目的:肝損傷是最常見的肝病類型,被認為是諸多肝病的誘因。目前,引發(fā)肝損傷的原因得到了深入的探究,然而觸發(fā)肝損傷的分子機制尚不明確,治療方法也很局限。內質網相關降解（Endoplasmic Reticulum-associated deficiency,ERAD）是真核細胞中的一種蛋白質質量控制系統(tǒng),負責清除未折疊蛋白,恢復細胞穩(wěn)態(tài),然而ERAD在肝損傷過程中的作用尚不清楚。因此,本研究意在探索ERAD功能缺失在肝損傷發(fā)病機理中的作用,并探討Mg2+在預防肝損傷中的潛在作用。方法:1、利用CRISPR-Cas9技術構建ERAD功能缺失的HepG2細胞。2、通過對正常小鼠和ERAD功能缺失小鼠的血漿生化指標和組織切片分析,檢測小鼠肝損傷情況。3、利用Western blot和Co-IP技術分析ERAD功能缺失的HepG2細胞中未折疊蛋白的降解及聚集情況。4、通過油紅O染色分析ERAD功能缺失的HepG2細胞中脂肪代謝情況。5、通過Mg2+干預,檢測ERAD功能缺失的HepG2細胞相對細胞活力的變化。結果:1、ERAD功能缺失的HepG2細胞和小鼠模型構建成功。2、ERAD功能缺失導致小鼠發(fā)... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數】：88 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?ＥＲＡＤ功能缺失的小鼠肝損傷情況檢測

實驗結果分析?內質網相關降解功能缺失導致的肝損傷發(fā)生機制與干預措施研宄??進行計算，并利用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ軟件繪制變化曲線，結果顯示（圖３．Ａ－Ｄ），??在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏ丨組細胞中，加入ＣＨＸ抑制蛋白合成后，未折疊蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ??蛋白的降解不受抑制，隨著ＣＨＸ加入時間的延長，ＮＨＫ－ＧＦＰ蛋白在細胞中的??量會越來越少，說明在ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ細胞中未折疊蛋白降解正常。然而ＨｅｐＧ２??Ｈｒｃｉｌ?Ｋ０細胞和ＨｅｐＧ２?ＳｅｌｌＬ?Ｋ０細胞在蛋白質合成受到抑制的情況下，未折疊??蛋白ＮＨＫ－ＧＦＰ的降解也存在障礙，并不會隨ＣＨＸ加入時間的延長而使細胞中??聚集的未折疊蛋白發(fā)生明顯的變化，這樣就會導致大量的未折疊蛋白聚集在內質??網中，影響細胞功能，使得內質網中蛋白過載，進一步加強ＥＲＳ。??Ａ?ＨｅｐＧ２ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＳＳＳｅＭＬＫＯ?＾?＾ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ＇ＧＦＰ?Ｊ?？?Ｍ?０?？?９０?ＣＨＸ（ｍｉｎ）?１＇°１＾?－?ＨｅｐＧ２Ｓｅｌ１ＬＫＯ????Ｃ?????ｊ：??ｐ－ａｃｔｉｎ?°＇５ｉ—Ｓ－？?Ｔｏｏ??ＣＨＸ?ｃｈａｓｅ（ｍｔｎ）??Ｃ?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＨｅｐＧ２?Ｈｒｄｌ?ＫＯ?Ｄ?１２?？?ＨｅｐＧ２?ｃｏｎｔｒｏｌ??ＮＨＫ－６ＦＰ?＋?＋?＋?＋?＋?￣ＨｅｐＧ２Ｈｒｄ１ＫＯ??０?４５?９０?０?４５?９０?ＣＨＸ?Ｃｈａｓｅ（ｍｉｎ）?ｉ??—??—??１１－°－?——■??ＮＨＫ－６ＦＰ?＿ｉ?麵》■？?＿§?爾．７３ｋＤ?｜?０．９．????ｓ?０８．??Ｍｃｔｉｎ?ｍｍ?４３ｋＤ?

圖４．?ＥＲＡＤ?

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Apoptosis and non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Tatsuo Kanda,Shunichi Matsuoka,Motomi Yamazaki,Toshikatsu Shibata,Kazushige Nirei,Hiroshi Takahashi,Tomohiro Kaneko,Mariko Fujisawa,Teruhisa Higuchi,Hitomi Nakamura,Naoki Matsumoto,Hiroaki Yamagami,Masahiro Ogawa,Hiroo Imazu,Kazumichi Kuroda,Mitsuhiko Moriyama.  World Journal of Gastroenterology. 2018(25)



本文編號：3329236