目的探討羥氯喹（HCQ）在化療藥物誘導(dǎo)的腸炎中的治療作用及其可能的分子機制。方法 30只C57B6/J小鼠隨機分為0、 1、 3、 5、 7 d組,第1～3天腹腔注射氟尿嘧啶（5-FU）200μL/d（50 mg/kg）,分別于第0、 1、 3、 5、 7天處死,雙鏈DNA（dsDNA）定量試劑盒檢測血清及小腸液dsDNA水平,腹瀉評分評估小鼠腸炎病情。體外培養(yǎng)HCT-116細(xì)胞,分別以（0、 0.01、 0.1、 0.5、 1、 10）μmol/L 5-FU處理72 h或1μmol/L 5-FU處理24、 48、 72 h,dsDNA定量試劑盒檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清dsDNA水平。24只C57B6/J小鼠隨機分為:對照組（腹腔注射并灌胃生理鹽水200μL/d）、模型組（腹腔注射50 mg/kg 5-FU 200μL/d、灌胃生理鹽水200μL/d）、 HCQ治療組（腹腔注射50 mg/kg 5-FU 200μL/d前一天起灌胃60 mg/kg HCQ溶液200μL/d）、 HCQ單藥組（灌胃60 mg/kg HCQ溶液200μL/d）,處理6 d處死小鼠。HE染色觀察小腸病變,原位末端... 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

HCQ通過抑制TLR9-NF-κB通路減少炎癥因子產(chǎn)生

本實驗首先成功建立了5-FU誘導(dǎo)的腸炎模型: HE染色顯示: 與對照組相比, 模型組小鼠小腸絨毛出現(xiàn)了嚴(yán)重的損失和破壞, 絨毛縮短, 隱窩變淺(圖1A)。TUNEL染色同樣顯示5-FU導(dǎo)致小鼠小腸上皮細(xì)胞的大量凋亡(圖1B)。5-FU作為一種細(xì)胞毒藥物, 主要通過干擾DNA 的合成發(fā)揮藥理作用。5-FU誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后會釋放大量dsDNA, 因此我們推測dsDNA可能與5-FU導(dǎo)致的腸炎有關(guān)。結(jié)果顯示: 在給藥實驗中, 小鼠血清及腹腔中dsDNA隨5-FU給藥呈同步動態(tài)變化趨勢(圖1C), 與小鼠腹瀉評分動態(tài)變化趨勢一致(圖1D), 證實5-FU導(dǎo)致的腸炎與dsDNA 存在相關(guān)性。在體外實驗中, 我們選取HCT-116細(xì)胞系模擬小鼠腸上皮細(xì)胞, 在不同濃度及不同時間的5-FU干預(yù)下檢測dsDNA 的濃度。結(jié)果顯示dsDNA水平隨5-FU給藥濃度與給藥時間的變化而變化(圖1E、 F)。因此, 上述結(jié)果初步說明dsDNA與5-FU誘導(dǎo)的腸炎可能具有相關(guān)性, 我們推測dsDNA作為一種DAMP介導(dǎo)5-FU誘導(dǎo)的腸炎。2.2 HCQ通過抑制TLR9-NF-κB通路減少炎癥因子的產(chǎn)生

上述實驗從體外實驗證明HCQ通過抑制TLR9-NF-κB通路減少炎癥。接下來, 我們從體內(nèi)實驗分析了HCQ對小鼠腸炎及其TLR9-NF-κB通路的影響。HE染色顯示, HCQ明顯減輕5-FU導(dǎo)致的小鼠小腸上皮的破壞(圖3A)。免疫熒光染色顯示, HCQ同樣降低小鼠小腸中TLR9、 NF-κB的水平(圖3B、 C); ELISA結(jié)果顯示HCQ明顯降低小鼠血清內(nèi)炎癥因子IL-1β水平(圖3D)。上述結(jié)果在體內(nèi)證明了HCQ通過抑制TLR9-NF-κB通路減少5-FU誘導(dǎo)的腸炎。3 討論


本文編號：3446263