發(fā)布時(shí)間：2021-08-14 06:53

　　目的1..檢測(cè)HBV rtM204位點(diǎn)的自然變異株在慢性乙型肝炎輕度、中度、重度組、肝硬化組中發(fā)生的頻率,探討分析rtM204位點(diǎn)（YMDD）自然變異的臨床意義。2.檢測(cè)HBV rtN236位點(diǎn)的自然變異株在慢性乙型肝炎輕度、中度、重度組以及肝硬化組中發(fā)生的頻率,探討該自然變異株與不同慢性肝病類型的關(guān)系。方法1.應(yīng)用引物特異性實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)患者拉米夫定rtM204V/I突變。2.應(yīng)用巢式聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)（ntPCR-RFLP）檢測(cè)乙型肝炎病毒阿德福韋酯rtN236T位點(diǎn)突變。結(jié)果1.在250例未使用抗病毒藥物治療的慢性乙肝患者中,拉米夫定rtM204V/I位點(diǎn)突變例（2%）,其中1例為YIDD陽(yáng)性,2例為YVDD陽(yáng)性,2例為YIDD、YVDD混合型。未使用抗病毒藥物慢性乙肝患者乙肝基因分型C亞型占56.40%（141/250）,B亞型占43.60%（109/250）。rtM204V/I變異與未變異組在慢性乙型肝炎臨床分型（包括慢性輕度、中度、重度、乙肝肝硬化）中的分布無(wú)顯著性差異�；颊逪BV基因分型、性別、HBeAg狀態(tài)、HBV DNA水平、AL... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HBV-DNArtN236T位點(diǎn)目的基因的擴(kuò)增產(chǎn)物

圖 1b: HBV-DNA rtN236T 位點(diǎn)目的基因的擴(kuò)增產(chǎn)物圖 1b 中左起第一孔為為對(duì)照（C），左起第二至十孔為樣本孔（S1-S10），樣本孔分子量 300bp 左右，未被酶切為 304bp，被酶切則為 285bp，變異株為 S2 及S9。2.4 HBV RT 區(qū)基因序列測(cè)定通過(guò)巢式 PCR 引物擴(kuò)增 RT 區(qū)，目標(biāo)測(cè)序范圍約為 aa170-aa250。擴(kuò)增純化后，通過(guò) Sanger 雙脫氧法在 ABI3770 測(cè)序儀（購(gòu)自美國(guó) ABI 公司）進(jìn)4 份血清標(biāo)本中均檢出 rtN236T 變異。經(jīng) HBVDNA 測(cè)序證實(shí)，患者 HBV 基因組位堿基由腺嘌呤(A)突變?yōu)榘奏?C)，從而導(dǎo)致 HBV 聚合酶 D 區(qū) a236 氨基冬酰胺(asparagine，N)變異為蘇氨酸(threonine，T)。HBV RT 區(qū)基因序列果與 RFLP 分析結(jié)果一致。其中一個(gè)病人的部分測(cè)序截圖如下圖(圖 2):

圖 1b: HBV-DNA rtN236T 位點(diǎn)目的基因的擴(kuò)增產(chǎn)物圖 1b 中左起第一孔為為對(duì)照（C），左起第二至十孔為樣本孔（S1-S1孔分子量 300bp 左右，未被酶切為 304bp，被酶切則為 285bp，變異株S9。2.4 HBV RT 區(qū)基因序列測(cè)定通過(guò)巢式 PCR 引物擴(kuò)增 RT 區(qū)，目標(biāo)測(cè)序范圍約為 aa170-aa化后，通過(guò) Sanger 雙脫氧法在 ABI3770 測(cè)序儀（購(gòu)自美國(guó) ABI 份血清標(biāo)本中均檢出 rtN236T 變異。經(jīng) HBVDNA 測(cè)序證實(shí)，患者 H堿基由腺嘌呤(A)突變?yōu)榘奏?C)，從而導(dǎo)致 HBV 聚合酶 D 區(qū) 酰胺(asparagine，N)變異為蘇氨酸(threonine，T)。HBV RT 區(qū)與 RFLP 分析結(jié)果一致。其中一個(gè)病人的部分測(cè)序截圖如下圖(

【參考文獻(xiàn)】：
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