背景和目的:肝纖維化（hepatic fibrosis）是慢性肝病發(fā)展為肝硬化的重要中間環(huán)節(jié),目前認(rèn)為,這個(gè)階段的肝臟病變是可逆的,但若沒有及時(shí)有效治療,則最終發(fā)展為不可逆轉(zhuǎn)的肝硬化、甚至肝癌。細(xì)胞移植成為治療肝纖維化的新策略。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）具有自我更新能力,在合適的微環(huán)境里可多系橫向分化,可以被誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞修復(fù)損傷肝組織。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（ Hepatocyte growth factor, HGF）是一種具有較強(qiáng)的抗纖維化和抗凋亡活性的多功能因子,參與機(jī)體多種器官組織的生長(zhǎng)、再生和重塑等過程。HGF可以調(diào)控BMSCs向肝細(xì)胞分化,促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。關(guān)于HGF基因修飾BMSCs是否促進(jìn)誘導(dǎo)其向肝樣細(xì)胞分化,目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了HGF基因的真核表達(dá)載體,利用HGF基因轉(zhuǎn)染BMSCs對(duì)其進(jìn)行基因修飾。研究HGF表達(dá)或增強(qiáng)其表達(dá)后對(duì)誘導(dǎo)BMSCs向肝樣細(xì)胞分化的影響,為進(jìn)一步研究HGF基因及BMSCs治療肝纖維化及以后的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:⑴Percoll密度梯度離心法聯(lián)合貼壁法從成人骨髓血中分離BM... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs生長(zhǎng)曲線

13圖 3 流式細(xì)胞儀鑒定 BMSCs 表面標(biāo)志Fig3 The surface marker of BMSCs were detected by flow cyctometry3.4 BMSCs 誘導(dǎo)分化3.4.1 BMSCs 的成脂誘導(dǎo)分化BMSCs 成脂誘導(dǎo)后，第 3 天部分細(xì)胞逐漸變?yōu)閳A形，鏡下觀察可見細(xì)胞立體感增強(qiáng)，7 天后可見胞漿內(nèi)出現(xiàn)折光性強(qiáng)的圓形脂滴，并相互融合，細(xì)胞由長(zhǎng)梭形變?yōu)閳A形或多邊形，誘導(dǎo) 10d，細(xì)胞形態(tài)變成多角狀，胞漿內(nèi)大量空泡。誘導(dǎo) 13油紅 O 染色顯示有脂肪細(xì)胞被染成紅色，提示有脂質(zhì)沉積。未誘導(dǎo)的細(xì)胞無此變化；說明 BMSCs 在體外有向成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化的能力（見圖 4）。3.4.2 BMSCs 的成骨誘導(dǎo)分化

8) 將柱子套在一干凈的 1.5ml 離心管中，加入 50μlTE 緩沖液至柱子的膜中央。室溫放置 2min，10,000×g 離心 1min 以洗脫 DNA。得到的質(zhì)粒溶液，-20℃保存?zhèn)溆�。紫外分光光度儀測(cè)定質(zhì)粒含量和純度，測(cè)得 A260/A280 在1.8-2.0 之間，含量大于 400ng/μl 滿足要求。2.1.5 pEGFP-N1 載體的提取pEGFP-N1 載體的擴(kuò)增及提取方法步驟同 2.1.3 和 2.1.4。-20℃保存?zhèn)溆谩?.2 hHGF 基因片段的擴(kuò)增

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3284267