本文關(guān)鍵詞：酮咯酸氨丁三醇對急性重型肝炎的作用及其相關(guān)機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的： 急性重型肝炎（Acute Fulminant Hepatitis）因具有起病急、病情發(fā)展快且并發(fā)癥多的特點，目前并沒有有效、安全的治療方案。其發(fā)病機制中體內(nèi)單核細胞、T細胞以及巨噬細胞激活，促使IL-1β、TNF-α、內(nèi)毒素等炎癥因子的釋放，引起肝臟大片壞死是非常重要的一環(huán)。近年來，有關(guān)專家發(fā)現(xiàn)刀豆蛋白A（Concanavalin A，ConA）可以很好的模擬急性重型肝炎的過程，為我們進一步研究提供良好基礎(chǔ)。核轉(zhuǎn)錄因子（Nuclear Factor Kappa B，NF-κB）是重要的核轉(zhuǎn)錄因子，與體內(nèi)各種炎癥的產(chǎn)生、腫瘤的發(fā)展均有重要意義。酮咯酸氨丁三醇（Ketorolac Tromethamine）是臨床常用的非甾體抗炎藥，研究證明其抗氧化以及抗炎活性可能與抑制體內(nèi)NF-κB途徑有關(guān)。本研究指在觀察酮咯酸氨丁三醇對ConA誘導的小鼠急性重型肝炎的保護作用，并通過研究其對NF-κB的表達影響，初步探討其作用機制。 方法： 1、將90只Balb/C雄性小鼠分別稱重后，隨機分為三組： 生理鹽水對照組（NC組）：注射與藥物等體積的生理鹽水； ConA模型對照組（ConA組）：經(jīng)尾靜脈以20mg/kg的濃度注射ConA溶液； 藥物處理組（Drug組）：在尾靜脈注射ConA溶液1h內(nèi)經(jīng)腹腔注射酮咯酸氨丁三醇注射液，劑量為2mg/kg。 2、各組小鼠于注射ConA后6h、12h、24h眼球取血后處死。分離血清檢測血清中肝酶以及相關(guān)炎癥因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、INF-γ）的含量。蘇木精-伊紅染色觀察各組肝臟病理變化。選取損傷最為嚴重的12h作為觀察時間點提取RNA，總蛋白等比較Bcl-2，Bax，，NF-κB，IkB-α，IkB-β等相關(guān)蛋白在組織里基因水平和蛋白水平的表達量，進一步檢測NF-κB與細胞內(nèi)源性凋亡之間的關(guān)系，以探索酮咯酸氨丁三醇的保護機制。 結(jié)果： 1、模型組的ALT和AST與對照組相比顯著升高（P0.05），而經(jīng)酮咯酸氨丁三醇進行藥物處理后，兩種酶的指標在三個時點均有一定程度的下降，12h最為明顯（P0.05）；在6h時，模型組與對照組相比出現(xiàn)了輕度充血、水腫以及少量壞死等改變，12h時，大量炎癥因子浸潤，肝臟進一步出現(xiàn)大片壞死，對水腫以及壞死面積的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，藥物處理組均低于模型組（P0.05）；通過ELISA技術(shù)對炎癥因子進行檢測，TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-γ等四種炎癥因子在不同時間點的造模組均呈現(xiàn)出不同程度的升高，與對照組的差異均有統(tǒng)計學意義（P0.05）；TNF-α降低最明顯的發(fā)生在6h內(nèi)，而IL-6、IL-1β和IFN-γ約在12h時效果顯著（P0.05）。 2、通過PCR技術(shù)及Western Blot等對組織中的Bcl-2以及Bax等基因進行檢測。12h時，ConA組Bcl-2的水平明顯低于對照組，而加入酮咯酸氨丁三醇后，抑制凋亡的基因Bcl-2的表達明顯上升，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05），而作為促凋亡的重要因子Bax則與Bcl-2相反；Western Blot技術(shù)以及免疫組化技術(shù)對TNF-α、IL-1β、IL-6、INF-γ四種炎癥因子進行檢測的結(jié)果表明，四種因子在模型組中均有明顯上升，而藥物處理后，與炎癥減輕相伴的炎癥因子的釋放也處于下降狀態(tài)。Western Blot、以及免疫組織化學等技術(shù)對NF-κB中的關(guān)鍵蛋白NF-κB、IκB-α和IκB-β進行了檢測。NF-κB在模型組顯著被上調(diào)，而藥物處理后，NF-κB的蛋白水平均出現(xiàn)下降趨勢，表達量接近正常對照組。IκB-α和IκB-β表達量則表現(xiàn)出與NF-κB相反的趨勢。 結(jié)論： 1、酮咯酸氨丁三醇可有效降低ConA誘導的肝損傷中ALT和AST的血清水平，改善ConA誘導的肝損傷引起的肝臟病理變化以及降低體內(nèi)由于肝損傷引起的炎癥因子的釋放。 2、酮咯酸氨丁三醇可能通過抑制NF-κB途徑降低炎癥因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、INF-γ）的釋放和降低Bax/Bcl-2的比例來減少肝細胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：酮咯酸氨丁三醇 急性重型肝炎 刀豆蛋白 凋亡核轉(zhuǎn)錄因子
