乙型肝炎肝硬化患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
發(fā)布時(shí)間:2021-10-07 19:18
骨髓中主要包含造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells,HSCs),間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)和血管內(nèi)皮前體細(xì)胞,近年研究表明還包含其它干細(xì)胞群,如生肌多能成體祖細(xì)胞(Multipotent adultprogenitor cells,MACP)。可以從不同組織分離的得到具有相似的生物學(xué)特性的間充質(zhì)干細(xì)胞,包括脂肪組織,骨骼肌,胎兒肝臟和胰腺,臍血和羊水等。在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下MSCs具有自我更新和多向分化潛能,如:成骨細(xì)胞,心肌細(xì)胞,脂肪細(xì)胞,少突膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞等。同時(shí)MSCs具有抗增殖、抗炎活性、低免疫反應(yīng)等特性,使其可以安全用于自體或異體移植,MSCs容易轉(zhuǎn)染和易于冷凍保存。骨髓MSCs在細(xì)胞和組織工程中發(fā)揮重要作用,近年來在基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐骨髓來源的MSCs已引起人們極大的興趣。乙型肝炎是全世界最常見的傳染病之一。全世界大約有3.5億慢性乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者。乙型肝炎的治療是非常有限的,而且HBV感染可能會(huì)導(dǎo)致肝硬化和肝癌。慢性肝損傷,肝細(xì)胞的再生能力喪失,從而導(dǎo)致肝臟無(wú)法維持其功能,這就是臨床上所謂的...
【文章來源】:吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:98 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
前言
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第1章 緒論
第2章 文獻(xiàn)綜述
2.1 用于治療肝臟疾病的干細(xì)胞來源
2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性
2.2.1 MSCs 的歷史和特點(diǎn)
2.2.2 MSCs 的來源
2.2.3 骨髓 MSCs 的體外分離和純化
2.2.4 MSCs 的體外擴(kuò)增培養(yǎng)
2.2.5 MSCs 的表型特征
2.2.6 MSCs 的可塑性
2.3 MSCs 分化為肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
2.3.1 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞
2.3.2 MSCs 在體內(nèi)分化為肝細(xì)胞
2.4 MSCs 移植治療肝臟疾病
2.4.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果
2.4.2 臨床研究結(jié)果
2.5 MSCs 治療肝臟疾病的可能機(jī)制
2.6 MSCs 移植可能存在的問題和應(yīng)用前景展望
第3章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究
3.1 材料和方法
3.2 方法
3.2.1 肝硬化患者和健康供者骨髓 MSCs 的分離和培養(yǎng)
3.2.2 骨髓 MSCs 的形態(tài)觀察
3.2.3 骨髓 MSCs 的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
3.2.4 骨髓 MSCs 的體外定向誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞及鑒定
3.2.5 骨髓 MSCs 體外定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞及鑒定
3.2.6 骨髓MSCs 的體外定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞及鑒定
3.2.7 骨髓 MSCs 的細(xì)胞表型測(cè)定
3.2.8 骨髓 MSCs 的細(xì)胞周期測(cè)定
3.2.9 免疫組化法檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表達(dá)
3.2.10 熒光定量 PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBVDNA
3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3.3 結(jié)果
3.3.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 增殖受損
3.3.2 骨髓 MSCs 的表型特征
3.3.3 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞
3.3.4 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞
3.3.5 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞
3.3.6 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 檢測(cè)
3.4 討論
第4章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓MSCs分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
4.1 材料和方法
4.1.1 主要儀器
4.1.2 主要試劑
4.2 方法
4.2.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 的體外分離培養(yǎng)
4.2.2 肝細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)肝硬化患者骨髓 MSCs
4.2.3 肝硬化患者自體血清誘導(dǎo)骨髓 MSCs
4.2.4 免疫組化法檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表達(dá)
4.2.5 熒光定量 PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBVDNA
4.2.6 RT-PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs ALB mRNA 的表達(dá)
4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4.3 結(jié)果
4.3.1 肝細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)肝硬化患者骨髓 MSCs 分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞
4.3.2 骨髓 MSCs 具有糖原合成功能
4.3.3 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB mRNA
4.4 肝硬化患者自體血清誘導(dǎo)骨髓 MSCs 分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞
4.4.1 肝硬化患者血清 HBVDNA 和生化檢測(cè)結(jié)果
4.4.2 骨髓 MSCs 形態(tài)變化
4.4.3 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 檢測(cè)結(jié)果
4.4.4 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB, CK-18 和 AFP
4.4.5 骨髓 MSCs 的糖原合成功能
4.4.6 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB mRNA
4.5 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新點(diǎn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J]. 王瑩,趙洪昌,趙文靜,葉冬霞,李晶,羅速. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(49)
[2]肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白和白蛋白[J]. 張淑芹,葉東霞,劉淑榮. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(27)
[3]體外定向誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J]. 孫偉,胡亮,趙興,李官成,付炳方,潘頌華. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(07)
[4]心肌梗死大鼠血清對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的影響(英文)[J]. 劉建華,洪亮,鐘雪云,陳嘉榆,陳運(yùn)賢. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(14)
[5]酒精性肝硬化患者血清誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞[J]. 趙文靜,牛鳳蘭,劉淑榮,劉薇. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(06)
[6]損傷肝組織勻漿誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞甲胎蛋白和白蛋白的表達(dá)[J]. 趙文靜,方艷秋,齊亞靈,劉婷,牛鳳蘭,譚巖. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(06)
[7]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化特征[J]. 胡資兵,曾榮,郭偉韜,林顥. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(43)
