目的:探討腸道超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道（HCN）中HCN2亞型在腸易激綜合征（IBS）大鼠腸道高敏感及腸道動(dòng)力異常中的作用,從而進(jìn)一步揭示IBS發(fā)病機(jī)理,為IBS的治療提供新的靶點(diǎn)。方法:（1）IBS模型大鼠自出生后第8d起,每天下午同一時(shí)間接受一次結(jié)直腸刺激（colorectal irritation,CI）,持續(xù)一周;正常對照組大鼠除了不行結(jié)直腸刺激外,其他過程與IBS模型組一樣。大鼠在出生后第8周,通過檢測腹外斜肌對結(jié)直腸擴(kuò)張的反應(yīng)來評估大鼠是否出現(xiàn)內(nèi)臟痛覺敏化;并通過腹部觸診與肉眼觀察肛門口的清潔度,剔除便秘與明顯腹瀉的大鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。（2）采用Western bolt方法檢測HCN2在IBS模型鼠腸道的表達(dá)。（3）腹腔注射給予0.1ml濃度為5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L的HCN2阻斷劑（尼氟酸）,觀察不同濃度的尼氟酸（Niflumic acid）對IBS模型組大鼠和正常對照組大鼠腹外斜肌放電的變化。（4）IBS模型大鼠鞘內(nèi)給予藥物ZD7288（HCN非選擇性抑制劑）阻斷HCN通道,30min后再腹腔注射50μmol/L尼氟酸,觀察其對腹外斜肌放電的... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

新生期結(jié)直腸擴(kuò)張刺激導(dǎo)致成年大鼠出現(xiàn)內(nèi)臟敏感性增強(qiáng)A&B：正常大鼠和IBS大鼠在40和60mmHg結(jié)直腸擴(kuò)張壓力下腹肌放電原始圖；C:大

CRD (n=8). *: p＜0.052 HCN2 在 IBS 大鼠直腸和回腸的表達(dá)水平高于正常大鼠腹外斜肌放電結(jié)果顯示 IBS 大鼠的內(nèi)臟痛較正常組明顯增強(qiáng)，而我們欲研究腸道 HCN2 通道與內(nèi)臟痛的關(guān)系。那么 IBS 大鼠與正常對照組大鼠腸道 HCN2 的表達(dá)情況是否有所不同呢？我們根據(jù)Western blot曝光結(jié)果采用Image J圖像處理軟件分析條帶的光密度值對蛋白條帶進(jìn)行定量分析，（HCN2 光密度值的相對比=HCN2 光密度值/actin 光密度值）。數(shù)據(jù)顯示：正常大鼠結(jié)直腸（colorectum）HCN2 光密度值的相對比值為 0.69±0.15（n=3）；IBS 大鼠結(jié)直腸（colorectum）HCN2 光密度值的相對比值為 1.09±0.04（n=3）；正常大鼠回腸（ileum）HCN2光密度值的相對比值為 0.49±0.07（n=3）；IBS 大鼠回腸（ileum）HCN2 光密度值的相對比值為 1.15±0.20（n=3）；IBS 大鼠結(jié)直腸和回腸 HCN2 的表達(dá)量分別高于正常大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05，見圖 2、圖 3）。

圖 3 大鼠回腸 HCN2 表達(dá)A：對照組和 IBS 組大鼠回腸 HCN2 蛋白表達(dá)水平的原始圖；B：對照組和 IBS 組大鼠回腸 HCN2 蛋白表達(dá)水平的統(tǒng)計(jì)圖（n=3）。*: p＜0.05Figure 3 The expression of ileum HCN2 in ratsA: The original diagrams of the expression level of ileum HCN2 protein in normal and IBSrats; B: The statistical chart of the expression level of ileum HCN2 protein in normal and IBS rats(n=3). *: p＜0.053 HCN2 抑制劑尼氟酸可降低 IBS 大鼠的痛覺敏感性為了研究 HCN 通道對內(nèi)臟痛的影響，腹腔給予 HCN 通道抑制劑，觀察 IBS大鼠和正常對照組大鼠內(nèi)臟痛的變化。用 DMSO 溶解 HCN2 抑制劑（尼氟酸/Niflumic acid）至濃度分別為 5μmol/L、10μmol/L、50μmol/L，腹腔注射不同濃度的尼氟酸，觀察正常對照組大鼠和 IBS 模型組大鼠腹外斜肌放電的變化情況，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：四組正常對照組大鼠（每組 n=6）分別腹腔注射 DMSO、尼氟酸

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HCN通道:生物學(xué)特性及疼痛相關(guān)作用[J]. 吳桐,劉鶴,張勵(lì)才.  生理學(xué)報(bào). 2014(04)
[2]行氣潤腸湯治療便秘型腸易激綜合征的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 陸迅,葉柏.  河南中醫(yī). 2013(04)
[3]腸易激綜合征內(nèi)臟高敏大鼠模型的建立及動(dòng)態(tài)評估[J]. 李燕舞,巫燕莉,王汝俊,杜群,莫國強(qiáng),郭鐘慧,何風(fēng)雷.  中藥藥理與臨床. 2012(05)
[4]Hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation channel subtypes differentially modulate the excitability of murine small intestinal afferents[J]. David Grundy.  World Journal of Gastroenterology. 2012(06)
[5]腹外斜肌放電測量在腸易激綜合征大鼠模型中的應(yīng)用[J]. 林國威,張睿,林春.  海峽藥學(xué). 2006(04)
[6]小鼠空腸cajal間質(zhì)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)[J]. 吳志軒,余保平,夏虹,徐龍.  胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志. 2005(05)



本文編號(hào)：3281628