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R575.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 中英文縮略語對照表14-15
• 第1章 引言15-16
• 第2章 綜述16-22
• 2.1 重型肝炎模型的建立16-17
• 2.1.1 藥物選用16
• 2.1.2 生物學特性16
• 2.1.3 致肝損傷的研究16-17
• 2.1.4 ConA致肝損傷模型的特點17
• 2.1.5 ConA至肝損傷模型的表現(xiàn)17
• 2.2 重型肝炎的發(fā)病機制與 CONA致肝損傷的共同點17-19
• 2.2.1 ConA致肝損傷與 T 細胞和巨噬細胞的關(guān)系17-18
• 2.2.2 ConA致肝損傷與細胞因子的關(guān)系18
• 2.2.3 ConA致肝損傷與細胞凋亡的關(guān)系18-19
• 2.2.4 ConA致肝損傷的其它機制19
• 2.3 重型肝炎的治療以及酮咯酸氨丁三醇的應用19-21
• 2.3.1 重型肝炎的治療現(xiàn)狀19-20
• 2.3.2 非甾體抗炎藥的作用機制20
• 2.3.3 酮咯酸氨丁三醇的臨床應用20-21
• 2.4 前景與展望21-22
• 第3章 酮咯酸氨丁三醇對 CONA誘導的急性重癥肝炎的保護作用22-33
• 3.1 實驗材料22-23
• 3.1.1 實驗動物22
• 3.1.2 主要試劑及藥物22-23
• 3.1.3 主要試劑配制23
• 3.1.4 主要實驗設(shè)備23
• 3.2 實驗方法23-27
• 3.2.1 分組研究23-24
• 3.2.2 標本獲取及采集24
• 3.2.3 小鼠血清中肝酶（ALT和 AST）水平的測定24
• 3.2.4 小鼠肝臟組織的病理學變化（蘇木精-伊紅 HE染色）24-25
• 3.2.5 酶聯(lián)免疫吸附實驗測定炎癥因子（ELISA 法）25
• 3.2.6 肝臟組織的 RNA 提取測定基因水平炎癥因子表達情況25-26
• 3.2.7 組織 RNA 的逆轉(zhuǎn)錄26
• 3.2.8 實時定量 PCR測定相關(guān)炎癥因子基因轉(zhuǎn)錄情況26-27
• 3.2.9 統(tǒng)計方法27
• 3.3 結(jié)果27-30
• 3.3.1 酮咯酸氨丁三醇對 ConA誘導的急性重癥肝炎模型中肝功能的影響27-28
• 3.3.2 酮咯酸氨丁三醇對 ConA誘導的急性重癥肝炎模型中病理改變的影響28-29
• 3.3.3 酮咯酸氨丁三醇對 ConA誘導的急性重癥肝炎模型血清中炎癥因子釋放的影響29-30
• 3.3.4 酮咯酸氨丁三醇對 ConA誘導的急性重癥肝炎模型組織中炎癥因子基因轉(zhuǎn)錄水平的影響30
• 3.4 討論30-32
• 3.5 結(jié)論32-33
• 第4章 酮咯酸氨丁三醇對實驗性急性重型肝炎保護作用的機制研究33-46
• 4.1 實驗材料33-35
• 4.1.1 實驗試劑33-35
• 4.1.2 實驗設(shè)備35
• 4.1.3 主要試劑配制35
• 4.2 實驗方法35-39
• 4.2.1 Western Blot 技術(shù)檢測蛋白表達量35-38
• 4.2.2 免疫組織化學染色38-39
• 4.2.3 動物 RNA 提取及實時定量 PCR技術(shù)39
• 4.3 實驗結(jié)果39-43
• 4.3.1 酮咯酸氨丁三醇可在基因表達水平保護肝細胞避免發(fā)生內(nèi)源性凋亡39-40
• 4.3.2 酮咯酸氨丁三醇可在蛋白表達水平保護肝細胞避免發(fā)生內(nèi)源性凋亡40-41
• 4.3.3 酮咯酸氨丁三醇減輕內(nèi)源性凋亡的調(diào)控機制41-42
• 4.3.4 酮咯酸氨丁三醇通過抑制體內(nèi) NF-κB途徑減輕由炎癥因子釋放引起的內(nèi)源性凋亡42-43
• 4.4 討論43-45
• 4.5 結(jié)論45-46
• 第5章 總結(jié)與展望46-47
• 參考文獻47-57
• 作者簡介57-58
• 后記和致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姚曉敏;李宏偉;曲均革;崔相一;;刀豆蛋白A引起小鼠免疫性肝損傷機制研究[J];蚌埠醫(yī)學院學報;2011年05期