[8]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中神經(jīng)生長(zhǎng)因子及受體的表達(dá)[J]. 王相利,宓寶杰,王海立. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(33)
[9]鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化[J]. 牛云,何旭,王心蕊,馬英智,李玉林. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2007(04)
[10]體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 魯學(xué)恒,馬力,劉沛. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(03)
本文編號(hào):3422621
【文章來源】:吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】:98 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
前言
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第1章 緒論
第2章 文獻(xiàn)綜述
2.1 用于治療肝臟疾病的干細(xì)胞來源
2.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性
2.2.1 MSCs 的歷史和特點(diǎn)
2.2.2 MSCs 的來源
2.2.3 骨髓 MSCs 的體外分離和純化
2.2.4 MSCs 的體外擴(kuò)增培養(yǎng)
2.2.5 MSCs 的表型特征
2.2.6 MSCs 的可塑性
2.3 MSCs 分化為肝細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
2.3.1 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞
2.3.2 MSCs 在體內(nèi)分化為肝細(xì)胞
2.4 MSCs 移植治療肝臟疾病
2.4.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果
2.4.2 臨床研究結(jié)果
2.5 MSCs 治療肝臟疾病的可能機(jī)制
2.6 MSCs 移植可能存在的問題和應(yīng)用前景展望
第3章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性研究
3.1 材料和方法
3.2 方法
3.2.1 肝硬化患者和健康供者骨髓 MSCs 的分離和培養(yǎng)
3.2.2 骨髓 MSCs 的形態(tài)觀察
3.2.3 骨髓 MSCs 的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
3.2.4 骨髓 MSCs 的體外定向誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞及鑒定
3.2.5 骨髓 MSCs 體外定向誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞及鑒定
3.2.6 骨髓MSCs 的體外定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞及鑒定
3.2.7 骨髓 MSCs 的細(xì)胞表型測(cè)定
3.2.8 骨髓 MSCs 的細(xì)胞周期測(cè)定
3.2.9 免疫組化法檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表達(dá)
3.2.10 熒光定量 PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBVDNA
3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3.3 結(jié)果
3.3.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 增殖受損
3.3.2 骨髓 MSCs 的表型特征
3.3.3 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞
3.3.4 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞
3.3.5 骨髓 MSCs 體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞
3.3.6 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 檢測(cè)
3.4 討論
第4章 乙型肝炎肝硬化患者骨髓MSCs分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究
4.1 材料和方法
4.1.1 主要儀器
4.1.2 主要試劑
4.2 方法
4.2.1 肝硬化患者骨髓 MSCs 的體外分離培養(yǎng)
4.2.2 肝細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)肝硬化患者骨髓 MSCs
4.2.3 肝硬化患者自體血清誘導(dǎo)骨髓 MSCs
4.2.4 免疫組化法檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 表達(dá)
4.2.5 熒光定量 PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs 的 HBVDNA
4.2.6 RT-PCR 檢測(cè)骨髓 MSCs ALB mRNA 的表達(dá)
4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4.3 結(jié)果
4.3.1 肝細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)肝硬化患者骨髓 MSCs 分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞
4.3.2 骨髓 MSCs 具有糖原合成功能
4.3.3 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB mRNA
4.4 肝硬化患者自體血清誘導(dǎo)骨髓 MSCs 分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞
4.4.1 肝硬化患者血清 HBVDNA 和生化檢測(cè)結(jié)果
4.4.2 骨髓 MSCs 形態(tài)變化
4.4.3 骨髓 MSCs 的 HBsAg、HBcAg 染色和 HBVDNA 檢測(cè)結(jié)果
4.4.4 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB, CK-18 和 AFP
4.4.5 骨髓 MSCs 的糖原合成功能
4.4.6 骨髓 MSCs 表達(dá) ALB mRNA
4.5 討論
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
創(chuàng)新點(diǎn)
作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J]. 王瑩,趙洪昌,趙文靜,葉冬霞,李晶,羅速. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(49)
[2]肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)甲胎蛋白和白蛋白[J]. 張淑芹,葉東霞,劉淑榮. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2010(27)
[3]體外定向誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞[J]. 孫偉,胡亮,趙興,李官成,付炳方,潘頌華. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(07)
[4]心肌梗死大鼠血清對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞的影響(英文)[J]. 劉建華,洪亮,鐘雪云,陳嘉榆,陳運(yùn)賢. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(14)
[5]酒精性肝硬化患者血清誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞[J]. 趙文靜,牛鳳蘭,劉淑榮,劉薇. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2009(06)
[6]損傷肝組織勻漿誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞甲胎蛋白和白蛋白的表達(dá)[J]. 趙文靜,方艷秋,齊亞靈,劉婷,牛鳳蘭,譚巖. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2008(06)
[7]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化特征[J]. 胡資兵,曾榮,郭偉韜,林顥. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(43)
[8]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程中神經(jīng)生長(zhǎng)因子及受體的表達(dá)[J]. 王相利,宓寶杰,王海立. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(33)
[9]鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞上清液誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化[J]. 牛云,何旭,王心蕊,馬英智,李玉林. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2007(04)
[10]體外誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 魯學(xué)恒,馬力,劉沛. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(03)
本文編號(hào):3422621
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/xiaohjib/3422621.html
最近更新
教材專著