本文關(guān)鍵詞：鐵過負荷對miR-122表達的影響及其在肝臟炎癥發(fā)生過程中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景鐵是人體必需的微量營養(yǎng)素,參與多種生理生化過程,但是鐵過負荷會對機體產(chǎn)生危害。因此,鐵代謝受到機體的嚴格調(diào)控。肝臟是調(diào)控鐵穩(wěn)態(tài)的重要器官。但是有許多疾病(諸如酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、糖尿病、血色素沉著病和地中海貧血等)的患者中存在不同程度的肝鐵沉積,同時還存在輕至中度炎癥。近期有研究發(fā)現(xiàn),鐵代謝的紊亂與多臟器衰竭和慢性肝衰竭急性發(fā)作的早期死亡率有關(guān)。有研究者提出鐵過負荷可能與炎癥有關(guān)。盡管肝鐵過負荷對機體的危害一直受到相關(guān)領(lǐng)域研究者高度重視,但是,迄今為止肝鐵負荷與炎癥之間的聯(lián)系并沒有完全闡明。miRNA-122是肝臟特異性表達的miRNA,其表達變化在肝臟炎癥的發(fā)生以及肝臟腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。近年的研究發(fā)現(xiàn),miRNA-122通過下調(diào)鐵調(diào)素(Hepcidin)的表達參與機體鐵穩(wěn)態(tài)的調(diào)控。然而,miR-122的表達異常和鐵過負荷之間是否存在聯(lián)系,尤其是鐵過負荷是否通過miR-122引起或加重炎癥反應(yīng),未見報道。因此,本課題就鐵過負荷對miR-122表達的影響及其在肝臟炎癥反應(yīng)中的作用進行了探索。研究目的通過動物實驗和細胞實驗,了解鐵過負荷與肝臟組織細胞炎癥的聯(lián)系,明確miR-122的表達下降在鐵過負荷引起的肝臟炎癥發(fā)生過程中的作用,并在此基礎(chǔ)上探討鐵過負荷miR-122表達下降的分子機制,為鐵過負荷肝臟炎癥的預(yù)防和治療方法提供新的線索。研究方法1.實驗動物小鼠分組及造模方法1.1純化飼料組：四周齡雄性C57小鼠(購自上海斯萊克公司,體重(13±2)g。按體重隨機分為1周組、2周組和4周組,自由進食(購自Research Diets公司的AIN-93去鐵小鼠配方飼料,鐵含量為3ppm)飲水,在12h/12h晝夜節(jié)律,22±2℃環(huán)境中飼養(yǎng)3天后,每組進一步分為鐵缺乏組、鐵過負荷組和適鐵組(對照組)。鐵缺乏組腹腔注射等體積的生理鹽水,每周2次；適鐵組每周2次腹腔注射2mg/ml右旋糖酐鐵,每次注射劑量為20mg/kg小鼠體重(每只小鼠1周注射鐵總量為0.6mg,2周為1.2 mg,4周為2.4mg,相當與小鼠相同時間內(nèi)進食全價飼料中的鐵攝入量；鐵過負荷組每周腹腔注射2次20mg/ml右旋糖酐鐵,每次注射劑量為200mg/kg小鼠體重(每只小鼠1周注射鐵總量為6mmg,2周為12mg,4周為24mg)。1.2全價飼料組：小鼠來源、性別、體重、飼養(yǎng)環(huán)境同純化飼料組,自由進食(購自我校實驗動物中心的全價小鼠飼料,鐵含量為200mg/kg)飲水,按體重隨機分為1周組、2周組和4周組,每組進一步分對照組和鐵過負荷組。對照組每周2次腹腔注射等體積的生理鹽水；鐵過負荷組每周2次腹腔注射20mg/ml右旋糖酐鐵,每次注射劑量為200mg/kg小鼠體重。1.3右旋糖酐鐵溶液配制：20ml/mg右旋糖苷鐵溶液由100mg/ml右旋糖酐鐵稀釋5倍得到(100ml/mg右旋糖苷鐵：生理鹽水=1ml:4ml,充分混勻；2ml/mg右旋糖酐鐵由20ml/mg右旋糖苷鐵稀釋10倍得到(20ml/mg右旋糖苷鐵：生理鹽水=1ml:9ml,充分混勻)。2.基因表達譜芯片采用基因表達譜芯片(Affymetrix GeneChip Mouse Gene 1.0 ST Array),對鐵缺乏組,鐵過負荷組和對照組C57小鼠(每組5只)進行mRNA表達譜檢測,利用隨機方差模型(RVM)進行差異基因篩選,分析工具為MultiClassDif。3.肝臟組織普魯士藍染色,HE染色及炎癥病理評分肝臟樣本固定在4%的多聚甲醛,包埋石蠟,然后切片(4μm),用蘇木精和伊紅染色,普魯士藍染色,熒光顯微鏡觀察并采集圖像。4.實時定量熒光PCR用Trizol提取肝臟組織或細胞的總RNA,測定其濃度,再用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA; miRNA采用特殊的miRNA莖環(huán)RT引物(購自廣州銳博公司),將miRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA為模板,與引物,SYBR green,水混勻后,在StepOne PlusRT-PCR儀上進行擴增。