背景和目的肝肺綜合征（hepatopulmonary syndrome,HPS）是一種慢性肝病的晚期并發(fā)癥,主要臨床癥狀為難治性低氧血癥。據(jù)臨床資料統(tǒng)計(jì),肝肺綜合征在肝硬化患者中發(fā)病率為4-29%。目前,HPS的發(fā)病機(jī)制研究已取得一定的成果,但仍然未完全闡明,且臨床轉(zhuǎn)化治療還需進(jìn)一步開展。其中,血管異常擴(kuò)張、動(dòng)靜脈分流、氧合功能障礙是HPS的主要病理表現(xiàn),這些變化通常引起肺血管重建,從而加速肺部病理的惡化進(jìn)程。肺微血管異常擴(kuò)張的病理機(jī)制是HPS中的研究熱點(diǎn),在我們團(tuán)隊(duì)的前期研究中發(fā)現(xiàn),血管的異常擴(kuò)張可能與肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）的異常增殖有關(guān),而在另一方面,我們發(fā)現(xiàn)HPS病人在進(jìn)行肝移植手術(shù)后,肺微血管阻力明顯升高,表明肺微血管存在收縮反應(yīng),而在正常情況下,肺微血管是不具備這一特性的,血管的異常擴(kuò)張無法完全用PMVECs的異常增殖來進(jìn)行解釋,因此可能存在其他的病理機(jī)制。在前期實(shí)驗(yàn),采用HPS大鼠血清對(duì)PMVECs進(jìn)行刺激培養(yǎng),隨后發(fā)現(xiàn)PMVECs中肌性相關(guān)蛋白SM-α-actin、calponi... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原來的膽總管結(jié)扎部位示意圖，(B)改進(jìn)后的膽總管結(jié)扎部位示意圖，(C)原方法結(jié)扎5周后膽總管擴(kuò)張程度，(D)改良方法結(jié)扎5周后膽總管擴(kuò)張程度

圖 2 (A)對(duì)照組 5 周后肝臟組織結(jié)構(gòu)，(B)對(duì)照組 5 周后肺臟組織結(jié)構(gòu)，(C)原方法結(jié)扎 5 周臟組織結(jié)構(gòu)，(D) 原方法結(jié)扎 5 周后肺臟組織結(jié)構(gòu)，(E)改良結(jié)扎 5 周后肝臟組織結(jié)構(gòu)，(F)改良 5 周后肺臟組織結(jié)構(gòu)。(G)原方法結(jié)扎和改良結(jié)扎 5 周后大鼠生存率，(H)原方法結(jié)扎和改良結(jié)扎后大鼠膽汁滲漏量。2.1.3.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組本次實(shí)驗(yàn)分為兩組：即對(duì)照組(Control 組) 和實(shí)驗(yàn)組(HPS 組)2.1.3.3 動(dòng)物模型的構(gòu)建實(shí)驗(yàn)組中，手術(shù)前一天晚將大鼠禁食,實(shí)驗(yàn)當(dāng)天取出稱重后，剃除手術(shù)區(qū)域的毛發(fā)提前配置好 5%的水合氯醛，按照 9ml/kg 的劑量進(jìn)行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛消失后，將大鼠安置固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上。消毒鋪巾后，于大鼠劍突下兩橫指處沿線剪開一長(zhǎng)約 2cm 的切口，逐層暴露進(jìn)入腹腔；于大鼠右上腹區(qū)域輕輕牽拉出十腸，找到并暴露膽總管；用鑷子游離出膽總管，取 2 號(hào)縫合線分別結(jié)扎近肝門端總管匯合上緣（高位結(jié)扎）和近十二指腸端處，隨后用剪刀離斷兩結(jié)扎點(diǎn)之間的膽

圖 3 膽總管結(jié)扎法構(gòu)建 HPS 大鼠模型A.暴露腹腔 B 尋找十二指腸，游離膽總管 C 結(jié)扎膽總管上下端 D 關(guān)閉腹腔2.1.3.4 HPS 大鼠血清制備CBDL 手術(shù) 28 天之后，取出大鼠進(jìn)行稱重，將配制好的 5%水合氯醛按照 9ml/kg的劑量進(jìn)行腹腔麻醉。待角膜反射，疼痛反射消失后，將大鼠固定于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，剪去腹部毛發(fā)，用碘伏消毒腹部；沿腹部中線逐層剪開并完全暴露腹腔；小心暴露下腔靜脈和腹主動(dòng)脈，并分離其血管筋膜，之后用穿刺針刺入腹主動(dòng)脈，抽取 8ml 左右的全血；將抽取的全血分為兩管，一管供血?dú)夥治鍪褂�，另一管注入肝功管�?nèi)，室溫靜置 2-4h，至有明顯血清析出；根據(jù)血?dú)庵笜?biāo)結(jié)果，篩選典型的 HPS 血液樣本，并進(jìn)行離心（2000轉(zhuǎn)/分, 20min）；在超凈工作臺(tái)內(nèi)，收集上清液，再經(jīng)細(xì)菌微孔進(jìn)行過濾，并分裝到 1.5mlEP管中，最后凍存于-80℃冰箱內(nèi)。2.1.3.5 原代培養(yǎng)大鼠 PMVECs 的培養(yǎng)本次實(shí)驗(yàn)采用組織塊法培養(yǎng)原代 PMVECs。取 1 只 SD 大鼠，使用 5%水合氯醛按


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