目的： 了解胎肝干細胞在體內(nèi)外是否具有向神經(jīng)組織細胞分化的潛能，即可塑性，以進一步探索其分化規(guī)律；建立胎肝來源的細胞在體外向神經(jīng)組織細胞分化模型。 擬從下面三個方面研究：小鼠胎肝Sca-1⁺細胞在體內(nèi)向神經(jīng)組織細胞分化研究；體外誘導小鼠胎肝Sca-1⁺細胞向神經(jīng)組織細胞分化研究；體外誘導人胎肝CD34⁺細胞向神經(jīng)組織細胞分化研究。 材料方法： 1．觀察小鼠胎肝Sca-1⁺細胞移植后在受體鼠腦組織中的分化情況 利用快速的PCR擴增小鼠Y染色體特異的性別決定區(qū)蛋白基因（sex determing region protein,Sry）方法鑒定孕14.5d C57BL／6J胎鼠性別（總時間小于3.5h），免疫磁珠法分離雄性胎鼠肝的Sca-1⁺細胞，尾靜脈注射Sca-1⁺細胞（2.0×10³個／小鼠）到致死劑量（10.0Gy）放射線照射的8-10周C57BL／6J雌性小鼠（輻射后4h內(nèi)注射），然后將實驗小鼠飼養(yǎng)在... 

【文章來源】：暨南大學廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠胚胎性別的鑒定A.M為DNA標準分子量，1OObpladderDNAmarkers，1為空白對照(無DNA模

0dsd10d15d20d60d120dtimeaftertransplantation(day)andmale口ale圖2.胎肝Sca一1十細胞向造血細胞分化0d為雌性對照外周血DNA，大小與預計擴增工L一3基因片段一致(649bP)，無sry基因擴增。male照外周血DNA，產(chǎn)物DNA為2條帶，大小與預計擴增Sry和工L一3基因(444bp、649bp)，sd、10d、15d、20d、60d、120d分別為移植雄性Sea一1‘10、15、20、60、120天后受體雌鼠外周血DNA擴增產(chǎn)物，Sry基因產(chǎn)物致的延長時間而增加，說明雄性胚胎供體來源的細胞在增加。FigureZ，DifferentiationoffetalliverSea一l十eellsintohematopoietiQuantitativeresultsofeleetrophoresis一bandsfromsrygeneProduetsofPgel一imagesystem.‘od’15PCRProductofbloodDNAfromadultfemalemoubandthesize15eonsisteniwithexPectedIL一3gene(649bp).‘Male’15PCRProbloodDNAfromadultmalemouse，twobandstheirsizesareeonsistentwithesrygene(444bp)andIL一3gene(649bp).‘sd，，‘IOd，，‘15d，‘6Od’，and‘120d’arePCRProduetsofbloodDNAfromadultfemalemo10，15，20，60，12od叮5aftertransplantedwithmaleSca一1十cells，respeetiveheightofbarsinereasedwithtimelengthened，andreaehednormallevelofadultwomonths，indieatingthatmalefetalliver-derivedcellsareincreasinhematoPoietiereconstitution.

ficat‘on’oxZo)}B(magn，ficat‘on‘oXZo)圖4.免疫組化和FISH檢測胚胎肝來源細胞在受體小鼠腦組織內(nèi)分化:小鼠Y染色體FISH顯示雌性受體小鼠腦組織中存在特異cy3紅色熒光雜交信號(A，B)，說明有供體來源的細胞:NetlN免疫組化顯示部分供體來源的細胞NeuN陽性(A，實箭頭所示)(因為NeuN特異表達于神經(jīng)元核內(nèi)，所以沒有用DAPI染色細胞核);GFAP免疫組化顯示部分供體來源的細胞GEAP陽性(B，實箭頭所示)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]神經(jīng)干細胞研究進展[J]. 劉泉開.  現(xiàn)代診斷與治療. 2000(05)



本文編號：3417187