根據(jù)RQ值,動物以18S(細胞以β-actin, miRNA以U6)為內(nèi)參照,標準化后進行統(tǒng)計分析。5. Western-blot用凱基全蛋白試劑盒提取肝臟組織或細胞的總蛋白,測定濃度,變性,然后SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜,封閉,孵育一抗：CCL2抗體(1：400)、p65抗體(1：1000)、IκBα抗體(1:1000)、p-IκBα抗體(1:1000)、TNFα (1:1000)、內(nèi)參照抗體(β-actin抗體,1：3000),漂洗后,孵育二抗,漂洗后,顯像,條帶采用quantity one圖像分析系統(tǒng)進行灰度分析。6.肝臟組織免疫熒光小鼠石蠟切片脫蠟,經(jīng)抗原修復(fù)后,加一抗(CD68, TNFα, IL-1β),二抗(含F(xiàn)ITC呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光),再用DAPI(發(fā)藍光)復(fù)染細胞核,用抗熒光淬滅封片劑封片,共聚焦熒光顯微鏡觀察并采集圖像。7.細胞的培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染人肝癌細胞株Huh7細胞,人星狀細胞LX-2細胞均在含10%胎牛血清,1%雙抗(青鏈霉素混合液)的高糖DMEM中培養(yǎng)。THP-1細胞在含10%胎牛血清,1%雙抗的1640中培養(yǎng),用PMA(100nM)誘導(dǎo)為巨噬細胞。分別加入Holo-Tf(飽和鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白)及FeSO4對細胞進行培養(yǎng)(5% CO2,37℃)。Huh7細胞接種培養(yǎng)板,當融合度為80%時,按說明書進行轉(zhuǎn)染,將miR-122mimics (miR-122 inhibitor或干擾小RNA)以及轉(zhuǎn)染試劑lipofctamine RNAiMAX分別用DMEM(或1640)稀釋后混勻,37℃孵育15-20分鐘。每孔預(yù)先加入含血清不含抗生素的培養(yǎng)基,再加入混合液。6-8h后換液,培養(yǎng)至48h收集細胞檢測。質(zhì)粒用DNA轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染,步驟同前。8. rAAV8病毒的制備(Package)按試劑盒說明書進行pAAVsc-CB6-PI Guassia和pAAVsc-CB6-PI-pri-mir-122 Guassia質(zhì)粒的抽提,送生工公司進行測序鑒定。當HEK293細胞融合度為80-90%時,并按步驟進行質(zhì)粒的細胞轉(zhuǎn)染。收集細胞,并純化rAAV8病毒,用實時定量熒光PCR法測定病毒的滴度。對2周鐵過負荷小鼠尾靜脈注射rAAV8-CB-PI Guassia對照病毒和rAAV8-CB-PI-pri-mir-122 Guassia病毒,注射量為1×1011vgs/只,于第4周處死老鼠,取小鼠血清、肝臟、脾、胰、肺、腎臟和腦組織備用。9. Gussia熒光的檢測采集的小鼠血清用PBS稀釋200倍,提取肝臟、脾、胰、肺、腎臟和腦組織總蛋白,按照Gaussia熒光素酶檢測試劑盒說明書進行檢測。10.雙熒光素酶報告基因?qū)⒁吧虲CL2的3’-UTR區(qū)域,以及結(jié)合位點突變的序列克隆到p-MIR熒光素酶報告質(zhì)粒中,并與miR-122mimics共同轉(zhuǎn)染Huh7細胞,48h后檢測熒光素酶和海腎熒光素酶的活性。11.染色質(zhì)免疫共沉淀法(ChIP)Huh7細胞接種于6cm2培養(yǎng)皿中,分為對照組和Holo-Tf組,培養(yǎng)24h,按照Millipore公司染色質(zhì)免疫共沉淀說明書的步驟進行試驗。12.數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析Western條帶采用quantity one圖像分析系統(tǒng)進行灰度分析,實驗數(shù)據(jù)用(X±S)表示,使用統(tǒng)計軟件SPSS18.