發(fā)布時間：2021-09-12 18:12

　　[背景]乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染人體誘導(dǎo)急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及肝硬化、肝纖維化和肝細(xì)胞癌,仍然是世界上最嚴(yán)重的公共健康問題之一。我國每年新發(fā)乙肝感染者仍有百萬之巨,而現(xiàn)有乙肝治療藥物如核苷酸類似物、干擾素等,不能完全清除病毒,尋找新的乙肝病毒抑制劑或相關(guān)分子靶點(diǎn)顯得十分迫切。三重基序蛋白（Tripartite motif protein,TRIM）家族成員TRIM21具有E3泛素連接酶活性,參與多種細(xì)胞生理功能,在病毒感染過程中發(fā)揮正向調(diào)控干擾素通路抗病毒和負(fù)向調(diào)控干擾素通路促進(jìn)病毒復(fù)制的雙重功能。有報道顯示TRIM21通過其胞漿IgFc受體功能間接抑制HBV復(fù)制,但仍不清楚TRIM21是否具有直接抑制HBV復(fù)制的功能。[目的]探究TRIM21在肝細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制過程中發(fā)揮的作用及其分子機(jī)制。[方法]1.HBV感染肝細(xì)胞模型:以1μg pUC19-HBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系Huh7和HepG2,48 h后逆轉(zhuǎn)錄定量PCR檢測HBV復(fù)制中間體HBV RNA、ELISA檢測上清包膜蛋白s抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）證實(shí)感染。2.建... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１?ＨＢＶ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Ｈｕｈ７細(xì)胞建立體外ＨＢＶ細(xì)胞模型??

第一部分?Ｅ３泛素連接酶ＴＲ１Ｍ２１抗乙型肝炎病毒復(fù)制的作用及分子機(jī)制??２４?ｈ和４８?ｈ均誘導(dǎo)ＴＲＩＭ２１在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的顯著上調(diào)表達(dá)（圖３．２?Ａ－??Ｂ）?〇??Ａ?Ｂ??ＴＲＩＭ２１??｜?２＿〇ｉ?鬥＂？。?ＴＲＩＭ２１??〇）?丁?＊?ＣＺＤ?ｐＵＣ１９??＜???■?ｐＨＢＶ?２４ｈ?４８ｈ??｜?１＇５＂?■?＿?ｐＵＣ１９?ｐＨＢＶ?ｐＵＣ１９?ｐＨＢＶ??Ｉ?１，°＂?Ｉ?ＴＲＩＭ２１??ｏ?０．５－?■?■?：：＞二一、：?Ｉ、??＾?ＪＩＦ?ＭＰ－?ｈ——Ｎ??圖３．２?ＨＢＶ感染肝癌細(xì)胞Ｈｕｈ７顯著上調(diào)ＴＲＩＭ２１的表達(dá)??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?ＨＢＶ?ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ?ＴＲＩＭ２１?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｈｅｐａｔｏｍａ?ｃｅｌｌ?Ｈｕｈ７．?Ｈｕｈ７?ｃｅｌｌ?ｗａｓ??ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｐＵＣ１９－ＨＢＶ１．３?ｏｒ?ｐＵＣ１９．?（Ａ）?２４?ｈ?ｏｒ?４８?ｈ?ｌａｔｅｒ，?ｔｈｅ?ｍＲＮＡ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ??ＴＲＩＭ２１?ｗａｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ｑＲＴ－ＰＣＲ．?（Ｂ）?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＴＲＩＭ２１?ｗａｓ?ｅｖａｌｕａｔｅｄ?ｂｙ??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ａｒｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｓ?ｍｅａｎ?土?ＳＥＭ?ｏｆ?ｔｈｒｅｅ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．??（＊ｐ＜０．０５）．??綜上，通過轉(zhuǎn)染編碼ＨＢＶ?ＤＮＡ全長基因的質(zhì)粒進(jìn)入肝細(xì)胞，可支持ＨＢＶ完成??整個復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)過程，產(chǎn)生ＨＢＶＲＮＡ并誘導(dǎo)ＨＢｅＡｇ、ＨＢｓＡｇ的分泌。這

Ｅ３泛素連接酶ＴＲ１Ｍ２丨抗乙型肝炎病毒復(fù)制的作用及分子機(jī)制?第一部分??取轉(zhuǎn)染２４?ｈ、４８?ｈ的細(xì)胞培養(yǎng)上清，ＥＬＩＳＡ檢測上清中病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）和ｓ??抗原（ＨＢｓＡｇ）含量，結(jié)果顯示過表達(dá)ＴＲＩＭ２１的肝細(xì)胞上清中ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ??水平顯著下降，降幅接近６０％?（圖３．３．１?Ｃ）。??Ａ?Ｂ??ＨＢＶ?ＲＮＡ??ＴＲＩＭ２１?－３?８０００°１?□?Ｖｅｃｔｏｒ??２４ｈ?４８ｈ?１?ｍ?ＴＲＩＭ２１????＜?６００００－?丁??Ｖｅｃｔｏｒ?ＴＲＩＭ２１?Ｖｅｃｔｏｒ?ＴＲＩＭ２１?ｉ?Ｈ＂??＾?４００００－??ｔｒｉｍ２ｉ?ｍｍｍ?ｍＫｍ?工????｜?２００００－?—１Ｌ?ＪＬ??ＡＣＴＩＮ?Ｊ?Ｈ??２４ｈ?４８ｈ??ｃ??ＨＢｅＡｇ?ＨＢｓＡｇ??３＿〇１?□?Ｖｅｃｔｏｒ?４．５＂｜?□?Ｖｅｃｔｏｒ??？?ｇ?２?５－?二１１?■?ＴＲＩＭ２１?？?ｇ?＾?ｍ?ＴＲＩＭ２１??ｐｌ?－２?Ｓ?——??？〇?２．０－?３．０－?ｆ＊ｌ??＜Ｓ＾１５．?＿?－??工？〇?ｕ?工?Ｔ３??〇＞?￡?■?ａ，?￡?钃??以１＿〇■?ｒ＾ｉ?■?以１＿５－?★?＿??ａ＞?ａｓ?ａ＞?ｎｓ?■?（ＭＭ??°－ｓ－?■?Ｉ?＾?ｎ＿?■??００Ｊ＿Ｊ＿ＬｔＨ??０．０－１—Ｉ￣４＊????２４ｈ?４８ｈ?２４ｈ?４８ｈ??圖３．３．１?Ｈｕｈ７細(xì)胞中過表達(dá)ＴＲＩＭ２１可顯著抑制ＨＢＶ基因的表達(dá)??Ｆｉｇｕｒｅ?３．３．１?Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＴＲＩＭ２１?ｉｎ?Ｈｕｈ７?ｓｉ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Seroepidemiology of hepatitis B virus infection and impact of vaccination[J]. Peng Huang,Li-Guo Zhu,Ye-Fei Zhu,Ming Yue,Jing Su,Feng-Cai Zhu,Hai-Tao Yang,Yun Zhang,Hong-Bing Shen,Rong-Bin Yu,Xiang-Jun Zhai,Zhi-Hang Peng.  World Journal of Gastroenterology. 2015(25)



本文編號：3394701