發(fā)布時(shí)間：2021-11-14 11:09

　　目的：觀察血吸蟲感染對(duì)原代肝星狀細(xì)胞（HSC）向纖維化表型轉(zhuǎn)化的影響。方法：1)建立血吸蟲肝纖維化模型,利用腹部尾蚴敷貼法建立血吸蟲肝纖維化模型,應(yīng)用HE染色和Masson染色方法觀察和鑒定血吸蟲肝纖維化的形成。2)提取原代肝星狀細(xì)胞,應(yīng)用兩步酶消化聯(lián)合非連續(xù)梯度密度離心法分離提取原代HSC3)應(yīng)用免疫熒光方法標(biāo)記α-SMA對(duì)提取的原代HSC進(jìn)行鑒定,并比較正常組與模型組提取的HSC內(nèi)α-SMA表達(dá)量的差別。4)應(yīng)用RT-Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)原代肝星狀細(xì)胞內(nèi)α-SMA和desmin基因轉(zhuǎn)錄水平,并且比較正常組提取的原代肝星狀細(xì)胞與肝纖維化模型組提取的原代肝星狀細(xì)胞之間的差異。5)應(yīng)用免疫印跡（Western blot）方法檢測(cè)原代肝星狀細(xì)胞內(nèi)α-SMA和desmin蛋白表達(dá)水平,并且比較正常組提取的原代肝星狀細(xì)胞與肝纖維化模型組提取的原代肝星狀細(xì)胞之間的差異。同時(shí)利用免疫印跡法比較正常組原代HSC與模型組HSC內(nèi)各種肝纖維化指標(biāo)的變化,以及血吸蟲蟲卵抗原刺激前后HSC內(nèi)各種肝纖維化指標(biāo)的變化。結(jié)果：1)血吸蟲感染小鼠六周后,取小鼠肝臟組織做病理檢測(cè),由HE染色顯示,在感染... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：126 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

正常組與血吸蟲肝損傷模型小鼠肝臟組織的HE染色圖（X200)

3. 1. 3Masson 染色Masson染色后，膠原纖維被染成藍(lán)色，細(xì)胞獎(jiǎng)將會(huì)被染成紅色。由圖2A我們可以看到正常組小鼠的肝臟組織內(nèi)藍(lán)色的膠原纖維少量的圍繞在中央靜脈，動(dòng)脈以及小葉間靜動(dòng)脈周圍，而在肝小葉內(nèi)及肝小葉間未發(fā)現(xiàn)藍(lán)色膠原纖維的沉積。由圖2B我們可以看到在血吸蟲性肝纖維化小鼠的肝臟組織內(nèi)我們可發(fā)現(xiàn)圍繞血吸蟲蟲卵結(jié)節(jié)周圍有大量膠原纖維形成，并且在肝小葉之間也出現(xiàn)大量膠原沉積，同時(shí)肝小葉結(jié)構(gòu)也遭到破壞。見圖2_圓A為正常組小鼠肝臟組織切片 B為血吸蟲性肝纖維化小鼠肝臟組織切片圖2正常組與血吸蟲肝損傷模型小鼠肝臟組織的Masson染色圖（x200)32

光方法進(jìn)行a -SMA的突光染色，眾所周知a -SMA為肝星狀細(xì)胞的標(biāo)記蛋白，通常將其作為鑒定原代肝星狀細(xì)胞的指標(biāo)，由圖3A我們可以看出兩組肝星狀細(xì)胞均表達(dá)a-SMA，但是模型組的HSC的突光表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常對(duì)照組的HSC,說明肝星狀細(xì)胞在血吸蟲感染小鼠體內(nèi)就已經(jīng)被激活并且表達(dá)更多的a-SMA。為了更進(jìn)一步證明所提取的原代細(xì)胞為肝星狀細(xì)胞，我們同時(shí)以腎臟足突狀細(xì)胞(Podocyte)和冠狀動(dòng)脈內(nèi)平滑肌細(xì)胞(SMC)作為確切表達(dá)a -SMA和desmin的陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞，利用Westrn bolt方法鑒定提取的原代細(xì)胞是否同時(shí)表達(dá)a-SMA和desmin進(jìn)一步證實(shí)其為肝星狀細(xì)胞，由圖3B可以看出提取的原代細(xì)胞與足突狀細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞均表達(dá)a-SMA和desmin,因此由圖3可鑒定提取的原代細(xì)胞為肝星狀細(xì)胞。Aa-SMAurnCtrl InKctcdBKDaO-SMA- 42Desmirv rZI ^ 1「八P-actin-Podo SMC HSC圖3不同方法對(duì)原代肝星狀細(xì)胞的鑒定33

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Dynamic changes in the expression of matrix metalloproteinases and their inhibitors,TIMPs,during hepatic fibrosis induced by alcohol in rats[J]. Guang-Fu Xu Department of infectious Diseases,1~(st) Affiliated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Xin-Yue Wang De-Lu Tian Liang-Duo Jiang Jin-Xiang Yang Department of Digestive Diseases,1~(st) Aff’diated Dongzhimen Hospital,Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100700,China Peng-Tao Li Xu Jia Basic Medicine College of Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(24)
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本文編號(hào)：3494530