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,采用兩獨立樣本t檢驗和單因素方差分析(one-way ANVOA)進行各組之間的比較,各組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。結(jié)果以P0.05為顯著性水平,P0.01為非常顯著性水平。結(jié)果1.鐵過負荷可以引起肝臟組織細胞炎癥反應(yīng)1.1動物實驗1.1.1基因芯片結(jié)果鐵過負荷2周組小鼠,提取肝臟RNA,進行基因芯片檢測,篩選出3282個差異基因,其中鐵調(diào)素(Hamp),鐵蛋白輕鏈(Ft11),骨形態(tài)蛋白6(Bmp6)顯著升高,而轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Trfc)顯著降低,多種炎癥相關(guān)分子CD68, CD36, CCL2, CCL3, CCR2, IL-6, TNF等均顯著升高。采用RT-PCR驗證Hamp, Ftll, Trfc, CCL2, TNFamRNA結(jié)果與芯片結(jié)果一致。1.1.2鐵過負荷1～4周組小鼠機體鐵狀況不論純化飼料組還是全價飼料組,與各自對照組相比,鐵過負荷組1-4周組小鼠隨著鐵負荷程度加重以及時間延長,其血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度(TS%)、總鐵結(jié)合力(TIBC),肝臟鐵水平均逐漸升高。普魯士藍染色顯示小鼠肝臟可見鐵顆粒沉積逐漸加重。1.1.3鐵過負荷1～4周組小鼠肝臟炎癥相關(guān)分子mRNA及蛋白表達水平變化不論純化飼料組還是全價飼料組,RT-PCR結(jié)果顯示,與各自對照組相比,鐵過負荷1-4周組小鼠肝臟CCL2, p65, TNFα, IL-6, IL-1βmRNA隨鐵過負荷程度的加重而顯著升高。Western blot結(jié)果顯示純化飼料組,與各自對照組相比,鐵過負荷1-4周組小鼠肝臟CCL2, p65, IκBα, p-IκBa蛋白隨鐵過負荷程度的加重而顯著升高。免疫熒光結(jié)果顯示純化飼料組鐵過負荷1-4周組小鼠肝臟CD68, TNFα, IL-0β綠色熒光明顯增強。1.1.4鐵過負荷1～4周組小鼠HE染色及炎癥病理評分不論純化飼料組還是全價飼料組,與各自對照組相比,鐵過負荷1-4周組小鼠肝臟HE染色結(jié)果顯示隨著鐵負荷程度增加小鼠肝臟的炎性細胞逐漸增多,炎癥評分也逐漸升高。1.1.5鐵過負荷1～4周組小鼠血清肝酶(AST, ALT)的變化不論純化飼料組還是全價飼料組,與各自對照組相比,鐵過負荷1周組小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT),天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平?jīng)]有明顯改變,而鐵過負荷2周組和4周血清轉(zhuǎn)氨酶的水平明顯增加。1.2細胞實驗采用Huh7細胞,THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞,LX-2細胞(人星狀細胞)進行細胞實驗。1.2.1不同濃度Holo-Tf和FeSO4對細胞活性的影響采用流式細胞技術(shù)檢測培養(yǎng)液中加入Holo-Tf(終濃度30μM),及不同濃度的硫酸亞鐵培養(yǎng)后細胞的活性,結(jié)果顯示與對照組沒有明顯差異。1.2.2在終濃度為30μMHolo-Tf和終濃度為100μM FeSO4的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24h對細胞鐵含量的影響采用PGSK (phen Green SK)二價鐵熒光染料的方法比較暴露前后細胞內(nèi)鐵含量的變化,結(jié)果顯示,在終濃度30μM Holo-Tf及終濃度100μM FeSO4培養(yǎng)24h,細胞內(nèi)熒光強度明顯減弱,表明細胞內(nèi)鐵含量明顯增加。1.2.3在終濃度為30μMHolo-Tf的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)24h對Huh7細胞,THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞,LX-2細胞炎癥相關(guān)分子mRNA及蛋白表達水平變化在培養(yǎng)液中加入Holo-Tf(終濃度30μM)培養(yǎng)Huh7細胞,THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞,LX-2細胞24h, RT-PCR結(jié)果顯示CCL2, p65, TNFα, IL-6, IL-1βmRNA表達明顯升高。