一、研究背景和目的大腸桿菌 O157:H7（Enterohaemorrhagic E.coli O157:H7,EHEC O157:H7 O157:H7）是一種高度傳染性的食源性病原體,可引起嚴(yán)重的胃腸道疾病,對人類健康造成潛在的嚴(yán)重威脅。目前對EHEC O157:H7感染缺乏有效的治療方案,抗生素治療并沒有改善EHEC O157:H7引起的腸炎病程,甚至?xí)黾硬l(fā)腎溶血性尿毒綜合癥（Hemolytic-uremic syndrome,HUS）的危險。因此,目前亟需轉(zhuǎn)變策略,發(fā)展以預(yù)防為主的防控手段,以減少EHEC O157:H7感染帶來的疾病和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。鼠李糖乳桿菌GG株（Lactobacillus rhamnosus GG,LGG）活菌本身及其代謝物都是目前研究得最為深入的益生菌。我們先前的研究表明LGG培養(yǎng)上清液（LGG culture supernatant,LCS）可促進(jìn)新生大鼠腸道屏障功能的發(fā)育和完善,并增強(qiáng)其對大腸桿菌K1株感染的抵抗力;利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析技術(shù),我們鑒定出LCS中潛在的生物活性蛋白（命名為HM0539）,并發(fā)現(xiàn)其對腸屏障功能有益。但是HM053... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２不同處理條件下ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７對細(xì)胞黏蛋白表達(dá)的影響：（Ａ）黏蛋白ＰＡＳ定量分??析；（Ｂ）?ＭＵＣ２蛋白免疫印跡分析；（Ｃ）?ＩｍａｇｅＪ半定量分析ＭＵＣ２；?（Ｄ）?ＭＵＣ２免疫熒??光分析

第一章ＨＭ０５３９蛋白預(yù)防大腸桿菌０１５７：Ｈ７損傷腸道屏障的體外研究??方法同１．２．１１，直觀檢測ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表達(dá)情況。根據(jù)結(jié)果（圖３－Ａ，３－Ｂ；??圖３－Ｃ，?３－Ｄ）所示，免疫印跡實驗顯示ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７的感染降低了?ＨＴ－２９中??Ｚ０－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的表達(dá)，而經(jīng)ＨＭ０５３９的處理，可明顯抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７對??ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表達(dá)的下調(diào)作用；根據(jù)（圖３－Ｅ，３－Ｆ）所示，免疫熒光實驗顯示??ＮＣ組和ＨＭ０５３９組的ＨＴ－２９細(xì)胞間緊密連接完善，ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ線條清晰無??斷裂，呈“網(wǎng)格”狀；ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后，緊密連接發(fā)生斷裂；而經(jīng)ＨＭ０５３９??的處理可抑制ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７對ＺＯ－１、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ的破壞作用。以上的研宄結(jié)果??表明，ＨＭ０５３９可以抑制ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７對ＨＴ－２９細(xì)胞間緊密連接蛋白的破壞。??Ａ?一＿?Ｂ?蘭１．５］?丁?＊??—Ｈ：Ｄｌｎｌ??Ｃ?＾?Ｄ?／??Ｏｃｃｌｕｄｉｎ?一?？?｜｜?２。＿??Ｐａｃｌｉｎ?？????ｉｓ１５＇?ｉ?ｉｆａ?ＪＬ??＂ｖ?？：ｉＭ??＾?令／夕／??Ｅ?Ｆ??＿＿??ｉ?ＩＢ??圖１－３不同處理條件下ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７對細(xì)胞間緊密連接蛋白ＺＯ－ｌ和Ｏｃｃｌｕｄｉｎ表達(dá)的影響：??２４??

?領(lǐng)士學(xué)位論文???將小鼠隨機(jī)分成４組（ＮＣ組、ＨＭ０５３９組、ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７組、??ＨＭ０５３９＋ＥＨＥＣＯ１５７：Ｈ７組），每組１０只，其處理方法同１．２．４。小鼠在感染ＥＨＥＣ??０１５７：Ｈ７后表現(xiàn)出一系列的癥狀，如食欲低下、精神萎靡、體重明顯下降，而且??ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７組在攻毒后第一天開始出現(xiàn)死亡。我們發(fā)現(xiàn)ＨＭ０５３９降低了攻毒??小鼠的死亡率和抑制體重下降（圖２－１Ａ，２－１Ｂ）。我們檢測ＨＭ０５３９對攻毒小鼠??小腸的影響，發(fā)現(xiàn)ＨＭ０５３９抑制了?ＥＨＥＣ?０１５７：Ｈ７誘導(dǎo)的空腸絨毛萎縮和隱窩??膿腫（圖２－１Ｃ、Ｄ）。??Ａ?Ｂ?０６??１００??？?■?，？?ＮＣ?？?．———?，??Ｉ?＊?ＨＭ０６３９?｜?０４．?Ｔ??Ｉ?Ｌ．Ａｍ?＾??卜?Ｉ?〇，?■?Ｕ??５?ｆ?＾??°�。�?丁丁１?令?／?妒，??Ｃ?Ｄａｙｓ?Ｄ??－憂�。∽儯�?－??｜?｜｜｜?（－?舊丨丨５外丨丨丨丨「??動麵纖麵??圖２－１不同處理條件下小鼠感染癥狀及腸道形態(tài)的變化：在ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７誘發(fā)的小鼠小??腸結(jié)腸炎的病理過程中，ＨＭ０５３９減輕了臨床癥狀和腸道炎癥。ＥＨＥＣ０１５７：Ｈ７感染后第７??天，小鼠（ｎ＝?１０／組）的存活率（Ａ）和體重變化（Ｂ）。用ＨＥ染色的空腸的代表性圖像（２０〇ｘ），??比較各組小鼠空腸的絨毛變化（Ｃ）和隱窩膿腫（Ｄ）。??Ｆｉｇ?２－１?Ｔｈｅ?Ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ａｎｄ?ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｉｎ?ｍｉｃｅ?ｕｎｄｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｔ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鼠李糖乳桿菌培養(yǎng)上清液通過抑制NF-κB通路預(yù)防大腸桿菌性腦膜炎[J]. 曾慶,何肖龍,肖漢森,杜蕾,李雨靜,陳樂程,田慧文,黃勝和,曹虹.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017(01)
[2]嗜酸乳桿菌抑制大腸桿菌O157:H7腸道定植體內(nèi)外實驗[J]. 林如琴,吳嫻波,張益多,李亞文,吳宇樺,范宏英.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2016(16)
[3]Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大腸桿菌黏附和侵襲的能力[J]. 邱嘉文,何肖龍,張寶,杜蕾,曾慶,李森,熊歡歡,龍敏,羅軍,曹虹.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(06)
[4]浙江省首例腸出血性大腸桿菌O157∶H7菌株的分離和鑒定[J]. 孟冬梅,孫建榮,許珂,張燕琴,潘勁草.  中國公共衛(wèi)生. 1999(04)

博士論文
[1]鼠李糖乳桿菌代謝產(chǎn)物預(yù)防新生大鼠大腸桿菌感染的效果和機(jī)制研究及有效成分分析[D]. 何肖龍.南方醫(yī)科大學(xué) 2017

碩士論文
[1]雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片通過提高腸道防御功能預(yù)防大腸桿菌K1株感染[D]. 曾慶.南方醫(yī)科大學(xué) 2017



本文編號：3239500