本文關(guān)鍵詞：HLA-DRB1等位基因多態(tài)性與幽門(mén)螺桿菌感染及胃部疾病的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori，H. pylori）是一種定植于人的胃粘膜的微需氧、螺旋狀的革蘭陰性桿菌。H. pylori感染普遍存在，已造成全球50%以上的人口感染，尤其在中國(guó)等發(fā)展中國(guó)家，感染率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國(guó)家。盡管H. pylori感染率很高，但只有大約10-20%感染者出現(xiàn)臨床疾病狀態(tài)。H. pylori長(zhǎng)期持續(xù)性感染可導(dǎo)致慢性胃炎、胃潰瘍及胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤等胃部疾病，且與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，已被世界衛(wèi)生組織（WHO）列位1類致癌因子。 胃炎等胃腸道疾病的發(fā)生除了與H. pylori感染有關(guān)外，還受到宿主遺傳、環(huán)境等因素的影響。宿主遺傳因素與胃炎等胃腸疾病發(fā)生相關(guān)性主要體現(xiàn)在與免疫反應(yīng)相關(guān)的免疫遺傳因素，尤其是主要組織相容性復(fù)合體（MHC）系統(tǒng)。MHC系統(tǒng)編碼的人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）是由一系列緊密連鎖的基因座位所組成的具有高度多態(tài)性的復(fù)合體，是目前所知最具復(fù)雜的基因系統(tǒng)并且在免疫反應(yīng)中起重要的作用。HLA具有單倍體遺傳、連鎖不平衡（LD）等遺傳特征，，還具有抗原遞呈和等位基因多態(tài)性的特點(diǎn)，因此HLA被認(rèn)為與疾病的發(fā)生密切相關(guān)。 HLA主要包括Ⅰ和Ⅱ兩類分子，分別介導(dǎo)CD8~+和CD4~+T淋巴細(xì)胞應(yīng)答，發(fā)揮不同的免疫作用。其中Ⅱ類分子等位基因的多態(tài)性與H. pylori感染和胃部疾病發(fā)生存在一定相關(guān)性，已有文獻(xiàn)報(bào)道。但由于不同的民族、不同的地區(qū)甚至研究者運(yùn)用研究方法的不同，所得到的研究結(jié)果存在差異。目前，對(duì)于HLA進(jìn)行的基因分型主要依據(jù)PCR反應(yīng)為基礎(chǔ)的分型方法，如PCR-RFLP、PCR-SSOP、PCR-SBT、PCR-SSP、PCR-SSCP。然而這些分型方法都存在著各自的局限性，費(fèi)用卻比較昂貴,其中PCR-SBT的分型方法被公認(rèn)為是最直接，最準(zhǔn)確的分型方法。 因此，本課題基于PCR-SBT方法的原理，運(yùn)用自行設(shè)計(jì)的特異PCR引物首先建立了PCR-SBT基因分型方法，分析重慶地區(qū)漢族人群HLA-DRB1等位基因分布特點(diǎn)與多態(tài)性，探討HLA-DRB1等位基因多態(tài)性與H. pylori感染以及感染后胃部疾病發(fā)生與類型的相關(guān)性。通過(guò)上述研究，為深入揭示H. pylori感染不同個(gè)體后多種類型疾病發(fā)生的免疫遺傳學(xué)機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 目的 本研究通過(guò)建立HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法，對(duì)中國(guó)重慶地區(qū)漢族人群進(jìn)行HLA-DRB1等位基因分型，揭示HLA-DRB1基因多態(tài)性及其分布特點(diǎn)；闡明HLA-DRB1等位基因與H. pylori感染及胃部疾病發(fā)生的的相關(guān)性。 方法 1.外周靜脈血基因組DNA的提取。運(yùn)用血液基因組提取試劑盒提取血液基因組DNA，-20℃保存，用于后續(xù)PCR。 2. HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法的建立。根據(jù)IMGT/HLA數(shù)據(jù)庫(kù)中HLA-DRB1第二外顯子的基因序列，針對(duì)不同亞型第二外顯子的堿基序列差異，采用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)出八條正向引物和一條反向引物，并由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成(HPLC純度)。將擴(kuò)增的目的條帶回收進(jìn)行DNA測(cè)序。運(yùn)用Chromas和Genetool軟件分析和拼接測(cè)序結(jié)果，并在IMGT/HLA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，以確定其亞型。 3. H. pylori感染檢測(cè)。采用ELISA方法檢測(cè)血清中抗H. pylori特異性IgG抗體，以分析與判斷H. pylori感染情況 4.數(shù)據(jù)分析。運(yùn)用PCR-SBT的方法對(duì)所采集的樣本進(jìn)行HLA-DRB1等位基因分型，組間比較采用卡方（χ~2）檢驗(yàn)，OR值和95%的置信區(qū)間用于患病風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)價(jià)。 結(jié)果 1.重慶地區(qū)H. pylori感染率為34.2%。 2. HLA-DRB1*09:01(29.1%)等位基因頻率最高，基因頻率最低的是DRB1*12:01、DRB1*12:02、DRB1*14:05和DRB1*15:02，各占1.26%。 3. HLA-DRB1等位基因型頻率在男女之間無(wú)顯著性差異。 4. HLA-DRB1*04:05等位基因與H. pylori感染呈負(fù)關(guān)聯(lián)（P=0.035、OR=0.265、95%CI=0.076-0.922）。 5. HLA-DRB1*15:01等位基因與胃癌或胃炎發(fā)生呈負(fù)關(guān)聯(lián)（胃癌患者與正常比較，P=0.039、OR=0.287、95%CI=0.091-0.905；胃炎患者與正常比較，P=0.001、OR=0.061、95%CI=0.007-0.494）。 結(jié)論 1.成功建立并優(yōu)化了HLA-DRB1的PCR-SBT基因分型方法;重慶地區(qū)漢族人群HLA-DRB1等位基因呈現(xiàn)多態(tài)性，為免疫遺傳因素和疾病的相關(guān)性研究提供了可靠的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。 2. HLA-DRB1*04:05是宿主抵御H. pylori感染的抵抗基因。 3. HLA-DRB1*15:01是胃癌或胃炎的抵抗基因。
【關(guān)鍵詞】：幽門(mén)螺桿菌 胃炎 胃癌 人類白細(xì)胞抗原 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-基于直接測(cè)序的分型方法 基因多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R573
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)一覽表4-6
• Abstract6-9
• 摘要9-12
• 前言12-16
• 研究技術(shù)路線15-16
• 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-32
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-42
• 討論42-46
• 全文總結(jié)46-47
• 本研究的創(chuàng)新、不足和展望47-48
• 致謝48-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 附圖55-64
• 文獻(xiàn)綜述 HLA基因多態(tài)性與幽門(mén)螺桿菌感染及其致病的相關(guān)關(guān)系64-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 在讀期間發(fā)表的論文72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：340516