Western blot結(jié)果顯示Huh7細胞CCL2, p65,IκBα, p-IκBα, TNFα的蛋白表達明顯升高。在培養(yǎng)液中加入FeSO4(終濃度100μM)培養(yǎng)Huh7細胞0,4,8,12,24,36h,CCL2mRNA及蛋白,p65, TNFα, IL-6mRNA表達逐漸增加。2.miR-122表達明顯下降是鐵過負荷引起肝臟組織細胞炎癥反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)2.1動物實驗2.1.1鐵過負荷1～4周組小鼠肝臟組織中miR-122及pri-mir-122的表達變化不論純化飼料組還是全價飼料組,與各自對照組相比,鐵過負荷1-4周組小鼠肝臟組織中miR-122及pri-mir-122表達均顯著降低。2.1.2過表達miR-122對鐵過負荷小鼠肝臟炎癥分子表達的影響構(gòu)建了rAAV8-CB-PI Guassia(對照病毒)和rAAV8-CB-PI-pri-mir-122 Guassia病毒(高表達miR-122病毒),尾靜脈注射,在實驗第4周后處死動物取標本進行相關(guān)指標檢測。與對照組相比,IO+rAAV8-122組(鐵過負荷并注射rAAV8-CB-PI-pri-mir-122 Guassia病毒)的小鼠肝臟miR-122的表達水平明顯升高,而IO及IO+rAAV8組(鐵過負荷并打注射rAAV8-CB-PI Guassia病毒)的小鼠肝臟miR-122的表達水平明顯降低(1)各組小鼠血清生化指標及肝鐵含量變化與對照組相比,IO+rAAV8-122組的小鼠血清AST, ALT均恢復(fù)到正常水平。但是肝鐵,血清鐵,TIBC, TS%仍然顯著升高。IO組及I0+rAAV8組的小鼠血清AST,ALT,肝鐵,血清鐵,TIBC, TS%顯著升高。(2)各組小鼠肝臟組織中的鐵調(diào)控指標及相關(guān)炎癥分子mRNA及蛋白表達水平變化RT-PCR結(jié)果顯示,與對照組相比,10, IO+rAAV8組及IO+rAAV8-122組小鼠肝臟Hamp.Ftl1mRNA表達水平明顯升高,Trfc mRNA表達明顯降低。IO+rAAV8-122組的小鼠肝臟CCL2, p65, TNF-α, IL-1β, IL-6 mRNA雖然較對照組高,但是與10,I0+rAAV8組相比,明顯下降。Western blot結(jié)果顯示IO+rAAV8-122組的小鼠肝臟CCL2, p65蛋白表達水平雖然較對照組高,但是與10, I0+rAAV8組相比,明顯下降。免疫熒光檢測結(jié)果顯示IO+rAAV8-122組的小鼠肝臟TNF-α, IL-6, CD68的綠色熒光雖然較對照組高,但是與IO, I0+rAAV8組相比,可見到綠色熒光明顯減少。10及I0+rAAV8組小鼠綠色熒光明顯增多。2.2細胞實驗2.2.1 Huh7、HepG2、THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞、LX-2細胞miR-122表達豐度的檢測采用RT-PCR檢測與Huh7細胞相比,HepG2細胞,THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞幾乎不表達miR-122, miR-122的表達量是Huh7細胞的63%,而LX-2細胞是Huh7細胞的7.4%。因此實驗選用Huh7細胞作為實驗對象觀察鐵過負荷對miR-122表達的影響。2.2.2鐵過負荷對Huh7細胞miR-122及pri-mir-122表達的影響在培養(yǎng)液中加入的Holo-Tf(終濃度30μM)培養(yǎng)Huh7細胞24h, miR-122及pri-mir-122表達水平明顯下降。在培養(yǎng)液中加入FeSO4(終濃度為50,100,150,200μM)培養(yǎng)Huh7細胞,miR-122表達水平在100μM時開始明顯下降,雖然隨著添加濃度的增加miR-122表達水平下降幅度有所增加,但與100μM時的表達水平?jīng)]有明顯差異,因此,采用在培養(yǎng)液中加入FeSO4(終濃度100μM)培養(yǎng)Huh7細胞0,4,8,12,24,36h, Huh7細胞miR-122在8h開始明顯下降,隨時間延長,鐵負荷程度的加重而逐漸降低,pre-mir-122及pri-mir-122表達水平在4h開始明顯下降,隨時間延長而進一步降低。