第一部分 新生大鼠肝細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定目的：建立一種簡單、高效的新生大鼠肝細胞分離與培養(yǎng)的方法。方法：采用組織塊-膠原酶消化法,經(jīng)多步低速離心獲取新生大鼠肝細胞,待體外培養(yǎng)的肝細胞呈克隆樣生長形成細胞集落,應用RT-PCR和Western blot技術(shù)分別檢測新生大鼠肝細胞中ALB、CK-18、CK-8和AFP的mRNA和蛋白表達情況,同時將同種新生大鼠肝組織、大鼠肝組織中作為參照,進行生物學功能鑒定。結(jié)果：分離的新生大鼠肝細胞體外培養(yǎng),在倒置顯微鏡下可見細胞形態(tài)呈現(xiàn)為圓形,24h部分細胞貼壁,胞體伸展后,呈島嶼狀,由圓球形轉(zhuǎn)變?yōu)闄E圓形,48h細胞進入增殖期,細胞呈不規(guī)則多邊形上皮細胞特征,3d培養(yǎng)的肝細胞互相連接成片,同時胞體透明度減弱、輪廓增強,可見部分肝細胞呈雙核或多核。5d細胞形態(tài)基本一致,呈克隆樣生長彼此之間相互融合。RT-PCR技術(shù)檢測新生大鼠肝細胞表達成熟肝細胞標記物ALB、CK-18、CK-8 mRNA:Western blot技術(shù)檢測新生大鼠肝細胞表達成熟肝細胞標記物ALB、CK-18、CK-8蛋白。結(jié)論：成功分離、鑒定出了新生大鼠肝細胞,并可在體外條件下擴增培養(yǎng)... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４大量真茵污染（Ｘ２００）

一般肉眼可見培養(yǎng)液渾濁，呈黃綠色。鏡下可見滿視野都是細菌顆粒，??同時可覆蓋細胞，使得整個背景模糊，可能導致細胞死亡，及時應用雙抗有效??進行預防，若較重則盡快丟棄細胞，如圖５所示。Ｗ上兩種污染在培養(yǎng)中較多見，??若污染較重應盡快丟棄細胞，同時按污染情況消毒培養(yǎng)箱和細胞間。??圓圓??圖４大量真茵污染（Ｘ２００）?圖５大量細菌污染（Ｘ２００）??２．２．２細胞凍存及復蘇流程??（１）凍存液配制：ＤＭＥＭ培養(yǎng)基?５０％??胎牛血清?４０％??ＤＭＳＯ?１０％??２１??

圖６轉(zhuǎn)移夾居示意圖??

【參考文獻】：
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本文編號：3287488