(jià)
        3.2 NAFLD細(xì)胞模型的構(gòu)建與評(píng)價(jià)
        3.3 CYP3A11表達(dá)在NAFLD動(dòng)物模型中的變化
        3.4 CYP3A4表達(dá)在NAFLD細(xì)胞模型的變化及CYP3A4啟動(dòng)子被轉(zhuǎn)錄激活的變化
        3.5 PXR核轉(zhuǎn)位在HFD造模小鼠及PA造模HepG2細(xì)胞中的變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 敲低及過表達(dá)PXR對(duì)NAFLD造模HepG2細(xì)胞中PXR-CYP3A4轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響
    1 材料與方法
        1.1 試劑
        1.2 儀器和耗材
        1.3 質(zhì)粒信息
        1.4 siRNA序列
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增提取
        2.2 siRNA及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.3 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
    3 結(jié)果
        3.1 敲低PXR對(duì)NAFLD造模HepG2細(xì)胞中PXR-CYP3A4轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響
        3.2 過表達(dá)PXR對(duì)NAFLD造模HepG2細(xì)胞中PXR-CYP3A4轉(zhuǎn)錄活性及表達(dá)的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
不足與展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間所取得的科研成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2016年美國肝病年會(huì)非酒精性脂肪性肝病深度報(bào)道[J]. 趙澤華,范建高.  實(shí)用肝臟病雜志. 2017(01)
[2]What about non-alcoholic fatty liver disease as a new criterion to define metabolic syndrome?[J]. Giovanni Tarantino,Carmine Finelli.  World Journal of Gastroenterology. 2013(22)
[3]非酒精性脂肪肝危險(xiǎn)因素流行病學(xué)論述[J]. 朱方超,黃智銘.  實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2010(18)
[4]有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1的遺傳藥理學(xué)進(jìn)展[J]. 張偉,賀毅憬,周宏灝.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2008(07)



本文編號(hào)：3500616