2.2.3過表達miR-122對細胞鐵過負荷后炎癥分子表達的影響為了解鐵過負荷引起肝細胞miR-122表達下降與CCL2表達增加的關(guān)系,我們通過轉(zhuǎn)染miR-122 mimics提高Huh7細胞miR-122表達水平,通過轉(zhuǎn)染miR-122 inhibitor抑制Huh7細胞表達miR-122,結(jié)果顯示,提高miR-122表達水平可以抑制CCL2表達,而抑制miR-122表達則可以促進CCL2表達。通過生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)小鼠及人的CCL2在3'-UTR區(qū)與miR-122有結(jié)合位點。我們采用雙熒光報告基因檢測,結(jié)果表明miR-122與人CCL2的3'-UTR區(qū)的結(jié)合位點有活性。為進一步觀察miR-122對細胞鐵過負荷后炎癥分子表達的變化,將Huh7細胞細胞分為4組：對照組(Control),鐵過負荷組(Holo-Tf), miR-122 mimics組和鐵過負荷加miR-122 mimics組(Holo-Tf+miR-122 mimics),采用Western blot觀察4組細胞CCL2, p65, IκBα, p-IκBα, TNFa蛋白的表達變化,結(jié)果顯示,雖然與對照組相比,上述蛋白仍然升高,但是與鐵過負荷組相比明顯降低。HepG2細胞幾乎不表達miR-122,我們采用轉(zhuǎn)染miR-122mimics和轉(zhuǎn)染pAAVsc-CB-PI-pri-mir-122 Guassia質(zhì)粒等方法使HepG2細胞高表達miR-122,然后觀察鐵過負荷HepG2細胞CCL2, p65, IκBα, p-IκBα, TNFa蛋白表達的變化。Western blot結(jié)果顯示雖然與對照組相比,上述蛋白仍然升高,但與鐵過負荷組相比明顯降低。3.HNF4α表達下降是鐵過負荷下調(diào)肝組織細胞miR-122的關(guān)鍵因素之一3.1鐵過負荷對Huh7細胞HNF1α、HNF4α、HNF3β、HNF6、C/EBPa等轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達的影響通過查閱文獻,發(fā)現(xiàn)調(diào)控miR-122的轉(zhuǎn)錄因子有HNF1α、uHNF4α、HNF3β、HNF6、 C/EBPa等。因此,我們進行了轉(zhuǎn)錄因子的檢測。在培養(yǎng)液中加入Holo-Tf (終濃度30μM)培養(yǎng)Huh7細胞24h,熒光定量PCR結(jié)果顯示與對照組相比,在HNF1α、HNF4α、HNF3β、HNF6、C/EBPa轉(zhuǎn)錄因子中,只有HNF4amRNA表達下降,而其余轉(zhuǎn)錄因子的表達均無明顯差異。3.2鐵過負荷對肝組織細胞轉(zhuǎn)錄因子HNF4a表達的影響動物實驗熒光定量PCR及Western blot結(jié)果顯示,與同期對照組相比,1～4周鐵過負荷時小鼠肝臟HNF4αmRNA和蛋白表達水平均明顯下降。細胞實驗,在培養(yǎng)液中加入Holo-Tf(終濃度30μM)培養(yǎng)Huh7細胞24h.Western blot結(jié)果顯示HNF4a蛋白表達水平明顯下降。在培養(yǎng)液中加入FeSO4(濃度100μM)培養(yǎng)Huh7細胞0,4,8,12,24,36h, Huh7細胞HNF4amRNA和蛋白表達水平在4h開始明顯下降,隨時間延長而逐漸降低。3.3轉(zhuǎn)錄因子HNF4a對miR-122表達的影響我們采用HNF4a siRNA干擾和轉(zhuǎn)染HNF4a質(zhì)粒的方法,使Huh7細胞抑制或過表達轉(zhuǎn)錄因子HNF4a,觀察miR-122的表達變化。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,HNF4a siRNA干擾的Huh7細胞,HNF4a mRNA及蛋白表達水平明顯下降,此時pri-mir-122及miR-122表達明顯降低,而CCL2表達明顯升高；轉(zhuǎn)染過表達HNF4a質(zhì)粒細胞HNF4αmRNA及蛋白表達水平明顯升高,pri-mir-122及miR-122表達明顯升高,CCL2表達明顯降低。3.4鐵過負荷對肝細胞HNF4a與miR-122啟動子區(qū)結(jié)合活性的影響為證實鐵過負荷是否是通過HNF4a直接調(diào)控miR-122,我們在培養(yǎng)液中加入Holo-Tf(終濃度30μM)培養(yǎng)Huh7細胞24h,染色質(zhì)免疫共沉淀法(ChIP)結(jié)果顯示,HNF4a與miR-122啟動子區(qū)有結(jié)合活性,但鐵過負荷可以引起HNF4a與miR-122啟動子區(qū)結(jié)合活性減弱。