背景和目的:肝纖維化（hepatic fibrosis）是慢性肝病發(fā)展為肝硬化的重要中間環(huán)節(jié),目前認為,這個階段的肝臟病變是可逆的,但若沒有及時有效治療,則最終發(fā)展為不可逆轉(zhuǎn)的肝硬化、甚至肝癌。細胞移植成為治療肝纖維化的新策略。骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）具有自我更新能力,在合適的微環(huán)境里可多系橫向分化,可以被誘導分化為肝細胞修復損傷肝組織。肝細胞生長因子（ Hepatocyte growth factor, HGF）是一種具有較強的抗纖維化和抗凋亡活性的多功能因子,參與機體多種器官組織的生長、再生和重塑等過程。HGF可以調(diào)控BMSCs向肝細胞分化,促進肝細胞增殖。關于HGF基因修飾BMSCs是否促進誘導其向肝樣細胞分化,目前國內(nèi)外尚未見報道。本實驗構建了HGF基因的真核表達載體,利用HGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs對其進行基因修飾。研究HGF表達或增強其表達后對誘導BMSCs向肝樣細胞分化的影響,為進一步研究HGF基因及BMSCs治療肝纖維化及以后的臨床應用奠定基礎。方法:⑴Percoll密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法從成人骨髓血中分離BM... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs生長曲線

13圖 3 流式細胞儀鑒定 BMSCs 表面標志Fig3 The surface marker of BMSCs were detected by flow cyctometry3.4 BMSCs 誘導分化3.4.1 BMSCs 的成脂誘導分化BMSCs 成脂誘導后，第 3 天部分細胞逐漸變?yōu)閳A形，鏡下觀察可見細胞立體感增強，7 天后可見胞漿內(nèi)出現(xiàn)折光性強的圓形脂滴，并相互融合，細胞由長梭形變?yōu)閳A形或多邊形，誘導 10d，細胞形態(tài)變成多角狀，胞漿內(nèi)大量空泡。誘導 13油紅 O 染色顯示有脂肪細胞被染成紅色，提示有脂質(zhì)沉積。未誘導的細胞無此變化；說明 BMSCs 在體外有向成脂細胞誘導分化的能力（見圖 4）。3.4.2 BMSCs 的成骨誘導分化

8) 將柱子套在一干凈的 1.5ml 離心管中，加入 50μlTE 緩沖液至柱子的膜中央。室溫放置 2min，10,000×g 離心 1min 以洗脫 DNA。得到的質(zhì)粒溶液，-20℃保存?zhèn)溆�。紫外分光光度儀測定質(zhì)粒含量和純度，測得 A260/A280 在1.8-2.0 之間，含量大于 400ng/μl 滿足要求。2.1.5 pEGFP-N1 載體的提取pEGFP-N1 載體的擴增及提取方法步驟同 2.1.3 和 2.1.4。-20℃保存?zhèn)溆谩?.2 hHGF 基因片段的擴增

【參考文獻】：
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