2 譚友文;吳建成;;刀豆蛋白A誘導小鼠肝纖維化動物模型的建立[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

3 李小剛,王天才,武忠弼,周開敏,唐望先,李紹白;刀豆蛋白A誘導急性肝損傷的病理學觀察[J];臨床與實驗病理學雜志;1998年05期

4 馬雪蓮,李躍華,高建新,吳翠貞;刀豆蛋白A誘導的肝損傷中核因子-κB對誘導型一氧化氮合酶表達的調(diào)控及其意義[J];山東大學學報(醫(yī)學版);2005年02期

5 賀菊萍;潘迎捷;趙勇;孫曉紅;陸冉冉;朱閏月;;牛蒡提取物對刀豆蛋白A誘導肝損傷小鼠的保護作用[J];食品工業(yè)科技;2013年09期

6 鄧利娟;李湛軍;羅楹;范慧紅;;Caspase抑制劑F1013對刀豆蛋白A誘導小鼠急性肝損傷的治療作用[J];中國藥理學通報;2012年01期

7 譚友文;吳建成;;刀豆蛋白A誘導急性肝損傷的模型建立[J];江蘇醫(yī)藥;2009年06期

8 陳麗華;肖新宇;李子博;程楊艷;;姜黃素保護刀豆蛋白A誘導的小鼠肝損傷作用的研究[J];中國臨床藥理學與治療學;2010年09期

9 陳麗;譚友文;葉云;孫莉;;刀豆蛋白A誘導小鼠肝纖維化動物模型的建立及機制探討[J];肝臟;2012年04期

10 劉光偉;王靈臺;高月求;王春芳;;刀豆蛋白A誘導的肝損傷模型T細胞亞群變化及機制探討[J];中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志;2008年05期

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