結(jié)論本課題通過動物實驗和細胞實驗發(fā)現(xiàn)：一、鐵過負荷可以導(dǎo)致實驗動物肝臟炎癥相關(guān)分子CCL2, p65, TNFα, IL-6, IL-1βmRNA及蛋白顯著升高,炎癥病理評分和血清ALT、AST逐漸升高；二、鐵過負荷可以導(dǎo)致Huh7細胞,THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞,LX-2細胞CCL2, p65, TNFα, IL-6, IL-1βmRNA表達明顯升高；三、鐵過負荷可引起肝臟組織細胞miR-122表達下降,使其下游靶基因趨化因子CCL2的表達增強,NF-κB信號通路活性增強,TNFα, IL-6, IL-1β表達明顯增加。提高miR-122的表達可明顯緩解鐵過負荷引起的上述炎癥反應(yīng)；四、鐵過負荷可引起肝臟組織細胞HNF4a mRNA和蛋白的表達下調(diào),ChIP證實,鐵過負荷可以減弱HNF4α與miR-122啟動子序列的結(jié)合活性,而過表達HNF4α可以明顯緩解鐵過負荷引起的miR-122、CCL2表達變化,抑制HNF4α表達可以明顯加重鐵過負荷引起的miR-122、CCL2表達變化；綜合上述實驗結(jié)果,表明,鐵過負荷可通過抑制HNF4α的表達,使得miR-122的表達下降,進而上調(diào)CCL2的表達,激活NF-κB信號通路,引起肝臟組織細胞的炎癥反應(yīng)；而上調(diào)miR-122的表達可能是緩解鐵負荷引起炎癥反應(yīng)的有效方法。
【關(guān)鍵詞】：鐵過負荷 炎癥 miR-122 趨化因子CCL2 rAAV8 HNF4α
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R575
【目錄】：

• 摘要5-13
• Abstract13-21
• 中英文縮略詞表21-22
• 前言22-25
• 參考文獻23-25
• 第一部分 鐵過負荷可以引起肝臟組織細胞炎癥反應(yīng)25-54
• 一、材料與方法25-40
• 二、結(jié)果40-51
• 三、討論51-53
• 參考文獻53-54
• 第二部分 miR-122表達明顯下降是鐵過負荷引起肝臟組織細胞炎癥反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)54-83
• 一、材料與方法54-68
• 二、結(jié)果68-80
• 三、討論80-81
• 參考文獻81-83
• 第三部分 HNF4α表達下降是鐵過負荷下調(diào)肝組織細胞miR-122的關(guān)鍵因素之一83-97
• 一、材料與方法83-89
• 二、結(jié)果89-94
• 三、討論94-95
• 參考文獻95-97
• 全文總結(jié)97-98
• 綜述98-104
• 參考文獻101-104
• 附錄104-106
• 在讀期間發(fā)表的論文106-107
• 致謝107-108

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3 主持人 齊立強;農(nóng)網(wǎng)迎峰度冬 積極備戰(zhàn)應(yīng)對[N];國家電網(wǎng)報;2013年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王潔;鐵過負荷對小鼠血脂代謝及相關(guān)細胞因子作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 馮建衡;互聯(lián)電網(wǎng)在線過負荷校正的研究[D];華北電力大學(xué)（河北）;2007年

2 吳璐莎;鐵過負荷對miR-122表達的影響及其在肝臟炎癥發(fā)生過程中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 王卓;防止過載連鎖跳閘的保護與緊急控制方案研究[D];華北電力大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：鐵過負荷對miR-122表達的影響及其在肝臟炎癥發(fā)生過程中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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